纯牛乳中硫氰酸钠高通量快速检测方法的建立

本研究基于硫氰酸根与三价铁离子反应生成血红色络合物的原理,以微孔板作为显色载体,通过显色剂筛选、显色条件优化、性能评定等步骤建立了一种准确、快速、高通量的纯牛乳中硫氰酸钠含量的检测方法。方法的工作条件为选取1.5 mol/L的高氯酸铁溶液(用2.0 mol/L高氯酸溶液配制)作为最佳显色剂,室温25℃下反应5 min,用酶标仪读取465 nm波长下的吸收值。结果显示:本方法检出限为0.27 mg/kg,定量限为0.90 mg/kg,线性范围为0.90~80.00 mg/kg,加标回收率范围在83.9%~98.6%之间,重复测试相对标准偏差均小于10.0%。本方法具有准确、通量高、试剂用量小、环保、快速等优点,能够满足纯牛乳中硫氰酸钠的检测,适合对大批量的纯牛乳中硫氰酸钠残留进行快速筛查。     

高效液相色谱法测定牛奶中硫氰酸钠含量

目的采用高效液相色谱法检测牛奶中硫氰酸钠含量。方法样品用5 m L乙腈沉淀蛋白质,上清液过C_(18)柱净化。以磷酸缓冲溶液(pH=7.0):乙腈(95:5,V:V)作为流动相,C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm)分析,柱温30℃±2℃,流速1.0 m L/min,以紫外检测器分析样品。结果该方法对牛奶中硫氰酸钠有较高的提取率,质量浓度范围在5~100 mg/L内线性较好(r~2=0.9995),检测限1.0 mg/kg,回收率90%。结论该方法具有预处理简单、灵敏度高的优点,满足对牛奶中硫氰酸钠含量的检测要求。     

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重庆雀图健康管理咨询有限公司

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分光光度计法快速测定牛乳及乳粉中硫氰酸钠的含量

本法采用分光光度计法快速测定牛乳及乳粉中硫氰酸钠的含量。方法:样品经三氯乙酸溶液提取,与三氯化铁生成血红色的硫氰酸铁络合离子,在最大吸收波长处测定其吸光值,根据标准曲线确定硫氰酸钠的含量。结果表明:在浓度1~30μg/m L,波长为457nm时,测得的吸光度线性关系良好。加标回收率在92.5%~112.5%,精密度在0.34%~1.87%,牛乳的方法检出限为3.83 mg/kg,乳粉的方法检出限为7.65 mg/kg。基于显色稳定性,方法要求标准溶液和样品溶液显色后在15min内完成检测。该方法使用仪器设备简单,操作方便,成品低,实验时间短,特别适用于乳制品中硫氰酸钠含量的快速检测。本方法可应用在各奶粉制品企业对大批量原料乳进行快速检验和质量验收。     

基于QuEChERS前处理技术快速测定牛奶中硫氰酸钠的含量

建立了牛奶中硫氰酸钠的QuEChERS-HPLC快速检测方法。样品经乙腈提取,QuEChERS吸附剂净化,然后8000r/min离心5min,上清液过膜,以高效液相色谱仪测定。结果表明:在浓度1~20μg/m L,线性关系良好。加标回收率在83.0%~103.5%,精密度为1.87%,方法检出限为0.05mg/kg。该方法操作简便,快速灵敏,适用于牛奶中硫氰酸钠的快速检测和日常监控。     

可视化组胺快速检测试纸研究

根据比色法的原理,研制可视化组胺(histamine,HA)快速检测试纸。通过对显色条件、试纸型号、试纸修饰条件的优化,得到最佳的显色条件,并制作HA检测标准比色卡,对水产品中HA的含量进行定性以及半定量的快速检测。试验结果表明:显色体系为2.5 mg/m L对硝基苯胺的乙醇+2 mol/L盐酸(V_乙醇∶V_盐酸=9∶1)溶液与5 mg/m L亚硝酸钠的水+乙醇(V_水∶V_乙醇=1∶2)溶液按体积比3∶2混合,试纸选取103慢速滤纸并用氨水以及聚离子溶液进行修饰,该方法检测时间1 min,最低检测限为0.1 mg/L,实际样品检测中100 mg/L有明显的色阶变化。     

比色法快速测定γ-氨基丁酸含量

当有乙醛酸、琥珀酸存在时,γ-氨基丁酸(GABA)与溴甲酚绿发生专一的、特殊的显色反应。基于这一显色反应,建立了一种新的快速测定GABA含量的比色法。显色剂中溴甲酚绿、琥珀酸和乙醛酸溶液的适宜浓度分别为0.5、4.0 mg/m L和6.0 mg/m L。测定GABA含量的适宜条件为:4 m L样品溶液,加入2 m L显色剂,混合摇匀,在25℃下水浴5 min,于617 nm测定吸光值。其它氨基酸如谷氨酸对GABA测定有一定的影响。     

乳制品中硫氰酸钠快速检测方法的优化

研究了乳制品中硫氰酸钠的快速检测方法及方法的改进。在原本显色剂三价铁离子显色的基础上,引入了指示剂结晶紫、罗丹明B。结果表明,在硫氰酸钠显色定性检测中,引入指示剂后,目标物含量较少的乳制品显色结果更易分辨,提高了硫氰酸钠定性试验的准确度和灵敏度。     

分光光度法测定乳与乳制品中硫氰酸钠的含量

研究了硫酸铁铵分光光度法测定乳与乳制品中硫氰酸钠的含量.方法:样品加三氯乙酸溶液和双氧水溶液置60℃水浴进行蛋白沉淀后,过滤,取滤液加硝酸酸化,再用硫酸铁铵溶液进行显色,在465nm处测定其吸光值,用标准曲线法测其含量.结果:本方法的线性范围为1.00mg/L～20.0mg/L,以吸光值0.02作为检出限,则液体的检出限为3mg/L、固体的检出限为6mg/kg,奶粉和鲜奶的相对标准偏差分别为3.80%和2.43%,本方法回收率在98.6%～99.7%之间.检测结果与离子色谱法检测结果比较的相对偏差均在10%以内.鉴于显色稳定性,方法要求标准溶液和样品溶液显色后分别在15min和30min内完成检测.本方法具有操作简便,结果准确等优点,对乳与乳制品中硫氰酸钠的控制具有重要意义.因本方法使用的紫外分光光度仪非常普及,很适合在广大中小企业推广.     

乳粉中阪崎肠杆菌污染检测试剂盒的研制

目的：以乳粉中污染的阪崎肠杆菌（Enterobacter sakazakii）为检测目标,开发一种能快速检测其污染的试剂盒。方法：以两株阪崎肠杆菌单克隆抗体分别为包被抗体和检测抗体,建立双抗体夹心酶联免疫吸附实验方法,优化各个反应条件,制成在2 h内能发生显色反应的检测试剂盒。结果：包被抗体的最佳工作质量浓度为10 μg/mL,检测抗体的最佳稀释倍数为1∶5 000。试剂盒的检测限为104 CFU/mL,在104～108 CFU/mL范围内OD450 nm值与阪崎肠杆菌浓度的常用对数值呈线性关系。特异性实验中,试剂盒可检出3 株阪崎肠杆菌标准菌株,对其他9 株食品中常见致病菌的检测均呈阴性。模拟带菌实验中,初始菌浓度为1 CFU/mL的模拟样品经过8 h前增菌后,通过该试剂盒便可检出。该试剂盒的批内、批间变异系数均小于6%,至少可在室温保存6 个月。结论：该双抗体夹心试剂盒具有灵敏度高、特异性好、精密度高、稳定性强等优点,可应用于乳粉中阪崎肠杆菌的快速检测。     

还原糖快速检测试纸的研制

基于3,5-二硝基水杨酸（3,5-dinitrosalicylic acid,DNS）比色法原理,利用了氧化钙和待测液反应形成的碱性环境及放出的热量,能够促使还原糖与DNS试剂发生显色反应的方法制备了还原糖快速检测试纸。实验对试纸的制备条件及测定范围进行研究,并制备了标准比色卡。实验结果表明,最佳基纸为快速定性滤纸,显色剂质量浓度为6.0?g/L,干燥温度为50?℃。该试纸检测时间仅需5?min,检测范围为0.01～3.00?mol/L,具有操作简单、耗时短、显色迅速、携带方便等优点,适用于食品、发酵、医药等行业中对还原糖的快速半定量检测。     

气相色谱-质谱法测定乳制品中的硫氰酸根

利用气相色谱-质谱联用仪对乳制品(主要指液体乳及乳粉)中硫氰酸根残留量进行测定。根据硫氰酸根能与α-溴-2,3,4,5,6-五氟甲苯(PFB.Br)上的活泼溴发生取代反应的原理,试样采用振荡提取后进行衍生,高速冷冻离心,衍生产物采用选择离子监测质谱扫描,用化合物的保留时间以及质谱碎片的丰度比定性,外标法定量。结果表明:在定量检测范围为0.02～50.0mg/kg范围之内,回收率、灵敏度高,准确性与重现性良好。该方法前处理简单、易操作、成本低、分析周期短,可作为液体乳与乳粉中硫氰酸钠的快速检测方法。     

高通量抗生素残留初筛试剂盒的研制及应用

以动物源性食品中常见的单一或配伍使用的抗生素为检测目标,开发基于微生物显色原理的高通量快速检测其残留的初筛试剂盒。选取嗜热脂肪芽孢杆菌（Bacillus sterothermophilus CICC 10392）作为指示菌,优化其微胶囊包埋条件,并固定于96 微孔板中,结合前期研究成果制成可同时对禽畜肉中常见的4 类抗生素进行联合初筛的试剂盒,克服了因菌种活化耗时较长及液体菌种运输困难等问题。结果表明：以0.1 g/mL聚乙烯醇为载体、pH 6.0的硼酸-磷酸盐溶液为交联剂对初始吸光度（A600 nm）为0.8的指示菌进行包埋,其机械强度、细胞活性及检测效果最好;该试剂盒对四环素类检出限为40～60 μg/kg,氨基糖苷类检出限为60～120 μg/kg,大环内酯类检出限为60～100 μg/kg,β-内酰胺类检出限为20～40 μg/kg,四环素与氨基糖苷类配伍使用检出限为20～40 μg/kg,β-内酰胺类与氨基糖苷类配伍使用检出限为10 μg/kg,符合国内外对抗生素残留限量的要求;用色谱法对试剂盒检测的70 份样品进行验证,无假阴性存在,说明该试剂盒结果可靠,可用于动物源性食品中抗生素残留的初筛检测。     

生鲜牛乳中硫氰酸钠的风险评估研究

采用离子色谱法对上海地区的500批次生鲜牛乳中硫氰酸钠含量进行检测。结果表明：生鲜牛乳中硫氰酸钠含量总体情况符合Pearson5分布（皮尔逊V型分布）,90％的数据分布在0．2—3．71mg／kg之间,最小、最大、平均含量分别为0．2、9．66和1．5mg／kg。基于乳制品中硫氰酸钠的每日摄入量和点评估方法得到硫氰酸钠的膳食暴露量为2．0μg／kg标准人每日,结合相关的硫氰酸钠的风险评估研究,表明本研究中上海地区生鲜牛乳中的硫氰酸钠的含量属于正常的生理浓度,对人体正常膳食无健康影响。     

A microbiological inhibition method for the rapid,broad-spectrum,and high-throughput screening of 34 antibiotic residues in milk

In this study, we developed a microbiological inhibition method for the rapid screening of antibiotics in milk with Geobacillus stearothermophilus ATCC12980 as an indicator bacterium and an easy sample pretreatment. We observed that the limits of detection of the kit for 34 common antibiotic residues in milk, including β-lactams (13), aminoglycosides (6), tetracyclines (4), sulfonamides (6), macrolides (4), lincosamides (1), were lower than or close to the maximum residue limits formulated by the European Union and China. Moreover, the false-positive rate was 1% and the false-negative rates were less than 5%. The ruggedness of the method (the reproducibility of detection capability of different batches of medium) met requirements at determined levels and residual limits. The shelf life of the kit was more than 6 mo at 4°C. Additionally, we observed good correlations between the kit results and ultra-high-performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry results for incurred milk (samples taken from animals treated with antibiotics according to the pre-slaughter medication data), which indicated that the kit was reliable for screening antibiotics in incurred samples. In conclusion, the kit has a broad application potential with high sensitivity, specificity, and reproducibility, stability, and reliability, combined with simple operation, low cost, and high-throughput capacity.     

基于免疫原理的7种磺胺类兽药残留快速检测试剂结果准确性评估

目的评估市场上5种基于免疫原理的快速检测试剂盒检测7种磺胺类兽药残留的结果准确性。方法分别用5种快速检测试剂盒与GB/T21316—2007《动物源性食品中磺胺类药物残留量的测定液相色谱-质谱/质谱法》对样品中的7种磺胺类兽药残留进行测定,验证快速检测试剂盒的检测准确性,考察5种快速检测试剂盒在选择不同的样品基质、磺胺类基准时符合率、假阳性率、假阴性率,并对其进行结果准确性评估。结果选用猪肉、虾肉2种样品基质加标进行检测,在80、100、150μg/kg浓度点检测结果无显著性差异。B公司试剂盒以磺胺二甲嘧啶为基准,检测符合率为96.6%,且检测猪肉时假阴性率为0%,准确性最高,具有较好的实用性。A公司试剂盒以磺胺甲恶唑为基准,检测符合率为72.8%,检测磺胺嘧啶、磺胺甲嘧啶、磺胺二甲嘧啶时假阴性率高达100%,不适合用于磺胺类兽药残留的检测。C、E和D公司的试剂盒检测磺胺甲恶唑时假阴性率高。由此可见,对检测结果的准确性影响最大的是试剂盒基准物的选择,其次是磺胺类兽药的结构。结论5家公司中,1家公司的产品能满足现场食品快速检测监管的需求,4家公司的产品不适用于磺胺类兽药残留的检测,建议进一步改进工艺提升准确性。     

基于线扫描拉曼高光谱系统的奶粉中硫氰酸钠无损检测

搭建一套线扫描拉曼高光谱成像系统,探索针对大面积奶粉样本的硫氰酸钠快速无损检测。首先测量硫氰酸钠产生的拉曼信号在脱脂奶粉层中的穿透情况,然后制备10?种不同硫氰酸钠质量分数的奶粉混合样本并采集拉曼高光谱图像,通过高斯窗平滑法和自适应迭代惩罚最小二乘基线校正方法对拉曼光谱进行预处理。预处理后提取2?068.48?cm－1位移处的单波段图像进行分析,结合二值图像最终获得了样本中硫氰酸钠颗粒的含量以及空间分布。结果显示,在2?068.48?cm－1单波段图像中,感兴趣区域内所有像素点的拉曼强度平均值随着硫氰酸钠含量的增加呈线性增长,其决定系数R2达到了0.991?5。二值图像中,感兴趣区域内所有硫氰酸钠检测点之和呈指数增长趋势。在本实验方法中,单次检测奶粉样本的总面积达到80?mm×80?mm,检测时不接触、不破坏样本,无需借助化学试剂。奶粉混合样本中硫氰酸钠颗粒的检测限可达0.01%。研究结果表明,拉曼高光谱成像系统能够快速、无损且大面积地检测出奶粉中的硫氰酸钠,并且可以直观地展示硫氰酸钠颗粒的具体分布,在实际检测应用中该方法具有巨大潜力。     

毛细管电泳法检测牛奶中硫氰酸钠质量浓度

运用毛细管区带电泳法直接检测牛奶中硫氰酸钠质量浓度。前处理使用乙睛沉淀蛋白,中性氧化铝SPE柱除去部分水溶性维生素、氨基酸,离心脱脂。在NaH2PO4-Na2B4O7缓冲液中加入溴化十四烷基三甲基溴化铵(TTAB)作为电渗流反相作用剂,分离电压20 kV,分离温度30℃,电极反向,以二极管阵列紫外检测器218 nm波长下分析样品,质量浓度范围在5~500 mg/L内线性较好,r>0.9995。该方法可适用于生鲜乳和巴氏灭菌成品乳,检测限可达到0.2 mg/kg,定量范围0.5～50 mg/kg,精确度<10%,回收率>90%。