酶法提取鲍鱼内脏蛋白质工艺的研究

以鲍鱼内脏为原料,采用酶法工艺提取鲍鱼内脏中蛋白质。在单因素试验的基础上通过响应面试验探讨了料液比、酶的添加量、pH值、提取温度对总氨基酸态氮含量的影响,确定酶法提取鲍鱼内脏蛋白质的最佳工艺条件。结果表明,酶法提取鲍鱼内脏蛋白质的最佳工艺条件是料液比为1∶4（g∶mL）,胰蛋白酶的添加量为0.15%,pH值为7,酶解温度为 55 ℃,酶解反应时间为4 h,此时总氨基酸态氮含量为163 mg/100 mL。     

酶法制备联合Plastein反应修饰牡蛎ACE抑制肽工艺优化

以牡蛎为原料,采用酶解联合Plastein反应修饰的方法,获得高活性血管紧张素转换酶(angiotensin converting enzyme,ACE)抑制肽。以ACE抑制率和水解度为指标,对比胃蛋白酶、木瓜蛋白酶、碱性蛋白酶、中性蛋白酶、胰蛋白酶这5种蛋白酶对牡蛎肉的酶解效果,筛选出木瓜蛋白酶最佳。通过单因素试验和正交试验对酶解工艺进行优化,得到最佳酶解工艺为料液比1∶8(g/m L)、加酶量2.0%、温度65℃、时间1.0 h、pH6.0,此条件下酶解产物的ACE抑制率可达到63.30%,在此基础上采用Plastein反应对酶解产物进行修饰,以游离氨基酸减少量和ACE抑制率为指标,考察反应过程中酶种类、底物质量分数、加酶量、时间和温度对修饰结果产生的影响。通过该反应的修饰,得到选用中性蛋白酶、底物质量分数40%、加酶量1.0%、温度30℃、时间2.5h、pH7.0时,ACE抑制率最高可达82.31%,比修饰前提高了19%。     

酶解山核桃蛋白制备降血压肽的工艺

采用碱性蛋白酶对山核桃蛋白进行水解,以水解度和水解物的ACE抑制率为考察指标,考察酶解pH值、酶解温度、酶解时间、加酶量4个因素的影响,并在此基础上通过响应面组合优化试验,确定得到ACE抑制率最佳的条件为酶解pH8.2、酶解温度56℃、酶解时间4h、加酶量5880U/g(以底物计),此时水解度为29.03%,水解物的ACE抑制率可达到72.48%。     

响应面法优化猪血红蛋白制备ACE抑制肽的酶解工艺条件

以猪血红蛋白为原料,采用胃蛋白酶水解猪血红蛋白制备ACE抑制肽。以体外ACE抑制率和水解度为指标,通过单因素试验对酶解温度、酶解pH值、底物质量浓度、加酶量、酶解时间等酶解工艺参数进行研究,并用响应面法优化酶解工艺,建立二次多项数学模型。结果表明,胃蛋白酶水解猪血红蛋白制备ACE抑制肽的最佳工艺参数为酶解温度37.60℃、酶解pH 1.98、底物质量浓度4.98g/100mL、加酶量3.04%、酶解时间4h,酶解产物的最大ACE抑制率为70.09%。     

响应面法优化酶解花椒籽蛋白制备降血压肽工艺

利用响应面法优化酶解花椒籽蛋白制备降血压肽的工艺条件。采用不同蛋白酶水解花椒籽蛋白,以酶解物对血管紧张素转换酶（angiotensin converting enzyme,ACE）抑制率为指标,筛选出制备花椒籽蛋白降血压肽的最佳蛋白酶。在单因素试验基础上,根据Box-Behnken中心组合试验设计原理,考察酶解时间、加酶量、酶解温度和pH值对血管紧张素转换酶抑制率的影响。结果表明：回归模型能较好地反映各因素水平与响应值之间的关系,并获得酶解花椒籽蛋白制备降血压肽的最佳工艺条件为：底物质量浓度3 g/100 mL、酶解时间4.9 h、加酶量10 200 U/g、酶解温度37.4 ℃、pH 6.9,在此条件下,所得酶解产物的ACE抑制率为68.00%。     

利用鲍鱼性腺制备ACE抑制肽

采用碱性蛋白酶和木瓜蛋白酶分步酶解鲍鱼性腺蛋白,以酶解产物分子质量及ACE抑制率为考核指标,用正交试验及响应面分析法对其制备工艺参数进行优化。结果显示,第1步碱性蛋白酶最佳工艺参数为反应p H 8.5,反应温度55℃,加酶量0.5%,酶解时间6 h;第2步木瓜蛋白酶最佳工艺参数为反应p H 6.5,反应温度57℃,酶解时间36 min,加酶量1.5%。将酶解产物用10 ku及3 ku膜超滤,采用凝胶过滤色谱法测得超滤组分中分子质量在1 ku以下的小肽含量为98.5%,IC50为0.44 mg/m L。本研究制备的低分子质量、高活性ACE抑制肽,为鲍鱼加工下脚料的高值化利用提供了理论参考。     

杜仲翅果籽粕蛋白酶解制备ACE抑制肽的工艺优化

以杜仲翅果籽粕蛋白为原料,采用复合酶法酶解制备ACE抑制肽。考察pH值、酶用量、酶比例、底物质量分数、酶解时间、酶解温度对ACE抑制率和水解度的影响。在单因素试验基础上采用响应面法优化ACE抑制肽制备工艺。结果表明,ACE抑制肽酶解制备最佳条件为底物质量分数6%(m/V),pH 9.4,酶用量13 300U/g,酶比例(碱性蛋白酶∶胰蛋白酶)2∶1,酶解时间4.4h,酶解温度44℃。该条件下,ACE抑制率达67.91%。     

葵花籽多肽的制备及其降压活性研究

试验以低温脱脂葵花籽粕为原料,进行脱脂和脱绿原酸处理后,用碱性蛋白酶制备葵花籽多肽。以水解度和ACE抑制率为评价指标,对底物浓度、加酶量、酶解温度、酶解时间和pH值进行单因素试验,在此基础上采用响应面试验优化碱性蛋白酶制备葵花籽多肽的最佳水解工艺。结果表明:底物浓度为15g/mL、加酶量为3 700U/g、酶解温度为56℃和pH值为8.2的条件下水解3h,ACE抑制率可达63.74%。     

球磨辅助酶解制备南瓜籽ACE抑制肽

以南瓜籽蛋白为原料,通过球磨预处理辅助酶解法制备血管紧张素转换酶（ACE）抑制肽。以ACE抑制率和水解度为评价指标,对蛋白酶进行筛选。采用单因素试验研究球磨时间、酶解时间、底物质量浓度、pH和酶解温度对酶解产物ACE抑制率和水解度的影响,在此基础上,以ACE抑制率为考察指标,采用响应面法对球磨辅助酶解工艺条件进行优化。结果表明：球磨预处理可显著提高南瓜籽蛋白的酶解效率;最佳球磨辅助酶解工艺条件为选用碱性蛋白酶、球磨时间6 min、酶解时间10 h、底物质量浓度0.08 g/mL、pH 8.5、酶解温度55 ℃,在此条件下所得ACE抑制肽的ACE抑制率可达(86.65±0.55)%。     

酸枣仁ACE抑制肽酶解工艺优化

本试验以脱脂后的酸枣仁渣通过碱溶酸沉法提取得到的酸枣仁蛋白为研究对象,以血管紧张素转化酶(ACE)抑制率和水解度为指标,筛选复合酶种类,采用响应面分析法,以中性蛋白酶/碱性蛋白酶比例、pH、底物浓度、酶解温度、酶解时间为试验因素,优化酸枣仁ACE抑制肽最佳酶解工艺参数。结果表明:筛选出中性蛋白酶和碱性蛋白酶作为复合酶,最适酶添加量确定为6000 U/g,5个因素对ACE抑制率和水解度的影响由大到小的顺序为:酶解温度、酶解时间、pH、中性蛋白酶/碱性蛋白酶比例、底物浓度。通过拟合方程分析,得到酸枣仁ACE抑制肽酶解的最佳工艺条件为:中性蛋白酶/碱性蛋白酶比例为2.1:1、酶解温度为54 ℃,底物浓度为3.1%,pH为7.5,酶解时间为62 min。在此条件下,复合酶解酸枣仁蛋白酶解液的实际ACE抑制率和水解度分别为（79.46%±0.49%）和（31.45%±0.85%）,与理论值接近。制备得到酸枣仁ACE抑制肽与阳性对照组卡托普利对比,酸枣仁ACE抑制肽的ACE抑制率大小为（79.46%±0.49%）,与卡托普利的ACE抑制率偏差为（19.28%±0.12%）,证明酸枣仁ACE抑制肽具有显著降压效果。本研究证明了酸枣仁蛋白通过酶解有效得到ACE抑制肽并优化其酶解工艺,旨在为酸枣仁渣废物再利用提供参考方向和理论依据。     

酶解斑点叉尾鮰内脏制备血管紧张素转换酶抑制产物

以斑点叉尾鮰内脏为原料,血管紧张素转化酶抑制率为指标,筛选出木瓜蛋白酶为酶解的最适蛋白酶,并研究该酶的酶解时间、酶添加量、初始pH 值、酶解温度、液料比(mL/g)对酶解产物抑制活性的影响,通过正交试验优化得到了具有ACE 抑制活性的酶解产物的最佳工艺条件。结果表明：最优酶解条件为初始pH7.5、酶解温度55℃、液料比2:1(mL/g),酶解产物ACE 抑制率为72.34%。     

响应面法优化固相酸水解鲍鱼脏器多糖工艺

为了研究鲍鱼脏器多糖固相酸(732#阳离子交换树脂)水解条件与多糖水解率之间的关系及其降解产物的分子结构,首先通过单因素实验确定树脂用量、水解时间和水解温度对鲍鱼脏器多糖水解率的影响,然后应用响应面法对鲍鱼脏器多糖水解条件进行设计优化,最后采用 Sephadex G-25 凝胶柱对鲍鱼脏器寡糖混合物进行分离纯化,并使用红外光谱分析对寡糖结构进行测定。结果表明:对多糖水解率的影响程度依次是水解温度、水解时间和树脂用量,最佳水解条件为:树脂用量40 g,水解时间3 h,水解温度70 ℃。在此条件下进行3次平行验证试验,鲍鱼脏器多糖水解率为80.69%,接近且略高于预测值,表明应用响应面法优化鲍鱼脏器多糖的水解条件是可行的。凝胶层析法纯化结果表明,鲍鱼脏器寡糖混合物中有两个组分,且第1组分占大多数。红外光谱分析表明,鲍鱼脏器寡糖为α-型糖,含有吡喃环。鲍鱼脏器多糖固相酸水解工艺研究,提高了鲍鱼脏器加工的经济效益,为鲍鱼脏器的高值化利用提供了参考。     

玉米ACE抑制肽水解酶的筛选及酶解条件的优化

酶解玉米蛋白粉(蛋白含量为70%)制备血管紧张素转换酶(angiotensin converting enzyme,ACE)抑制肽,通过酶的筛选实验确定了AS.1398中性蛋白酶作为最佳水解酶,在此基础上,进行pH、温度、底物浓度、加酶量[E]∶[S]的单因素实验,并且确定4种因素的参数值进行L9(34)正交实验,采用体外检测ACE抑制率和肽得率为指标来确定最佳工艺条件。研究结果表明,选用AS.1398中性蛋白酶作为水解酶,水解时间在2h时,pH7.0,温度50℃,底物浓度5%,加酶量[E]∶[S]为1.5∶100,得到的最大ACE抑制率为85.65%,肽得率为58.64%。     

泥鳅蛋白酶解工艺条件的优化

以泥鳅蛋白为原料,酶解制备具有降血压活性的短肽。从9种蛋白酶中筛选出菠萝蛋白酶的酶解液具有较高降压活性,IC50值为0.65mg/mL。在单因素试验的基础上,采用和Box-Behnken和响应面法(RSM)优化了酶解泥鳅蛋白的工艺条件,以ACE抑制率为指标,探讨酶与底物的比值([E]/[S])、酶解温度和酶解时间对ACE抑制率的影响。结果表明：制备降血压肽的最佳酶解条件为[E]/[S]4.9‰、酶解时间5.9h、酶解温度54.4℃、pH6.5、底物质量分数30%,该条件下制备的泥鳅蛋白酶解产物的ACE抑制率为88.92%。     

响应曲面法优化酶解条件制备乳源ACE抑制肽

采用响应曲面法优化胰蛋白酶(PTN6.0S)酶解酪蛋白酸钠的工艺条件,制备高活性的血管紧张素转换酶(ACE)抑制肽。利用准确度更高的RP-HPLC法测定酶解产物的ACE抑制率,通过单因素和响应面试验设计,分别考察pH值、温度、时间、底物质量浓度、酶与底物比等因素对ACE抑制肽活性的影响。结果显示：响应曲面法优化酶解条件得到数学模型为：抑制率/%＝－11.21347＋4.32902A－1.45953B＋3.42928C－0.20303D＋0.050303AB＋0.047422AD＋0.14955BC＋0.12486BD－0.054526A2－0.079754B2－0.53587C2－0.28096D2,确定最佳工艺条件为pH7.0、温度52.31℃、时间19.44h、底物质量浓度5.91g/100mL、酶与底物比8.37‰,此时ACE抑制率达97.11%。     

益生菌发酵制备金针菇血管紧张素转化酶抑制肽

为了获得高活性的金针菇血管紧张素转化酶（ACE）抑制肽,该研究对益生菌发酵制备金针菇ACE抑制肽的工艺条件进行了优化,并采用超滤法对ACE抑制肽进行了分级分离和活性鉴定。试验以ACE抑制率为评价指标,对枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）、酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）和黑曲霉（Aspergillus niger）三种益生菌进行了筛选,优选出沉淀分离活性肽的最适pH,然后采用单因素和响应面设计对发酵条件进行了考察。结果表明,确定枯草芽孢杆菌为最适菌种;沉淀ACE抑制肽的最适pH为6;最佳发酵条件为蒸馏水与金针菇粉液料比5∶1（mL∶g）、发酵时间16 h、发酵温度37 ℃、金针菇粉用量35 g/500 mL三角瓶,于此条件下ACE抑制率实测值为（51.25±1.02）%;截留分子质量＜3 kDa的ACE抑制肽活性最强。     

酶解法制备牡丹籽ACE抑制肽及其稳定性

以牡丹籽粕为原料,用酶解法制备ACE抑制肽及其稳定性研究。以血管紧张素转化酶(angiotension converting enzyme,ACE)抑制率为指标,从中性蛋白酶、碱性蛋白酶、胃蛋白酶、胰蛋白酶和风味蛋白酶中筛选出最佳ACE抑制肽制备酶为中性蛋白酶。以单因素实验为基础,进行酶解条件的响应面优化,结果显示牡丹籽ACE抑制肽酶法制备的最优条件为:底物浓度2%,pH7.5,加酶量7200 U/g,酶解温度43℃,酶解时间2 h,此时酶解液ACE抑制率可达到86.93%±2.38%。此外,稳定性分析显示该ACE抑制肽具有良好的温度和酸碱稳定性,在温度20~100℃与pH2~10的环境下,ACE抑制活性没有显著变化(P>0.05),并且经过体外胃肠模拟消化后,ACE抑制活性变化不显著(P>0.05),仍能保持良好的抑制活性。     

响应面法优化黄粉虫蛋白制备ACE抑制肽的条件

以黄粉虫蛋白粉为原料,利用酶解技术对制备血管紧张素转换酶（angiotensin converting enzyme,ACE）抑制肽进行优化。通过单因素及响应面试验,确定木瓜蛋白酶的酶解工艺,利用酶标法测定酶解产物的ACE抑制率,研究底物质量浓度、加酶量、pH值、酶解时间、酶解温度对ACE抑制肽活性的影响。结果表明：当底物质量浓度为7 g/100 mL、加酶量1%、pH 6.5、酶解时间7 h、酶解温度55 ℃时,黄粉虫蛋白粉酶解产物的ACE抑制率达到58.86%。