DNA条形码技术在深加工动物制品源性成分鉴定中的应用研究进展

DNA条形码被认为是一种强大、非定向、准确特异、低成本且适用广泛的方法,是分子生物学领域研究物种鉴定的热点技术。其基于DNA分子水平和通用引物扩增的鉴定方式规避了传统鉴别方法的不足,又超脱于许多分子检测方法只能定向检测的局限,现已被广泛应用于生态环境、医疗卫生、食品安全等各个领域。本文介绍了DNA条形码的基本原理、发展进程和研究现状,总结了其在深加工动物制品中的应用情况,包括在动物源性中药材、海产品、肉及肉制品、动物源性保健品以及皮革制品、动物标本等源性成分鉴别方面的应用,最后对DNA条形码技术鉴定物种的优势和不足以及发展趋势作了总结和展望。     

皮革的红外光谱与拉曼光谱鉴别方法

皮革的材质鉴别是皮革及皮革制品检测中的基础项目,现行标准中鉴别皮革类别的主要方法有感官法、显微镜法和扫描电镜法,研究中的方法还有红外光谱法、DNA鉴别法等。研究使用红外光谱法和拉曼光谱法鉴别人工革和天然皮革,结果表明红外光谱可用来区分天然皮革、聚氯乙烯人工革和聚氨酯人工革,使用ATR附件采集样品的红外光谱法方便快捷;拉曼光谱也可用来区分天然皮革、聚氯乙烯人工革和聚氨酯人工革,采集谱图过程方便快捷且不受样品中水分的影响,谱峰尖锐,易于识别。     

石斛基因组DNA提取方法比较研究

目的：比较3种基因组DNA提取试剂盒对提取富含多糖多酚类物质的铁皮石斛和霍山石斛鲜叶及冻叶的提取效果。方法：对提取的DNA进行纯度及产率检测、电泳质量分析及ITS2 PCR扩增效率检测。结果：市售基于蛋白酶K消化法的试剂盒不适用于石斛DNA提取；基于改良CTAB法的试剂盒更适用于需要较高DNA模板量的石斛鲜叶的DNA提取；基于改良SDS法的试剂盒更适用于石斛冻叶的DNA提取，该法提取的鲜叶DNA完整性最佳，更适用于对DNA完整度要求较高的DNA大片段的分析研究。结论：基于改良CTAB法和改良SDS法的试剂盒提取的石斛鲜叶及冻叶的基因组DNA均适用于常规分子检测。     

氨基化二氧化硅颗粒应用于大豆油DNA提取研究

建立了以氨基化二氧化硅为载体提取大豆油DNA并进行转基因成分检测的方法。结果表明：利用氨基化二氧化硅法富集提取大豆毛油中的DNA质量浓度高于国标法;以氨基化二氧化硅法提取的大豆毛油DNA为模板成功扩增出了大豆内源基因、外源基因片段和转基因调控元件,而精炼油DNA未扩增出。氨基化二氧化硅法只适用于大豆毛油DNA的提取,而不适用于精炼油。     

大豆油DNA提取及检测研究进展

大豆油是我国第一大植物用油,大豆原料多具有转基因特性。科学合理的标识制度可以保护消费者对转基因大豆油的知情权和自主选择权,促进大豆油市场健康有序发展。标识制度的完善依赖于精确、灵敏的转基因检测技术。在转基因检测中,DNA检测相较于化学、蛋白等方法特异性强、灵敏度高,可适用于深加工食品,如精炼大豆油的转基因检测。为提高大豆油DNA检测效率,文章对DNA水相提取、纯化和PCR检测过程进行系统阐述,将其有益经验进行总结,并概述了油脂精炼工艺对大豆DNA的影响规律。     

果蔬汁饮料DNA提取方法的比较研究

以澄清型果蔬汁为实验材料,用3种DNA提取方法(普通CTAB法、试剂盒法、改良试剂盒法)提取果蔬汁中DNA片段。以紫外分光光度计测量吸光值计算DNA的纯度和得率,以内源rbcL基因为目标基因建立了PCR扩增技术体系。实验结果表明:试剂盒法和改良试剂盒法均适用于果蔬汁饮料DNA的提取,其中改良试剂盒法提取DNA的纯度和产率要高于另外2种方法,该方法为从果蔬汁加工品提取高质量的DNA并进行分子检测提供技术参考。     

15种常见食(药)用菌的3种总DNA提取方法比较研究

本文研究了15种主要食(药)用菌共16个样品的3种总DNA提取方法之比较，它们分别是CTAB法、食品DNA提取试剂盒法和QIAGEN试剂盒法。提取结果分别经过核酸蛋白分析仪、电泳以及RAPD检测。紫外检测结果表明3种方法提取到的总DNA质量均不理想，电泳结果表明3种方法均能提取出小平菇、红菇、香菇、双孢蘑菇、竹荪、黑木耳、姬松茸等7种食(药)用菌总DNA，RAPD检测结果表明CTAB法适用于所有15种食(药)用菌提取用于PCR的总DNA。根据以上结果，我们认为可以选用CTAB法作为在检测这些食(药)用菌的转基因成分时的总DNA提取方法。     

绝对定量PCR快速检测豆豉沙门菌

根据沙门氏菌16srDNA序列设计PCR引物,通过比较3种不同的基因组DNA提取方法,提取待检样品总DNA,进行多基因定量PCR检测.结果表明,该方法简单快速且灵敏度高,在豆豉中的检测灵敏度可达10 cfu/g,整个检测时间在4h以内.说明本方法对检测豆豉中沙门氏菌具有特异性高、灵敏、快速等特点,适用于快速、准确地检测豆豉中沙门氏菌的需要.     

用于转基因检测的番木瓜基因组DNA提取方法的比较

本研究以番木瓜果实的不同部位,果皮、果肉和种籽为材料,比较了改进CTAB法和试剂盒法两种提取基因组DNA的方法。分别对植物叶绿体基因rbcL和番木瓜特异基因Papain进行了普通PCR和荧光PCR扩增,检验提取DNA的质量。结果显示改进CTAB法和试剂盒法都能提取得到纯度较高的DNA,适合普通和荧光PCR反应的要求,适用于外源基因的检测。改进CTAB法提取的DNA浓度要高于试剂盒法,而试剂盒法提取DNA所用的时间较短,更为方便,但成本较高。同时材料取样部位最好是果皮和果肉,果皮和果肉为材料提取得到的DNA纯度很高,适用于荧光PCR的要求。     

基于荧光定量PCR的兔毛定性检测方法

建立一种特异、灵敏的兔毛定性检测方法,并对方法进行评价,为准确有效检测兔毛方法的建立提供依据。文章针对兔线粒体COXⅠ基因序列进行引物探针设计,经Blast软件对相似序列搜索后,筛选出一套最优与常见禽畜无交叉反应的引物;采用常见动物纤维鸭绒、鹅绒、绵羊毛、山羊绒、牦牛绒、羊驼毛DNA进行特异性实验;对提取的兔毛DNA梯度稀释后分别进行荧光PCR扩增,确定检测方法的灵敏度;对引物进行3次重复性试验,验证其重复性。结果表明:设计的针对兔线粒体COXⅠ基因的引物及探针仅对兔毛有扩增,而对其他对照及阴性对照均无扩增。该荧光PCR方法特异性强、灵敏度高、重复性好,可以快速准确地定性检测纤维制品中的兔毛成分。     

非洲猪瘟病毒核酸检测的阳性DNA获取方法研究

目的:建立非洲猪瘟病毒核酸检测过程中所需阳性DNA片段的获取方法。方法:通过PCR和荧光定量PCR技术,使用非洲猪瘟病毒核酸检测试剂盒来确定阳性样品,根据标准方法获得该阳性样品中的目的基因序列,并通过测序确认,再利用基因克隆和基因合成的方法得到含有该阳性对照的质粒。结果:文章成功获得了非洲猪瘟病毒核酸检测所需阳性DNA片段,且通过序列比对发现其位于该病毒P72蛋白编码基因序列中的保守区域。结论:文章提供的方法不仅能够获得非洲猪瘟病毒核酸检测所需的阳性DNA片段,同时还适用于其他动植物源性检测和转基因检测所需的阳性DNA的获取。     

PCR法快速检测超市生鲜牛肉卷和腌制牛肉片

通过扩增线粒体DNA片段,建立了检测生鲜牛肉和腌制牛肉片中掺入猪肉的快速检测PCR的方法。反应程序为:94℃预变性4min,然后经过30个循环,每个循环为94℃变性30s,退火温度为59.4℃反应30s,延伸温度72℃反应30s,30个循环后72℃保温延伸7min,通过电泳进行检测。经过多次实验,结果表明:所选定的引物只有在同一种属模板DNA存在的情况下才会发生PCR扩增,该方法特异性强、稳定、灵敏度高。本方法简单快速,无需酶切,适用于样品较多的检测。     

上海畜产进出口公司召开防霉会议

上海畜产进出口公司总经理室和防霉领导小组,于今年3月27～28日在江苏省常熟市召开了皮革制品防霉会议。出席会议的有公司皮革制品5个分部,储运科负责人以及5个部所属业务皮件、皮革、皮箱、革皮、票夹生产厂共38家78位     

大豆转基因检测中DNA提取方法的比较研究

为筛选出用于大豆DNA提取的适宜方法,分别使用Bayer法、DuPont法、Monsanto法、Qiagen和Tiangen试剂盒法提取大豆子粒DNA,并通过紫外分光光度法、琼脂糖凝胶电泳法与实时荧光聚合酶链式反应分析DNA质量。结果显示:Bayer法提取的DNA含有较多杂质,抑制实时荧光聚合酶链式反应;Monsanto法提取的DNA纯度差且得率低,不符合检测要求;DuPont法、Qiagen与Tiangen试剂盒法能提取到纯度好、得率高、完整性好的DNA,符合实时荧光聚合酶链式反应的检测要求,但是Qiagen试剂盒法成本过高。因此,DuPont法与Tiangen试剂盒法适用于大豆转基因检测中的DNA提取。     

大体积肉中DNA提取方法的优化

目的优化一种从大体积肉类中提取DNA的方法。方法从大组织肉上多点取样,用组织粉碎机打碎,称取10 g肉加入90 m L PBS缓冲液和450μL蛋白酶K,60℃消化至澄清后,混匀,取200μL消化液用试剂盒进行DNA提取;再与常规试剂盒方法提取的DNA在同条件进行实时荧光PCR及琼脂糖凝胶电泳验证。结果 2种方法提取DNA的Ct值差异在0.5个循环以内,无显著性差异(P0.05);电泳结果显示,2种方法所扩增的为同一产物。结论该方法取样具有代表性,可适用于大体积肉类掺假检测或动物源性成分检测中的DNA提取。     

一种适用于乳制品基因组DNA快速提取方法的研究

目的对比NaOH裂解法、PBS裂解法以及直接煮沸法3种方法提取乳制品中核酸的提取效果,优化提取条件,确定一种更适用于现场检测、简便快速的的乳制品DNA快速提取技术。方法以牛奶、水牛奶、牦牛奶、羊奶、骆驼奶、以及驴奶6种常见的乳制品为材料,分别用NaOH裂解法、PBS裂解法以及直接煮沸法3种提取方法提取乳制品中的DNA,并根据裂解液用量和裂解时间进行优化,通过PCR扩增和琼脂糖凝胶电泳分析,检测DNA提取的质量和灵敏度。结果 NaOH裂解法能够提取所有物种的乳制品DNA,而且可以在最佳裂解条件下提取模拟掺假混合乳的DNA进行检测,发现其检测限能达到1%的牛奶含量。结论该方法取样量小,成本低,在15 min内即可完成快速提取,为实验室乳制品DNA定性或定量鉴别,以及乳制品的现场掺假鉴别提供了一种快速灵敏低成本的样品前处理技术。     

皮革知识点滴

在购买皮革制品时,常听到有人间“这是皮的还是革的?”,这里所说的皮是指真皮制品,而所说的革是指仿制品。从专业角度看,皮是指生皮,是从动物体表剥下的一层组织;革是指皮革,是生皮经过一系列的加工后所制成的革。两者叫法虽然不同,只要能区别开皮革制品与仿革制品也就可以了, 皮革的品种有许多,单就制作皮鞋帮面所用的鞋面革来说,也分成正面革、修面革、绒面革、二层面革几大类。     

广州、东莞、深圳皮革市场消费群各有侧重 广州统率全国 东莞深圳服务地区

广州、东莞、深圳作为珠三角乃至全国最重要的皮革制品生产基地，对鞋用革、包袋革、服装革、沙发革、汽车用革有着巨大的市场需求。     

磁珠法提取植物蛋白饮料DNA

目的 建立一种快速、高效的植物蛋白饮料基因组DNA提取方法并应用于植物蛋白饮料中植物源性成分的检测。方法 以豆浆、豆奶、芝麻糊、花生牛奶、榛子乳5种植物蛋白饮料为研究对象, 建立利用硅羟基磁珠提取植物蛋白饮料DNA的方法, 通过分析所提取DNA的浓度和纯度, 实时荧光PCR扩增效率, 并与十六烷基三甲基溴化铵法(cetyltrimethylammonium ammonium bromide, CTAB)比较, 综合评价磁珠法提取植物蛋白饮料的效果。结果 大部分样品磁珠法提取的DNA浓度比CTAB法高, ODA260/A280均大于1.70。 结论 磁珠法提取的DNA纯度较高, 杂质少, 能满足植物蛋白饮料源性成分的分析要求, 尤其适用于大豆类蛋白饮料的DNA提取, 为快速、高效获取质量好的植物蛋白饮料基因组DNA提供参考。     

标准

广州市纤检院成功扩项95个标准 8月21日至23日．广州市纤检院顺利通过了中国合格评定国家认可委员会（CNAS）的“三合一”复评审及扩项评审．成功扩项95个标准．实验室能力得到极大提升。目前,该院检测能力范围涵盖了整个纺织产业链．包括纤维及纤维制品、纱线、纺织品、服装、皮革制品、鞋类、