UV-C辐照对凡纳滨对虾虾头主要内源酶酶学性质的影响

以凡纳滨对虾虾头为研究对象,探究UV-C辐照对其主要内源酶的影响。用功率为30 W的UV-C紫外灯以20 cm高度、辐照20 min,处理虾头均浆液,检测内源酶酶活,分析比较辐照前后温度、pH对其内源酶酶活的影响规律。从虾头中检测出酸性及碱性蛋白酶、脂肪酶、几丁质酶和多酚氧化酶等酶活性; UV-C辐照前后,脂肪酶、几丁质酶的最适pH有所变化,脂肪酶最适pH由10变为6～10,几丁质酶最适pH由5变为6左右;各主要内源酶最适温度无明显变化; UV-C辐照后,在最适条件下酸性蛋白酶酶活升高23. 99%,碱性蛋白酶升高37. 49%,脂肪酶升高21. 37%,几丁质酶升高37. 70%,多酚氧化酶升高46. 52%。结果显示,UV-C辐照对凡纳滨对虾虾头酸性及碱性蛋白酶、脂肪酶、几丁质酶和多酚氧化酶等主要内源酶均有激活作用。     

凡纳滨对虾内源蛋白酶对肌原纤维蛋白的降解作用

为确定引起凡纳滨对虾自溶的主要酶类及分布部位,本文测定了凡纳滨对虾各内源蛋白酶的活性,分析主要内源蛋白酶贮藏期间的变化,并比较主要内源蛋白酶对虾肌原纤维蛋白的降解作用。结果显示,虾头蛋白酶活达90.17U/mg,是虾肉的300倍。虾头中的胰蛋白酶活性最高,达13.59U/mg。全虾贮藏4d后虾肉总酶活和胰蛋白酶活增加,于第8d虾肉第一腹节总酶活增至1.66U/mg,胰蛋白酰胺酶和酯酶活分别达到0.97U/mg和1.84U/mg。SDSPAGE结果显示,随贮藏温度和时间的增大,内源酶对肌原纤维蛋白的肌球蛋白重链(MHC)和肌动蛋白(Actin)降解程度越大,其中虾头中胰蛋白酶对肌原纤维蛋白的降解作用最强。因此凡纳滨对虾胰蛋白酶很可能是肌肉软化的主要作用酶。     

凡纳滨对虾PPO的组织分布和活性与其贮藏过程中黑变的关系

研究了凡纳滨对虾多酚氧化酶(Polyphenol Oxidase,PPO)在其组织中的分布和活性、PPO的最适pH值和稳定性,分析了不同包装方式(真空包装与非真空包装)和不同贮藏温度(-18℃、4℃、25℃)对虾黑变和PPO活性的变化规律,探讨了对虾黑变与PPO催化反应速度和贮藏温度的关系以及PPO酶活与贮藏温度的关系。结果表明:凡纳滨对虾的虾壳和虾头部位的PPO含量和活性较高,虾肉与虾足中PPO含量和活性较低;对虾PPO的最适pH值为6,在pH值6~8之间具有较好的稳定性和较高的活性;对虾黑变与贮藏温度和PPO催化反应速度呈正相关,PPO相对酶活与贮藏温度呈负相关;真空包装隔绝氧气和低温抑制PPO活性,降低了PPO的催化反应速度,从而减缓了对虾的黑变。研究结果为凡纳滨对虾在贮藏和加工过程中防止和控制黑变提供理论参考。     

凡纳滨对虾下脚料综合加工工艺研究

研究了以凡纳滨对虾下脚料为原料,同时制备调味基料和多功能饲料添加剂.应用酶解技术,对凡纳滨对虾下脚料采用双酶复合酶解(木瓜蛋白酶和风味蛋白酶)方法生产调味基料,在确定了料液比为1∶1,酶解初始pH为6.80,盐添加量为3.0％的情况下,进一步利用Box-Behnken响应面法获得最优醇解工艺为:酶解温度62.42℃,酶解时间3.28h,加酶量1046 U/g,测得最终水解度DH为(28.15±0.10)％,苦味值BV为33.05±0.21.通过对比2种干燥工艺,确定了从凡蚋滨对虾下脚料中生产多功能饲料添加剂的最佳干燥工艺条件为:采用微波干燥,参数为3 W/g,启闭比为0.5.     

凡纳滨对虾微波熟制工艺条件的研究

以模糊感官评定结果为考察指标,研究了凡纳滨对虾微波熟制的工艺条件;对不同微波条件下熟制虾的持水力、失重率、水分含量、色差、质构以及虾体的温度进行了系统分析。结果表明,微波熟制工艺参数为加热功率240W,加热时间120s,保温2min,处理量(50±5)g/16L(虾体质量/微波炉有效腔体体积)。不同微波处理的凡纳滨对虾熟制品的持水力、水分含量、质量损失、色差、温度和质构特性差异显著性规律不明显。其中,微波240W,处理120s的处理组失重率最小,弹性最大,咀嚼性最好。微生物检验结果表明,微波熟制的凡纳滨对虾细菌总数符合食品安全卫生标准。     

海洋产几丁质酶厦门加西利亚单胞菌Chi34的筛选、鉴定及酶学性质分析

目的：海洋是自然界中含几丁质最多的生态系统,孵育了大量可降解利用几丁质的微生物,因此利用海洋微生物几丁质酶降解几丁质,是获得高附加值几丁寡糖的重要方法。本试验以连云港海域海泥为样品,以期筛选获得稳定的产几丁质酶菌株。方法：利用平板筛选法和摇瓶发酵复筛法筛选获得产几丁质酶菌株Chi34,利用形态学分析和16S r DNA序列分析对菌株进行鉴定,同时还研究了温度、pH、金属离子、EDTA及SDS等因素对Chi34几丁质酶的影响,最后通过TLC实验分析了Chi34几丁质酶降解几丁质胶体的产物。结果：菌株Chi34鉴定为厦门加西利亚单胞菌(Gallaecimonas xiamenensis),其几丁质酶酶活力为0.631 U/m L,最适反应温度为35℃,最适反应p H为6.0,Na₊、Ca₂₊、Mn₂₊、K₊对Chi34几丁质酶具有显著的激活作用,Cu₂₊、Fe₃₊、Ba₂₊、Zn₂₊、Cd₂₊、...     

T-2毒素对不同生长期对虾的急性毒性及其分析方法的比较研究

比较T-2毒素对不同生长期凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)的急性毒性及其分析方法,明确对虾作为T-2毒素毒性评价的生物标记物的最佳时期,建立T-2毒素对对虾的急性毒性互补评价方法。通过对不同生长期凡纳滨对虾的急性毒性试验,采用寇氏法和概率单位法,计算得到T-2毒素对不同生长期凡纳滨对虾的LD50,并通过u检验对两种方法求得的LD50值进行分析比较。结果得到T-2毒素对虾卵、幼虾和成虾的LD50值分别为2.33、1.79和3.34 mg/kg·bw,且经检验两种方法求得的LD50并无显著性差异。研究表明,T-2毒素对成虾的毒害作用最小急性毒性最弱,对幼虾的毒害作用最大急性毒性最强,即该生长期的凡纳滨对虾更适宜做评价T-2毒素急性毒性的生物标志物,同时采用寇氏法和概率单位法相结合的方法得到的LD50值更具准确。     

天然植物复合提取物对凡纳滨对虾生长及抗病力的影响

为研究在饲料中添加天然植物复合提取物对凡纳滨对虾生长、饲料利用、体组成成分以及对虾非特异性免疫指标的影响,设计了5个天然植物复合提取物浓度梯度的等氮等能饲料,饲料中天然植物复合提取物的添加量分别为0、0.05%、0.1%、0.2%和0.3%.实验用对虾初始体重为0.57g,经过8周的投喂实验.结果表明,饲料中添加天然植物复合提取物对凡纳滨对虾的增重率和成活率的影响显著,其中以添加天然植物复合提取物0.2%组的增重率最高,成活率则随着饲料中天然植物复合提取物添加浓度的提高而显著上升.天然植物复合提取物对凡纳滨对虾饲料系数和蛋白质效率的影响显著,其中以添加0.2%组饲料系数最低,蛋白质效率最高.对凡纳滨对虾全虾蛋白质、脂肪、灰分和水分的分析表明,饲料中添加天然植物复合提取物对凡纳滨对虾全虾组成成分的影响不显著.对虾血清溶菌酶活力、酚氧化酶活力以及血浆中红细胞总数受饲料中添加天然植物复合提取物的影响显著,然而血清超氧化物歧化酶活力不受饲料中天然植物复合提取物添加水平的影响.以对虾生长、成活率以及血清中酚氧化酶活力为指标,凡纳滨对虾饲料中天然植物复合提取物的适宜添加量为0.1%～0.2%.     

浸渍冻结对凡纳滨对虾冻藏过程中品质的影响

为了研究浸渍冻结对凡纳滨对虾冻藏品质的影响,以挥发性盐基氮含量、脂肪氧化值、pH值、盐溶性蛋白含量、Ca2+-ATP酶活力、多酚氧化酶活力、感官评价为指标,考察浸渍冻结和静止空气冻结对凡纳滨对虾品质特性的影响。结果表明：冻藏期间静止空气冻结对虾的挥发性盐基氮含量、脂肪氧化值、pH值等腐败指标均高于浸渍冻结对虾,并且随着冻藏时间延长而显著性增大（P＜0.05）;盐溶性蛋白含量、Ca2+-ATP酶活力和多酚氧化酶活力随冻藏时间延长而下降,蛋白质逐渐变性,品质下降,但浸渍冻结对虾的下降程度小于静止空气冻结的。感官评价进一步显示,两种冻结方式处理对虾的组织、气味、色泽和外观4 方面有不同程度下降,品质不断下降,但浸渍冻结对虾的感官评分高于静止空气冻结的对虾。综合以上结果,浸渍冻结更有利于对虾冻藏过程中品质的保持。     

木薯块根中β-葡萄糖苷酶的分离纯化及酶学性质

研究了木薯块根中β-葡萄糖苷酶的分离纯化及酶学性质。以缓冲液从木薯块根中获得粗提酶液,粗酶酶活力为9.37 U/g木薯干重;再分别通过丙酮沉淀、离子交换层析和凝胶过滤层析进行纯化,β-葡萄糖苷酶酶活力为1.14 U/g木薯干重,经纯化β-葡萄糖苷酶纯度提高了14.62倍,总活力回收率为12.14%,电泳测得其分子量约70 kDa。该酶米氏常数K_m为3.60 mmol/L,V_max为12.36μmol/(min·mg protein);其最适pH为7.0,pH在6.0～8.0之间有较好的稳定性;在40℃以内有良好稳定性,在4℃存放30 d酶活力剩余81.78%。Mn²⁺和K⁺对酶有一定的促进作用,Al³⁺、Cu²⁺、Mg²⁺、Zn²⁺、Ca²⁺、Ba²⁺、Na⁺、尿素和SDS对酶没有显著影响(P>0.05),而Fe³⁺、F...     

海水养殖凡纳滨对虾肠道产蛋白酶菌株的筛选、鉴定

为开发海洋来源的微生物蛋白酶,本文以海水养殖凡纳滨对虾肠道为原料,利用蛋白酶水解圈法初筛得到27株产蛋白酶菌株,测定菌株的透明圈直径与菌落直径比值(即D/d)初步估计其产酶能力,通过发酵液酶活测定复筛得到一株高产蛋白酶菌株,编号为xc10,通过形态学观察、生理生化鉴定、16S r DNA基因序列分析及系统发育树分析进行菌种鉴定,并对其发酵液粗蛋白酶的酶学性质进行了初步探讨。结果表明:菌株xc10为蜡状芽孢杆菌(Bacillus cereus),蛋白酶的最适温度为50℃;最适p H为7.5;Fe3+、Cu2+、EDTA对该酶有抑制作用,但Zn2+对该酶有激活作用。因此,从海水养殖的凡纳滨对虾肠道中分离得到的产蛋白酶的菌株xc10为一株中性、中温蛋白酶菌,为开发利用海洋微生物蛋白酶在水产品加工的应用提供了理论基础。     

基于高通量测序技术分析凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)冷藏过程菌群结构变化

目的揭示凡纳滨对虾(4±1)℃条件下贮藏过程中菌群结构的变化规律,为其贮运保鲜提供参考。方法采用高通量测序技术对不同冷藏期凡纳滨对虾中的细菌种类及其丰度迚行分析。结果凡纳滨对虾初始菌群以鞘脂杆菌属(Sphingobacterium)、金黄杆菌属(Chryseobacterium)和寡养单胞菌属(Stenotrophomonas)为主;冷藏过程中,Sphingobacterium、Chryseobacterium、Stenotrophomonas比例迅速减少,系统迚化关系上比较接近的交替假单胞菌属(Pseudoalteromonas)、希瓦氏菌属(Shewanella)和别弧菌属(Aliivibrio)成为优势菌,其中Aliivibrio的比例相对稳定,Shewanella比例呈先增加后减少的趋势,Pseudoalteromonas比例不断增加,可能在凡纳滨对虾腐败过程中起重要作用。结论高通量测序可以更加全面反映凡纳滨对虾中菌群的组成及其丰度信息,Pseudoalteromonas是凡纳滨对虾冷藏过程的优势腐败菌。     

凡纳滨对虾肌肉蛋白质组成及分子量分布研究

为了合理利用凡纳滨对虾蛋白质,对凡纳滨对虾肌肉进行蛋白分离,利用氨基酸自动分析仪检测蛋白的氨基酸组成及用SDS-聚丙烯酰胺电泳测定分子量分布。实验结果表明:总蛋白为(19.72±0.08)g/100g湿重,其中盐溶蛋白64.30%、水溶性蛋白25.00%、基质蛋白5.78%、非蛋白氮4.92%;凡纳滨对虾各蛋白氨基酸比例存在一定差异,但它们的第一限制氨基酸类似;SDS-PAGE电泳显示,凡纳滨对虾基质蛋白分子量分布范围较宽,集中在200~19ku,盐溶蛋白分子量集中在200~45ku,水溶性蛋白分子量集中在80~27ku。     

三聚氰胺在凡纳滨对虾中的残留消除规律研究

在室温(23~29℃)条件下,凡纳滨对虾用普通饲料驯化7d后再用含有不同剂量的三聚氰胺的饲料连续投喂25d,研究三聚氰胺在凡纳滨对虾血液、肌肉和肝胰腺组织中的残留消除规律。结果表明:凡纳滨对虾投喂含有三聚氰胺的饲料后,三聚氰胺在对虾血液、肌肉和肝胰腺组织中均有残留,当饲料三聚氰胺含量为800mg/kg时,对虾中三聚氰胺残留量最高部位是肝胰腺,其残留量达到6.10mg/kg;停喂含有三聚氰胺的饲料后,三聚氰胺在对虾血液、肌肉和肝胰腺组织中消除时间分别为1、4、6d;三聚氰胺在凡纳滨对虾体内可代谢为三聚氰酸,当饲料中三聚氰胺含量为200~800mg/kg时,三聚氰酸只在肝胰腺组织中检出,在血液和肌肉中均未检出,在肝胰腺组织中消除时间为3d。因此,肝胰腺可作为凡纳滨对虾体内三聚氰胺残留监控的靶器官。     

酸橙内生菌Bacillus thuringiensis Bt028几丁质酶的分离纯化及其酶学性质

为揭示酸橙内生菌Bacillus thuringiensis Bt028几丁质酶的基本酶学性质,采用离心、硫酸铵盐析、葡聚糖凝胶G-100层析及SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳等方法对菌株Bt028发酵液中的几丁质酶进行分离纯化鉴定,并考察该几丁质酶的最适温度、最适pH、催化动力学参数等性质。结果表明,Bt028菌株发酵液经离心、硫酸铵盐析、葡聚糖凝胶G-100层析分离纯化后获得电泳纯几丁质酶比活力为681.78 U/mg,纯化倍数为3.21,回收率15.52%。SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳结果表明,几丁质酶的分子质量为65 kDa。酶学性质研究结果表明,该酶的最适反应温度为60 ℃,最适反应pH为6.5,在温度低于60 ℃、pH5.5~7.5时有较好的稳定性;Mg2+、Ca2+、Hg2+、Co2+对该酶活力有抑制作用,而Cu2+和Fe3+有一定的促进作用;低浓度的甲醇、乙醇、正丙醇和二甲亚砜使酶的活性增加,但当浓度继续增大,反而会抑制酶的活性;丙酮对几丁质酶有激活作用,而甲醛对几丁质酶有抑制作用。在最适催化条件下,几丁质酶催化反应的米氏常数Km、最大反应速率Vmax、酶的转换数Kcat分别为29.533 mg/mL、108.696 μmoL/(L·min)和0.527/min。研究结果可为该酶的实际应用提供必要的工艺参数。     

凡纳滨对虾肌肉中组织蛋白酶L提取工艺优化及分离纯化

优化凡纳滨对虾肌肉中组织蛋白酶L提取工艺,分离纯化组织蛋白酶L并验证其对肌原纤维蛋白的降解作用。以凡纳滨对虾肌肉为原料,采用单因素试验、Plackett-Burman试验和双因素等重复试验对肌肉中组织蛋白酶L的提取工艺进行了优化。采用Tris-HCl缓冲液浸提、硫酸铵沉淀、Q-Seharose F.F阴离子交换层析、Sephacryl S-100凝胶过滤层析和SDS-PAGA等方法对组织蛋白酶L粗酶液进行分离纯化,并验证提纯后的组织蛋白酶L对肌原纤维蛋白的降解作用。最终确定对虾肌肉中组织蛋白酶L最佳提取工艺为:缓冲液体系(Tris-HCl缓冲液浓度40 mmol/L,半胱氨酸浓度6 mmol/L,苯甲基磺酰氟浓度0.4 mmol/L),料液比1∶8(g∶mL),pH 6.0。优化后组织蛋白酶L总酶活力值升至378.36 U,酶活力得率达到150.1 U/g,纯化后的组织蛋白酶L的比活力从0.34 U/mg提高到了101.15 U/mg,纯化倍数达到298.28倍,得率为16.50%,分子质量为46.4 kDa,并进一步验证了提纯后的组织蛋白酶L对肌球蛋白重链和肌动蛋白有降解作用。发现对...     

超微浒苔对凡纳滨对虾消化酶活力的影响

目的研究超微浒苔的不同添加量对凡纳滨对虾消化酶活力的影响。方法取凡纳滨对虾幼虾450尾,采用简单随机抽样的方法分成18个组放入18个相同规格的养殖水箱中。对照组不添加浒苔,Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ组浒苔添加量分别为1%、2%、3%、4%、5%,各组饲粮营养水平除代谢能有微小差异外均完全一致。试验期42 d,于42日龄进行凡纳滨对虾胃肠道消化酶活性的测定。结果 2%、3%、4%的浒苔添加量可显著提高凡纳滨对虾的胃蛋白酶、胃脂肪酶、胰肠蛋白酶和胰肠脂肪酶的活性。各浒苔添加水平对胃、肠淀粉酶的活性影响均不显著。结论本试验条件下,以凡纳滨对虾饲料中超微浒苔添加量为3%最好。     

凡纳滨对虾在二氧化碳麻醉无水保活过程中呼吸代谢及免疫的变化

为了研究凡纳滨对虾在二氧化碳麻醉无水保活过程中呼吸代谢及免疫的变化,本文分析了未处理(对照)、无水保活和复苏3种状态下,凡纳滨对虾葡萄糖(Glu)、乳酸(LD)及鳃中3种糖酵解关键酶、有氧代谢和无氧代谢关键酶、免疫相关酶及血淋巴细胞总数(THC)变化。结果显示:无水保活中对虾Glu浓度低于对照组,LD浓度则显著高于对照组;己糖激酶(HK)、果糖磷酸激酶(PFK)和丙酮酸激酶(PK)这3种糖酵解关键酶活力均高于对照组;反映有氧代谢水平的琥珀酸脱氢酶(SDH)活力低于对照组,反映无氧代谢水平的乳酸脱氢酶(LDH)则相反;对虾THC随着保活时间延长显著低于对照组(p<0.05),超氧化歧化酶(SOD)和过氧化物酶(POD)活力先低于对照组后高于对照组。复苏后,HK、PK、SOD和POD恢复到对照组水平,Glu、LD、PFK、SDH、LDH和THC均与对照有显著差异。无水保活过程中,凡纳滨对虾糖酵解加快以及无氧代谢加强,同时体液免疫功能正常发挥作用,无水保活8 h未造成其代谢及免疫功能紊乱。本研究结果可为对虾类无水保活技术提供理论依据。     

静电场结合冰温技术对凡纳滨对虾贮藏期品质的影响

利用静电场结合冰温技术对凡纳滨对虾进行保鲜,通过不同静电场处理,测定凡纳滨对虾贮藏期间多酚氧化酶(PPO)相对酶活、白度值、感官评分、菌落总数、挥发性盐基氮、pH值、汁液流失率、K值和流变学特性的变化,研究不同静电场(1.5,2.5,3.5kV)结合冰温[(-1±1)℃]技术对凡纳滨对虾的保鲜效果。结果表明:冰温条件下,静电场处理的凡纳滨对虾的PPO酶活有所抑制,感官色泽等指标明显优于单纯冰温样品。贮藏后期,虾肉中菌落总数因电场的作用得到抑制,TVB-N值与K值都有不同程度的减缓,虾肉的汁液流失率在贮藏后期也保持在较低水平。通过流变学特性的测试,发现静电场对延缓虾肉软化也有一定的效果。总体上,2.5kV静电场保鲜效果较优,可延长凡纳滨对虾保质期至8d。     

凡纳滨对虾组织蛋白酶L性质分析及其对肌肉蛋白的降解

本研究从凡纳滨对虾肝胰腺中纯化获得一种组织蛋白酶L,其分子质量约为31 k D,肽质量指纹图谱分析得到8个片段共112个氨基酸残基,与报道的凡纳滨对虾组织蛋白酶L序列完全一致。该酶的最适温度和最适pH值分别为35℃和5.5,且在0~40℃以及pH 5.5~6.5之间酶活力稳定。该酶仅对底物Z-Phe-Arg-MCA特异分解。半胱氨酸蛋白酶抑制剂E-64和Leupeptin对其有明显的抑制作用,而金属蛋白酶抑制剂乙二胺四乙酸和乙二醇二乙醚二胺四乙酸对其有少量的激活作用。扫描电子显微镜观察结果显示,随着低温贮藏时间的延长,对虾肌肉纤维的断裂程度不断增加。十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析显示,组织蛋白酶L可使肌肉蛋白发生分解,推测其可能参与对虾低温贮藏过程中肌肉的降解。