烟草花叶病毒病的分子鉴定

为了建立烟草病毒病的分子鉴定体系,采用TMV,CMV和PVY3种病毒的检测引物对烟草花叶病样品进行了RT-PCR扩增,并从核酸水平上对病毒基因序列进行了分析。RT-PCR鉴定结果显示,该病害病原为TMV,测序结果显示扩增产物长923bp,序列比对后发现该序列与TMV3个中国分离物的同源性高达97%,序列分析结果表明该段序列位于TMV基因组3'末端,包含部分MP基因、完整CP基因和3'端非编码区。对CP基因进行了系统进化分析,且该序列已成功登陆GenBank。     

山东烟区首次发现番茄斑萎病毒侵染

为确定番茄斑萎病毒（TSWV）在山东烟草上的侵染,基于GenBank中已有的TSWV基因组序列设计该病毒特异性引物,通过总RNA提取,RT-PCR扩增,全基因组序列测定和拼接分析等,结果表明,山东临沂疑似病样中含有TSWV,该TSWV分离物具有3条RNA链,大小分别为8911、4773和2971 bp,与国内已报道的其他TSWV分离物核酸序列同源性均在99.0%以上,蛋白氨基酸序列同源性均在98.0%以上。系统进化分析结果显示,该分离物与已报道的TSWV云南分离物聚类到同一分支中,推测山东烟区中的TSWV可能由云南烟区通过带毒介体的迁入而传入。该研究为山东烟区TSWV的发生流行溯源和该危险性病毒病的精准测报及防控提供科学依据。     

烟草PVYN辽宁分离物全序列测定与分析

利用引起烟草脉坏死病的马铃薯Y病毒脉坏死株系辽宁分离物（Potato virus Y-vein necrosis strain Liaoning isolate, PVYN-LN）,以GenBank中已有的PVY全序列为基础,设计特异引物。通过总RNA提取、RT-PCR、3’RACE和5’RACE扩增及序列测定,测得PVYN-LN全长基因组序列（NCBI登录号为JQ971975）包括9714个碱基(含PolyA尾),整条序列仅包含一个由9186个碱基组成的开放读码框（ORF）,编码一条包含3061个氨基酸的多聚蛋白。对所得序列进行BLAST,利用MEGA软件对所测得的PVYN-LN全序列与GenBank中已有的PVY全序列及氨基酸进行系统进化分析,发现PVYN-LN分离物与已报道的PVYN株系具有较高的进化亲缘关系,该分离物属于PVYN株系。序列重组分析软件RDP4分析,该序列无重组。     

烟草脉带花叶病毒云南分离物全基因序列分析

应用电子显微镜负染色法在烟草叶片斑驳、脉间褪绿病样中观察到马铃薯Y病毒属病毒粒子,通过马铃薯Y病毒属兼并引物扩增获得目的片段,序列分析表明病样中病原物为TVBMV,命名为YN-YX-TVBMV。根据GenBank已知序列,分别合成引物,对YN-YX-TVBMV进行克隆及测序,得到一条6047 bp的不完整的病毒基因组核苷酸序列,将该序列与国内报道的TVBMV全基因序列进行对比分析发现该分离物与报道的TVBMV其他分离物具有明显的地域分布差异,即云南获得的分离物均独立聚为一簇。     

云南烟草中烟草花叶病毒株系比较与分析

利用TAS-ELISA方法对采自云南不同烟草种植区的710份花叶病样进行检测,其中546份样品与TMV抗体呈阳性反应。根据地理分布的差异,选择了38个代表性分离物进行TMV外壳蛋白基因的IC-RT-PCR扩增、克隆和测序。测序分析表明,38个TMV cp基因核苷酸序列相似性在95%~100%之间,其推导的氨基酸序列同源性为97.5%~100%。云南不同TMV分离物与TMV-U1、TMV-Fujian核苷酸相似性大于90%,其系统关系与TMV-U1和TMV-Fujian分离物聚为一簇,研究表明云南38个烟草分离物均属于TMV-U1株系。      

云南烟草上出现番茄斑萎病毒（Tospovirus）属病毒

摘要: 2004-2007年间对云南省烤烟种植区进行调查,在云南省楚雄和文山2个地区,获得3份疑似Tospovirus属病毒的样本。通过Tospovirus组引物（Tospovirus Group Primer）进行RT-PCR扩增、克隆和测序,获得500 nts核酸片段,通过NCBI BLAST网络数据库比对,确定这3份样品为Tospovirus属的病毒;通过DNAman软件比对分析所得到的核酸序列和已经公布的Tospovirus属病毒RNA L同位点序列,从得到的系统进化图可以看出,云南3个样品明显分为2簇,即YN-1和YN-2,分别与血清组Ⅰ和Ⅵ的Tospovirus属病毒聚为一簇。      

湖南烟草病毒病种类检测与系统进化分析

为明确湖南烟草病毒病的种类及分布状况,利用小干扰RNA（siRNA）测序和反转录PCR（RT-PCR）对湖南烟区样品进行检测,分析主要病毒侵染类型,最大似然法构建系统进化树确定分类地位。结果表明,湖南烟草受到烟草普通花叶病毒（Tobacco mosaic virus,TMV）、黄瓜花叶病毒（Cucumber mosaic virus,CMV）、马铃薯Y病毒（Potato virus Y, PVY）、番茄斑驳花叶病毒（Tomato mottle mosaic virus,ToMMV）、地黄花叶病毒（Rehmannia mosaic virus,ReMV）和辣椒轻斑驳病毒（Pepper mild mottle virus,PMMV）等6种病毒的侵染,其中ToMMV、ReMV、PMMV首次被检测到,TMV、CMV和PVY是主要病毒,TMV为优势病毒,复合侵染是主要侵染类型,复合侵染率为71.29%;湖南烟草上的TMV分离物形成3个独立组系,CMV分离物属群组I的亚组IB,PVY分离物属PVY^NTN-a、PVY^E和PVY^SYR-I株系。本研究摸清了湖南烟草病毒种类、分布及侵染情况,明确了TMV、CMV、PVY的分类地位,为病毒病的防治提供了理论依据。     

黔江烟田病毒与周边作物及杂草携毒关系分析

为明确烟田烟叶携带病毒与周边作物和杂草携带病毒的亲缘关系,利用RT-PCR克隆烟田烟叶与周边杂草和作物携带病毒外壳蛋白（CP）,通过MEGA序列比对分析黔江烟田烟叶和周边杂草与作物所带病毒种类及其亲缘关系。结果显示,黔江地区烟草感染病毒有烟草普通花叶病毒（TMV）、黄瓜花叶病毒（CMV）和马铃薯Y病毒（PVY）;在烟田周边杂草和作物番薯、四季豆、糯米团、三悬叶钩草、杂草中检测到了TMV;自番薯、四季豆、蓬蘽、千里光、糯米团、三悬叶钩草中扩增出CMV;自番薯、四季豆、假酸浆、杂草中扩增出了PVY。进化关系分析显示,三悬叶钩草、四季豆、糯米团以及番薯为黔江烟田烟叶TMV的主要来源,蓬蘽为烟叶病毒病CMV的侵染源,假酸浆为烟田PVY的主要来源。     

3个黑龙江烟区烟草花叶病毒分离物的全基因组序列测定与分析

为明确黑龙江烟区烟草花叶病毒（Tobacco mosaic virus,TMV）分子株系和进化特征,从哈尔滨和牡丹江感病烟草采集到HEB1、HEB2和MDJ三个样品,通过RT-PCR扩增了其全基因组序列,并进行了一致率、重组、系统发育和选择压力等分析。结果表明,3个分离物全长均为6395核苷酸（GenBank登录号分别为MH595919、MH595920和MH595921）。HEB1和MDJ与辽宁分离物Beipiao（HE818412）一致率最高,分别为98.9%和99.6%;HEB2与云南分离物Chuxiong1（HE818417）一致率最高,为97.1%。HEB1是MDJ和HEB2的重组体。在根据全基因组序列构建的系统进化树中,TMV分为3个组,其中HEB1和MDJ均属I（U1）组,HEB2属Ⅱ（Rakkyo）组。TMV的4个基因均处于负选择,其中衣壳蛋白基因的选择压力最大。      

应用Illumina Miseq测序分析饮用水源水中病毒多样性

以东太湖水源水为研究对象,应用梯度-串联-循环-切向流超滤技术对水体中病毒进行分离浓缩,使用非序列依赖性单引物扩增技术扩增源水中病毒基因组,采用Illumina Miseq进行测序,与NCBI基因数据库进行比对,质控后获得1?190?914?928?bp基因数据,可组装成5?554?条scaffolds序列,获知病毒基因组功能,经比对可注释到尾噬菌体目（Caudovirales）、疱疹病毒目（Herpesvirales）、线状病毒目（Ligamenvirales）,在科的水平上,注释到40?个科病毒的同源序列,其中含量较高的病毒科为Microviridae占27.590?1%,Siphoviridae占23.010?7%,Phycodnaviridae占5.322?2%,Retroviridae占1.691?2%,Mimiviridae占1.960?8%,其中无法注释（norank）占21.572?8%,102?112?条reads在科水平上norank,研究可以高通量的获得水源水中病毒多样性信息,并为水体中病毒的检测提供理论参考依据。     

Variation of the chemical composition of tomato cultivars (Lycopersicon esculentum Mill.) according to resistance against the tomato yellow leaf curl virus (TYLCV)

BACKGROUND: Tomato producers are looking for alternatives to protect their crops against the tomato yellow leaf curl virus (TYLCV), including replacement of cultivars with other more resistant ones. Major chemical components, sugars, mineral composition, organic acids, lycopene, total phenols and hydroxycinnamic acids were determined in six tomato cultivars, three of them (Boludo, Dorothy and Tyna) resistant, and the other three (Daniela, Dominique and Thomas), non‐resistant against TYLCV. RESULTS: The Daniela cultivar showed the greatest difference with respect to the others, mostly due to the higher content of soluble solids. The major significant differences between the mean values according to the cultivar and resistance against the TYLCV were observed for total soluble solids, pH, ascorbic acid, total phenols and hydroxycinnamic acids. High coefficients of correlation were found between glucose and fructose, and among ferulic, caffeic and p‐coumaric acids. CONCLUSION: Linear discriminant analysis made it possible to differentiate tomato samples according to the cultivar. A clear varietal influence on the chemical composition was observed; however, resistance or non‐resistance against TYLCV does not seem to influence the chemical composition. Copyright © 2008 Society of Chemical Industry     

烟草丛顶病在中国的发现及研究进展

烟草丛顶病是发生在云南西部烟草种植区的一种严重病害.1993年首次在保山地区暴发流行.截止1998年发病面积达5万多公顷,直接经济损失2.1亿元.课题组采用生物学和分子生物学研究方法,明确证实在滇西三江流域烟草种植区普遍爆发流行的此类烟草病害与津巴布韦发生的烟草丛顶病为同一病害.病害由烟草丛顶病毒(TBTV)和烟草脉扭病毒(TVDV)复合侵染引起,是烟草丛顶病在中国的首次报道;获得了TBTV的全长核苷酸序列,是国际上完成的第一个烟草丛顶病毒全序列;开展了TVDV的分子生物学研究并获得了基因组部分序列;报道了TBTV的似卫星RNA,并获得了其部分序列;建立了包括TBTV、TVDV以及TBTV似卫星RNA的烟草丛顶病分子检测体系;通过对病害传播途径、流行规律研究,提出了"预防为主,避蚜防病"的综合防治措施,在全省累计示范推广8万多bm2,平均防治效果在90%以上,挽回烟叶损失1.7亿元,经济效益极为显著,挽救了滇西烟区烟草种植业.     

Comparative post‐harvest behaviour of traditional and virus‐resistant Muchamiel tomatoes

BACKGROUND: Nowadays, organoleptic quality is the primary objective for almost all tomato breeding programmes. In this study, post‐harvest behaviour of a breeding line with genetic resistance to important viruses (tomato mosaic virus, tomato spotted wilt virus and tomato yellow leaf curl virus) has been compared with the original traditional landrace (Muchamiel). The breeding line has been obtained by backcrossing, introgressing three resistance genes but aiming to keep the quality characteristics of the traditional variety. Tomatoes were picked at random and stored at 10 °C for 13 days. Quality analyses were made in both tomato samples: weight loss, colour, respiration rate, ethylene production, maturity index, instrumental hardness and sensory evaluation with trained panel. RESULTS: Fruits of the breeding line were characterized by higher hardness even with a higher maturity index. Results of sensory tests were in agreement with instrumental measurements. Organoleptic quality of Muchamiel virus‐resistant tomatoes was at least as high as that of traditional tomatoes, reaching the best scores in odour and aroma at the 13th storage day. CONCLUSION: Although a long time has been required to develop the breeding line, results indicate that organoleptic fruit quality has been recovered through backcrossing, confirming the success of the breeding programme. Copyright © 2010 Society of Chemical Industry     

闽西烟区主要病害及其综合防治技术体系

通过对闽西烟区主要病害调查发现侵染性病害主要是烟草炭疽病、烟草病毒病(含TMV、CMV、PVY、TRSV、TEV、TLCV)、烟草黑胫病、烟草赤星病、烟草青枯病,非侵染性病害主要有烟草气候斑点病和缺素症等。同时,结合当地生态条件和有关试验及调查结果,提出综合防治技术,该技术对烟草重要病虫害的防治具有较好效果。     

重庆烟区烟草叶斑病的诊断与鉴定

在重庆市烟草病害调查中,从彭水县润溪镇烟田发现一种未知的烟草叶斑病。为明确其病原物的分类地位,通过田间采集症状典型病害样品,经组织分离、菌株纯化并采用科赫氏法则测定其致病性,结合rDNA-ITS分子鉴定方法,对该叶斑病进行了诊断和鉴定。结果表明：该叶斑病的病斑在叶片上呈不规则形,周围有淡黄色晕圈,病部中央灰白色,且密生有黑色小点;分离物菌株psrx-1能引起健康烟株叶片发病,具有致病性;病原菌株的形态学特征表现为分生孢子座垫状、黑褐色,呈球形或半球形,分生孢子梗紧密排列、梗短小、直立,分生孢子暗褐色、球形或近球形,无隔膜,表面有颗粒状凸起或褶皱。经rDNA-ITS基因序列比对分析,将该病害鉴定为附球菌（Epicoccum sp.）引起的烟草叶斑病害,为重庆烟区首次发现的一种烟草新病害。     

保润剂对烟草叶表面微结构的影响

为调查添加保润剂后烟草表面微结构的变化情况,采用XL30-ESEM型环境扫描电子显微镜技术,对添加木糖醇、山梨醇、丙二醇、丙三醇和芦荟多糖5种保润剂烟草的上表皮、下表皮和断面进行了研究。结果表明,保润剂均能使烟样的水分含量极显著增加,添加保润剂的烟草叶表面沟槽纹理发生变化,其中C2F上表皮处理样品的沟槽纹理面积比列均显著增加。处理样品气孔的保卫细胞除山梨醇和芦荟多糖的X2F下表皮不显著外,其他均有显著膨大。丙二醇、丙三醇和木糖醇对气孔宽度的缩小和气孔平均面积的减少均有显著影响。保润剂处理的烟样断面厚度均显著高于对照。总体比较,丙二醇和丙三醇对叶表面微结构的影响较大,其他排序是木糖醇、芦荟多糖和山梨醇。     

不同光质对烤烟质体色素含量及相关酶活性的影响

为明确不同光质条件下,烤烟叶片成熟过程中质体色素代谢的生理响应机制,在大田环境下通过覆盖不同颜色薄膜获得不同光质,研究了不同光质对烤烟生长发育过程中质体色素代谢的影响。结果表明,红、黄光抑制了这一过程中叶绿素的降解,表现在促进了叶绿素a的积累。红光还抑制了类胡萝卜素的降解。与之相比,蓝光相反。黄、红光显著降低了叶绿素酶的活性,蓝光则提高了叶绿素酶的活性。各单色光处理的脂氧合酶活性在成熟末期明显上升,可能延缓叶片的衰老引起质体色素的进一步完全分解,引起烤烟品质的改变。     

重庆地区烟叶辣椒脉斑驳病毒的检测与鉴定

为确定重庆烟区烟草叶片上出现黄化斑点、枯斑等症状的病原,进而制定出科学的综合防治措施,对采自重庆市涪陵和巫溪烟区与北碚试验田的18份烟叶样品进行了病毒种类检测与鉴定。根据病毒外壳蛋白基因序列设计了特异性引物,采用RT-PCR扩增及BLAST序列对比分析,结果表明:涪陵烟区烟叶上出现黄化斑点、枯斑等症状的样品中检测出烟草花叶病毒（Tobacco mosaic virus,TMV）和辣椒脉斑驳病毒（Chilli veinal mottle virus,ChiVMV）,检出率分别为54.55%和100%;巫溪烟区样品中检测出TMV和马铃薯Y病毒（Potato virus Y,PVY）,检出率分别为100%和66.67%;北碚烟草试验田病叶样品中检测出ChiVMV,检出率为100%。其中,ChiVMV为重庆地区烟草上首次发现。      

湖南烟区烤烟锰与土壤有效锰含量的分布特点及关系分析

采用野外调查、田间试验与室内分析相结合的方法,分析了湖南烟区烤烟锰含量与土壤有效锰含量的分布特点及相互关系,结果表明:(1)湖南烟叶锰含量适宜,平均为(146.66±134.03)mg·kg-1,变幅为15.00~740.80mg·kg-1,有95.72%的烟叶样本锰含量在22.96~550.03mg·kg-1范围内;符合巴西优质烤烟烟叶锰含量标准(58.16~156.00mg·kg-1)的样本占42.41%;不同等级烟叶锰含量的变化规律是X2F >B2F >C3F。(2)湖南植烟土壤有效锰含量丰富,平均为(27.83±22.39)mg·kg-1,变幅为1.30~174.30mg·kg-1;有17.36%的土壤样本在不同程度上缺锰(≤ 10.0mg·kg-1),有20.19%的土壤样本有效锰含量过高(>40.0mg·kg-1),满足优质烟叶生长发育正常的样本占62.45%;不同土壤类型有效锰含量的变化规律是黄壤土 >黄灰土 >黄泥田 >红黄泥 >鸭屎泥 >沙泥田 >青泥田。(3)烟叶锰含量与土壤有效锰含量呈极显著正相关(相关系数为0.481),257个样品的烟叶锰含量(?)与土壤有效锰含量(x)建立的回归方程为?=58.45+3.80x。(4)在土壤有效锰含量分组后,烟叶锰含量随着土壤有效锰含量的增加而增加,且烟叶锰含量在组间差异达到1%的极显著水平。