发酵麸皮水提物体内外抗氧化及心脏保护活性研究

为评价发酵麸皮水提物（fermented wheat bran water extract, FWBE）的生物活性,通过测定FWBE的1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl, DPPH）自由基和羟基自由基（·OH）清除率、还原力,评估其体外抗氧化活性。通过以2,2-偶氮二（2-甲基丙基咪）二盐酸盐（2,2'-azobis-2-methyl-propanimidamide, dihydrochloride, AAPH）诱导建立的斑马鱼体内氧化应激模型,测定其活性氧（reactive oxygen species, ROS）产生率、细胞死亡率及脂质过氧化程度,评价FWBE对斑马鱼体内抗氧化的作用。另以特非那定诱导建立斑马鱼心脏损伤模型,测定不同浓度的FWBE预暴露对特非那定诱导的斑马鱼静脉窦-动脉球间距（SV-BA间距）和心率的影响。体外抗氧化结果表明:FWBE溶液在浓度为4 mg/mL时对DPPH自由基和·OH清除作用可达79.40%及53.99%,还原力为1.11。体内抗氧化结果表明在最优浓度下可以缓解由AAPH诱导的ROS生成率、细胞死亡率和脂质过氧化程度（P<0.05）。FWBE预暴露后可显著缓解特非那定诱导引起的斑马鱼心率降低、SV-BA间距上升（P<0.05）,且随着FWBE浓度的升高其缓解作用逐渐增强。综上,FWBE具有较强的体内外抗氧化活性,且具有缓解心脏损伤的作用。     

利用斑马鱼模型研究琼胶寡糖抗氧化机制

为进一步实现琼胶寡糖的高值化利用,探究琼胶寡糖(Agaro-oligosaccharides,AOS)对2,2-偶氮二(2-甲基丙基咪)二盐酸盐(AAPH)诱导损伤后斑马鱼的抗氧化作用及机制。采用高效液相色谱法对酸法制备的琼胶寡糖组分进行分析。优化建立AAPH诱导的斑马鱼模型,并以斑马鱼胚胎存活率、活性氧生成率和细胞死亡率评价不同浓度琼胶寡糖的抗氧化活性。结果表明,琼胶寡糖主要由琼二糖(51.60%)、琼四糖(28.40%)和琼六糖(14.50%)组成,对斑马鱼胚胎添加琼胶寡糖浓度低于200 μg/mL时无致畸、致死毒性;琼胶寡糖(25、50、100 μg/mL)对最优AAPH诱导浓度(15 mmol/L)引起的氧化应激损伤斑马鱼模型有保护作用,且呈剂量依赖性。其中最优浓度100 μg/mL 琼胶寡糖能显著提高斑马鱼胚胎存活率(96.88%,p<0.05),显著降低AAPH引起的斑马鱼体内活性氧生成率(100.53%,p<0.05)和细胞死亡率(101.69%,p<0.05)。本研究通过斑马鱼模型首次揭示了琼胶寡糖可通过清除体内大量活性氧生成和阻止细胞死亡损伤的抗氧化机制实现提高其体内抗氧化活性,为其作为保健功能食品等应用提供了理论基础。     

小米抗氧化肽的纯化及其抑制H2O2诱导损伤的胰岛素瘤细胞氧化应激作用

本研究利用Sephadex G-25和DEAE-32对小米抗氧化肽进行纯化,利用醋酸纤维素薄膜电泳法测定小米抗氧化肽的纯度,以1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH）自由基、超氧阴离子自由基、羟自由基清除实验考察纯化的小米抗氧化肽对自由基的清除能力。在细胞水平研究小米抗氧化肽对胰岛细胞的保护作用,利用H2O2进行大鼠胰岛素瘤细胞（INS-1）氧化应激造模,采用2’,7’-二氯二氢荧光素二乙酸酯荧光探针法检测细胞内活性氧（reactive oxygenspecies,ROS）水平,3-（4,5-二甲基噻唑-2）-2,5-二苯基四氮唑溴盐法检测细胞活力,采用流式细胞技术检测细胞凋亡率,采用实时荧光定量聚合酶链式反应检测抗氧化酶的表达水平。结果表明：经过Sephadex G-25和DEAE-32两次层析,小米抗氧化肽达到了电泳纯;50 μg/mL小米抗氧化肽对超氧阴离子自由基、羟自由基和DPPH自由基的清除率分别为（62.71±3.86）%、（73.56±4.51）%和（82.62±5.25）%;小米抗氧化肽能显著提升H2O2损伤后细胞活力,降低细胞内ROS水平,抑制H2O2诱导损伤的INS-1细胞的凋亡（P＜0.05）,其可能的机制与超氧化物歧化酶1、过氧化氢酶、谷胱甘肽巯基转移酶、醌氧化还原酶1等抗氧化酶系的表达上调有关。结论：小米抗氧化肽对H2O2诱导损伤的INS-1细胞氧化应激具有一定的保护作用。     

鲈鱼抗氧化肽的稳定性分析及其对细胞氧化损伤的保护作用

目的:探究鲈鱼蛋白酶解物（Lateolabrax maculatus protein hydrolysates,LPH）的体外抗氧化活性及稳定性。方法:采用化学实验测定LPH的抗氧化活性以及分析pH、温度、金属离子（K+、Ca2+、Cu2+、Zn2+）和模拟胃肠道消化对其稳定性的影响,并利用过氧化氢诱导的Caco-2细胞氧化损伤模型探究LPH对细胞氧化损伤的保护作用。结果:LPH具有较强的自由基清除活性,其DPPH和ABTS+自由基清除能力的IC₅₀值分别为2.13 mg/mL和31.53 μg/mL。LPH对pH（2.0~12.0）、温度（25~100 ℃）和K+（0.25~2 mmol/L）稳定,0.25~2 mmol/L的Ca2+和Cu2+能够提升其DPPH自由基清除率,而1 mmol/L以上的Zn2+会降低DPPH自由基清除率。此外,LPH具有良好的胃肠道稳定性。在过氧化氢诱导的Caco-2细胞模型中,LPH能够将氧化损伤的细胞存活率由58.02%显著增加至83.40%（P<0.05）,显著抑制细胞内活性氧的释放（P<0.05）并恢复细胞线粒体膜电位至正常水平。此外,LPH能够显著抑制细胞上清中乳酸脱氢酶水平至模型组的19.34%（P<0.05）并显著增加细胞内超氧化物歧化酶和过氧化氢酶活力（P<0.05）。结论:LPH具有较好的抗氧化活性及稳定性,在食品保健领域具有良好的应用前景。     

纳豆抗氧化肽对H2O2诱导HEK293细胞氧化应激损伤的保护作用

目的 评价纳豆肽的抗氧化能力以及对氧化应激HEK293细胞的保护效果。方法 首先以DPPH、ABTS+、·OH和O2-清除能力以及总还原能力为指标,测定酶解得到纳豆肽粗品的抗氧化能力。利用超滤技术对纳豆肽进行分离,测定分离后各组分在不同浓度下对DPPH及ABTS+清除活性。将活性最强的两个组分作为纳豆抗氧化肽,测定它们对H2O2诱导氧化损伤HEK293细胞抗氧化酶含量的影响,评价其对氧化损伤HEK293细胞的保护效果。结果 纳豆肽粗品在8 mg/mL时具有良好的DPPH、ABTS+、·OH和O2-清除能力以及总还原能力,初步证实了其抗氧化潜力。超滤后得到了相对分子质量分别大于30 kDa、10~30 kDa、3~10 kDa、小于3 kDa的四个纳豆肽组分,其对DPPH及ABTS+清除活性均随着浓度的增加呈现上升趋势,特别是在8 mg/mL时,相对分子质量为3~10 kDa和小于3 kDa组分表现出最强的抗氧化活性,将这两个组分作为纳豆抗氧化肽继续研究。后续的细胞试验表明,这两个组分能够显著提高氧化应激下HEK293细胞的存活率。在50~300μg/mL的剂量范围内,小于3 kDa组分的纳豆抗氧化肽可使细胞存活率恢复至未损伤时的水平,而3~10 kDa组分也使损伤细胞的存活率提高了40.8%。同时,纳豆抗氧化肽均能提高氧化损伤HEK293细胞中的SOD、GPX和CAT等抗氧化酶的含量,小于3 kDa组分和3~10 kDa组分的纳豆抗氧化肽分别使SOD含量提高了49.52%和50.80%,GPX含量提高了49.52%和50.81%,CAT含量提高了93.64%和91.97%。结论 纳豆抗氧化肽可以有效地缓解H2O2诱导的HEK293细胞的氧化应激损伤,为纳豆抗氧化肽的应用提供理论依据。     

野阳合花色苷提取物的抗氧化活性

目的：研究野阳合花色苷提取物的体外抗氧化活性,建立过氧化氢（H2O2）诱导的中国仓鼠肺细胞 （V79-4细胞）氧化损伤模型,初步评价其抗氧化应激作用。方法：采用高效液相色谱-质谱联用分析野阳合花色 苷组成;测定花色苷提取物对2’-联氨-双-3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸（2,2’-azino-bis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid),ABTS）自由基和1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH）自由基的清除能力;建 立H2O2诱导V79-4细胞氧化损伤模型,分别采用噻唑蓝、硫代巴比妥酸反应产物和荧光探针2’,7’-二氢二氯荧光黄 双乙酸钠测定花色苷提取物对V79-4细胞氧化损伤的保护作用。结果：野阳合提取物含有4 种花色苷,结合保留时 间和质谱数据等信息,推测分别为矢车菊素-3-半乳糖苷、矢车菊素-3-（6”-香豆酰）葡萄糖苷、芍药色素-3-葡萄 糖苷和芍药色素-3-（6”-香豆酰）葡萄糖苷;花色苷提取物对ABTS＋·和DPPH自由基有良好的清除效果,半抑制 浓度分别是（1.72±0.26） μg/mL和（0.74±0.24） μg/mL,清除能力优于阳性对照水溶性VE;细胞氧化损伤模型 中,50～200 μg/mL的花色苷提取物预处理H2O2诱导V79-4细胞氧化损伤,能明显抑制细胞存活率的下降和脂质过 氧化,并降低损伤后胞内活性氧簇水平。结论：野阳合花色苷提取物具有良好的体外自由基清除能力,并对H2O2 诱导的V79-4细胞氧化损伤具有保护作用。     

血根碱清除自由基及抑制生物大分子氧化的作用

目的：评价血根碱的体外抗氧化活性,为血根碱作为天然抗氧化剂的应用提供理论依据。方法：采用DPPH自由基清除法测定血根碱的体外抗氧化能力;采用Cu2+/H2O2和AAPH体系诱导牛血清白蛋白（bovine serum albumin,BSA）氧化损伤和羰基化损伤模型,研究血根碱对上述损伤的保护作用;采用TBA法分别测定血根碱对FeSO4诱导的大豆卵磷脂氧化损伤的抑制作用,及AAPH诱导的鲱鱼精DNA氧化损伤的抑制作用。结果：血根碱可有效清除DPPH自由基,且呈浓度依赖性,在100 μmol/L时清除率为85.94%;1～100 μmol/L的血根碱可显著保护Cu2+/H2O2及AAPH体系诱导的BSA损伤;10～100 μmol/L的血根碱可显著保护由Cu2+/H2O2体系诱导的BSA蛋白羰基化,当浓度为0.1～100 μmol/L时可显著保护由AAPH诱导的BSA蛋白羰基化;血根碱浓度在6.25～100 μmol/L范围内均可显著抑制由FeSO4及AAPH诱导的大豆卵磷脂及鲱鱼精DNA的氧化损伤。结论：血根碱可有效清除自由基及保护蛋白氧化损伤和羰基化损伤,亦可显著抑制脂质及DNA氧化损伤。     

阿胶对丙烯酰胺诱导的斑马鱼胚胎氧化应激损伤的保护作用

丙烯酰胺（AA）被国际癌症研究中心列为2A类致癌物,在油炸、烘烤食品中普遍存在。目前研究大多数聚焦于如何减少加工过程中丙烯酰胺的产生,以及植物化学物对丙烯酰胺产生危害的保护作用,而对动物性食品方面的研究甚少。本文探讨了阿胶对丙烯酰胺诱导的斑马鱼胚胎氧化应激损伤的保护作用。本试验中设1个空白对照组,1个AA组和3个阿胶处理组（0.05,0.10,0.50 mg/mL）,在胚胎7～9 hpf（受精后小时数）时用不同浓度阿胶溶液处理1 h,然后与AA组一起用3 mmol/L AA溶液处理至24 hpf,并都改用普通培养液进行培养。培养至72 hpf,测定各组胚胎的存活率、活性氧（ROS）和丙二醛（MDA）含量、过氧化氢酶（CAT）、超氧化物歧化酶（SOD）和谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）水平,以及氧化应激相关基因表达情况。结果表明,与对照组相比,AA组显著降低了胚胎存活率和抗氧化酶活性（P＜0.05）,提高了ROS和MDA含量（P＜0.05）;与AA组相比,用阿胶进行预处理能显著提高胚胎存活率和抗氧化酶活性（P＜0.05）,显著抑制ROS和MDA的生成量（P＜0.05）。基因检测结果表明,与AA组相比,阿胶处理提高了137.19%的Nrf2（NF-E2-related factor）水平及其下游抗氧化酶基因的表达量（P＜0.05）。结论：阿胶通过调节抗氧化酶的活性以及氧化应激相关基因的表达,对丙烯酰胺诱导的斑马鱼胚胎氧化应激损伤起到保护作用。     

共轭亚油酸-精氨酸的制备及其抗氧化活性研究

等摩尔的共轭亚油酸(CLA)和精氨酸(Arg)通过溶解、混合、浓缩和冷冻干燥等步骤制得水溶性的共轭亚油酸-精氨酸(CLA-Arg)复合物,探究了CLA-Arg复合物对DPPH自由基、ABTS自由基的清除能力和对卵黄脂蛋白过氧化的抑制作用,并通过Rancimat法测定不同抗氧化剂对大豆油氧化诱导时间的影响。结果表明:CLA-Arg复合物对DPPH自由基(IC_(50)2.76 mg/mL)和ABTS自由基(IC_(50)1.43 mg/mL)均有良好的清除效果;在浓度为1.0 mg/mL时,其对卵黄脂蛋白过氧化体系的抑制率达到41.8%;在添加量为0.1%时,使得氧化诱导时间延长到1.79 h且高于BHT,从而CLA-Arg具有良好的抗氧化活性。     

莲壳多酚对T-BHP致HepG2氧化应激损伤的保护作用

目的：研究莲子壳多酚对叔丁基过氧化氢（tert-butylhydro-peroxide,T-BHP）诱导的HepG2氧化应激损伤的保护作用。方法：选取存活率接近50%的T-BHP浓度作为氧化损伤模型建立的浓度。以细胞活力、活性氧水平（reactive oxygen species,ROS）、丙二醛水平（malondialdehyde,MDA）、乳酸脱氢酶水平（Lactic dehydrogenase,LDH）、谷胱甘肽（Glutathione,GSH）水平及抗氧化酶相关基因表达量为评价指标,以茶多酚为阳性对照,评价不同浓度（2.5、5、7.5μg/mL）莲子壳多酚抗氧化应激活性水平。结果：当120μmol/L浓度的T-BHP造模4 h后,细胞存活率达49.18%±7.55%,符合模型构建要求,故选择120μmol/L为氧化损伤模型的建模浓度进行后续实验。莲子壳多酚能极显著抑制T-BHP造成的细胞存活率降低（P<0.01）,7.5μg/mL时,ROS水平降低45.99%,MDA下降58.77%,LDH下降71.61%,GSH提高206.60%(P<0.05),抗氧化酶相关基因...     

大孔树脂纯化沉香叶黄酮工艺优化及纯化前后抗氧化性比较

研究沉香叶黄酮的大孔树脂纯化工艺及其抗氧化性。通过静态和动态实验,考察树脂种类、粗提液浓度、洗脱剂、上样流速、洗脱流速对沉香叶黄酮吸附解吸性能的影响,确定最佳纯化工艺条件;采用羟自由基法、DPPH自由基和ABTS自由基法,比较纯化前后沉香叶黄酮的抗氧化性。结果表明,NKA-9大孔树脂纯化沉香叶黄酮效果最好,最佳条件为:以1.5 mL/min速度将5.0 mg/mL粗提液上柱,用70%(v/v)乙醇以2.0 mg/mL速度洗脱,此条件下沉香叶黄酮纯度提高至76.58%±3.46%。沉香叶黄酮纯化后清除羟自由基、DPPH自由基和ABTS自由基IC₅₀值分别为(0.120±0.008)、(0.016±0.009)、(0.042±0.002)mg/mL,远低于纯化前的(0.300±0.015)、(0.170±0.008)、(0.160±0.009)mg/mL,说明沉香叶黄酮纯化前后均具有较强的抗氧化性,纯化后抗氧化性明显增强。NKA-9大孔树脂适合分离纯化沉香叶黄酮。     

塔尔米抗氧化饼干配方优化及对果蝇II型糖尿病模型降糖作用的影响

以塔尔米、山楂及糙米为主要原料制作塔尔米饼干,并通过抗氧化实验和果蝇实验评价塔尔米饼干的抗氧化活性及降糖作用。以质构特性和感官评分为指标,研究原料的粗细度对饼干的影响;以DPPH自由基清除率、ABTS+自由基清除率、总抗氧化能力、感官评分上述四项的综合评分为指标,通过单因素和正交试验确定塔尔米饼干的最优配方;以DPPH自由基清除率、ABTS+自由基清除率、总抗氧化能力为指标,评价塔尔米饼干的抗氧化能力;以果蝇为实验动物,建立高糖诱导的果蝇II型糖尿病模型,并以总蛋白、甘油三酯、海藻糖含量为考察指标,分析塔尔米饼干对果蝇模型糖代谢的影响。结果表明:当原料的粗细度为80目时,制得饼干的弹性、硬度、脆性及感官评价均优于40和60目;塔尔米饼干的最优配方为:塔尔米粉60%、山楂粉10%、糙米粉10%,在此条件下塔尔米饼干的综合评分为73.33±6.24 分,其中DPPH自由基清除率的IC₅₀值为2.22±0.12 mg/mL,ABTS+自由基清除率的IC₅₀值为3.84±0.40 mg/mL;当塔尔米饼干溶液浓度为10 mg/mL时,其总抗氧化能力0.74±0.02,三者均优于普通饼干,弱于阳性对照V_C,表明塔尔米饼干具有一定的抗氧化活性;果蝇实验得出塔尔米饼干对高糖诱导的果蝇II型糖尿病模型的总蛋白含量、甘油三脂含量及海藻糖的含量的都有显著降低的作用,塔尔米饼干具有降糖的功效。     

神农架林区中蜂蜜理化指标及抗氧化活性分析

该研究以湖北神农架林区5个中蜂蜜样品为研究对象,对其理化指标和总酚酸、总黄酮含量进行测定,采用DPPH·和ABTS+自由基清除试验测定其抗氧化活性。试验结果表明,神农架林区5个中蜂蜜样品理化指标均符合GH/T 18796-2012《蜂蜜》,总黄酮含量为(9.95±0.04)mg/100 g^13.66±0.04mg/100 g;总酚酸含量为(20.69±0.03)mg/100 g^31.71±0.07mg/100 g;5个中蜂蜜样品均具有DPPH·和ABTS+自由基清除能力,IC50值分别在(39.14±0.16)mg/mL^106.63±0.38mg/mL和(48.48±0.22)mg/mL^127.07±1.41mg/mL之间。其中总酚酸含量与清除DPPH·和ABTS+自由基能力存在显著正相关,其相关系数分别为0.973、0.920。该研究首次报道了神农架林区中蜂蜜的理化性质及其抗氧化活性,为神农架林区中蜂蜜的开发利用提供了理论依据。     

海绵Hyrtios erectus抗氧化产物超声提取工艺优化及其抗氧化活性分析

为探索海绵动物抗氧化提取物的提取工艺及提取物的抗氧化活性,以H. erectus海绵乙醇提取物的DPPH自由基清除率为响应值,分别考察超声温度、超声时间和超声功率3个影响因素,通过Box-Behnken响应面设计确定最佳超声提取工艺。以该工艺提取物为实验材料,分析其对DPPH自由基、ABTS⁺·和·OH的清除效果,通过构建H₂O₂氧化损伤模型研究提取物对氧化损伤L02细胞的活力和对H₂O₂氧化应激胞内ROS含量的影响。结果表明:可操作的最佳工艺为超声温度57℃,超声时间60 min,超声功率490 W,在此条件下,提取物DPPH自由基清除率为61.98%±1.52%,与预测值62.16%吻合度较好,该提取物对DPPH自由基、ABTS⁺·和·OH具有良好的清除效果,提取物处理组细胞活力均显著高于模型组(P<0.05),且细胞内ROS荧光强度均极显著低于模型组(P<0.01)。总之,该工艺提取物具有较广泛的抗氧化活性,对H₂O...     

番茄果胶和半纤维素抗氧化活性分析

为了探究番茄细胞壁中不同类型果胶和半纤维素的抗氧化活性,利用水、EDTA、Na₂CO₃、4% KOH和24% KOH溶液分步提取,得到水溶性果胶(WSP)、离子结合型果胶(CSP)、共价结合型果胶(SSP)、松散结合型半纤维素(LH)和紧密结合型半纤维素(TH)五种组分,对各组分进行了氧自由基吸收能力(ORAC)、DPPH自由基(DPPH·)清除能力、ABTS自由基(ABTS+·)清除能力和铁离子还原能力(FRAP)的分析。结果表明,番茄WSP含量显著高于CSP和SSP,为1.05 mg GalUA/g FW,TH含量显著高于LH(p<0.05),为0.09 mg Glu/g FW。番茄不同类型果胶和半纤维素均具有一定的抗氧化活性。其中,CSP的ORAC、DPPH·清除能力和ABTS+·清除能力较强,综合抗氧化活性较高。在5 mg/mL时,CSP的ORAC值相当于76.4 μmol/L Trolox,DPPH·和ABTS+·的清除率分别达到61.0%和99.8%。而SSP、LH和TH具有较强的FRAP。相关性分析表明各组分与抗氧化活性密切相关。研究结果为番茄的综合加工利用和作为功能性食品添加成分的开发提供了理论根据。     

罗非鱼尾色素中抗氧化成分的提取及活性研究

为了研究鱼尾色素的抗氧化性,以提取率和DPPH自由基清除率为评价指标,采用溶剂浸提的方法对色素进行提取,利用DPPH法、ABTS法和铁氰化钾还原法对提取物进行抗氧化实验。结果表明,鱼尾色素抗氧化成分提取的较佳工艺为浸提溶剂无水乙醇、温度20℃、料液比(g/mL)1:5、时间24h、浸提1次;此时色素提取物的提取率达2.40%,DPPH自由基清除率为58.44%。抗氧化性实验表明,鱼尾色素提取物具有较强的清除DPPH自由基和ABTS+自由基能力,其IC50值为0.3891mg/mL和1.8654mg/mL。     

无梗五加叶体外抗氧化活性研究

研究无梗五加叶及其不同部分的抗氧化活性,研究其作为食用天然抗氧化剂的可行性.采用DPPH·、ABTS·+自由基及还原性反应体系,利用分光光度法测定无梗五加叶总提液及其不同组分在不同浓度下的抗氧化能力和总酚含量.结果表明:无梗五加叶的不同部分对DPPH·、ABTS·+自由基均具有较强的清除能力,对Fe3+有较强的还原能力...