菊糖抗氧化活性及其机理

通过测定菊糖的还原能力、Fe2+螯合能力,以及DPPH自由基清除能力等方法,评价菊糖的抗氧化能力,并采用Caco-2细胞模型探讨其抗氧化机理。3种抗氧化活性实验结果表明,菊糖具有良好的抗氧化活性。与阳性对照组比较,菊糖对H2O2诱导的Caco-2细胞氧化损伤具有显著的保护作用。当菊糖质量浓度为0.8 mg/m L时,Caco-2细胞中过氧化氢酶、谷胱甘肽还原酶,以及谷胱甘肽过氧化物酶的活力,分别提高了35.8%,47.6%和61.2%。菊糖主要通过提高细胞内抗氧化酶的活力发挥其抗氧化作用。     

5′-磷酸腺苷(5′-AMP)体外抗氧化作用的研究

目的:研究5′-磷酸胞苷(5′-AMP)清除活性氧自由基能力及对体外氧化损伤脾细胞的损伤修复能力;方法:采用化学比色法测定5′-AMP清除羟自由基和DPPH自由基的能力,建立H2O2氧化损伤体外培养脾细胞模型,用MTT法检测5′-AMP的修复作用,以评价5′-磷酸腺苷(5′-AMP)的体外抗氧化能力;结果:5′-磷酸腺苷具有剂量依赖性的清除羟自由基和修复脾细胞氧化损伤的能力,但是5′-AMP的DPPH清除能力比较弱.20 mmol/L 5′-AMP的羟自由基清除能力高速53.009%.而DPPH清除率为17.190%;10mmol/L5′-AMP清除羟自由基和DPPH自由基的能力分别相当于7.5mmol/L Vc和0.02 mmol/L Vc;与对照组相比,添加0.5,1,5,10 mmol/L 5′-AMP均能极显著(P＜0.01)地修复H2O2诱导的脾细胞氧化损伤,其中10 mmol/L 5′-AMP作用最强;结论:5′-磷酸腺苷具有显著的抗氧化作用.     

5’-磷酸腺苷（5’-AMP）体外抗氧化作用的研究

目的：研究5’-磷酸胞苷（5’-AMP）清除活性氧自由基能力及对体外氧化损伤脾细胞的损伤修复能力;方法：采用化学比色法测定5’-AMP清除羟自由基和DPPH自由基的能力,建立H2O2氧化损伤体外培养脾细胞模型,用MTT法检测5’-AMP的修复作用,以评价5’-磷酸腺苷（5’-AMP）的体外抗氧化能力;结果：5’-磷酸腺苷具有剂量依赖性的清除羟自由基和修复脾细胞氧化损伤的能力,但是5’-AMP的DPPH清除能力比较弱。20mmol／L5’-AMP的羟自由基清除能力高达53．009％,而DPPH清除率为17．190％;10mmol／L5＇-AMP清除羟自由基和DPPH自由基的能力分别相当于7．5mmol／L Vc和0．02mm01／LVc;与对照组相比,添加0．5,1,5,10mmol／L5’-AMP均能极显著（P〈0．01）地修复H2O2诱导的脾细胞氧化损伤,其中10mmol／L5’-AMP作用最强;结论：5’-磷酸腺苷具有显著的抗氧化作用。     

紫芜菁乙醇提物对Caco-2细胞氧化损伤的保护作用

探讨紫芜菁乙醇提取物(BREE)的体外抗氧化能力及其对人肠上皮Caco-2细胞氧化损伤保护效果。二苯代苦味酰基自由基(DPPH)、羟基自由基(·OH)清除率与总还原力评估BREE的体外抗氧化力。过氧化氢(H_2O_2,150μmol/L)建立Caco-2细胞氧化损伤模型评估BREE的细胞保护效果。受损细胞生存率的影响以MTT法测定。细胞内超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)和谷胱甘肽过氧化酶(GSH-Px)水平依说明用试剂盒测定。硫代巴比妥酸法测定丙二醛(MDA)含量。2’,7’-二氢二氯荧光黄双乙酸钠法测定细胞内活性氧(ROS)水平。酶联法测定白介素(Interlukin,IL)-1β和IL-8的水平。BREE具有较强的自由基(DPPH和·OH)清除力和总还原力。BREE能显著抑制H_2O_2造成的细胞死亡,提高受损细胞中抗氧化物酶(SOD、CAT和GSH-Px)活性,降低受损细胞内MDA与ROS的生成,并抑制IL-1β和IL-8的分泌。结果提示,BREE具有较强的体外抗氧化能力,能增强细胞内源性抗氧化酶的活力显著改善H_2O_2引发的Caco-2细胞氧化应激损伤并降低炎症反应。     

不同分子量红花籽抗氧化肽稳定性研究

目的:研究不同分子量红花籽蛋白抗氧化肽活性的稳定性。方法:以脱壳红花籽粕为实验材料,经复合酶酶解分离制备抗氧化肽,以1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1-diphenyl-2-trinitrophenylhydrazine,DPPH）自由基、超氧阴离子自由基（superoxide anion radical,O₂?·）及羟自由基（hydroxyl free radicals,·OH）清除能力为指标,探讨温度、pH、食品原辅料、金属离子及模拟胃肠消化等环境因素对不同分子量红花籽抗氧化肽活性的影响。结果:红花籽蛋白酶解物<3 kDa（SSPH-Ⅰ）、3~5 kDa（SSPH-Ⅱ）较分离前活性显著增加（P<0.05）,SSPH-Ⅲ（5~10 kDa）和SSPH-Ⅳ（>10 kDa）较分离前活性显著降低（P<0.05）,选取活性显著增加组分研究发现SSPH-Ⅰ抗氧化活性更加稳定,能在60~121 ℃高温、pH6~8弱酸弱碱条件下保持活性,各自由基清除率维持率达到90%以上,10 g/100 mL NaCl和葡萄糖、0.2 g/100 mL柠檬酸对SSPH-Ⅰ抗氧化活性有增强协同作用,各自由基清除率维持率增加至105%左右,10 g/100 mL的蔗糖和0.2 g/100 mL的防腐剂对活性影响不大,添加Cu2+、Zn2+和K+金属离子对SSPH-Ⅰ抗氧化稳定性显著下降（P<0.05）,其影响顺序为:Cu2+>Zn2+>K+>Mg2+>Ca2+,经模拟胃肠消化后活性较稳定,维持率为80%。结论:筛选得到<3 kDa红花籽蛋白抗氧化肽组分活性较高且稳定,为其工业化生产及应用提供理论依据。     

玉米糖肽的抗氧化活性

利用体外化学法研究糖基化修饰对玉米肽以及体外消化对玉米糖肽抗氧化活性的影响,然后构建H2O2诱导的Caco-2细胞氧化性损伤模型,在细胞水平上对玉米糖肽的抗氧化活性进行研究。结果表明：经D-氨基葡萄糖修饰后,玉米肽的抗氧化活性显著增加(P<0.05),且在实验浓度范围内,玉米糖肽的还原力和Fe²⁺螯合能力显著高于同浓度的GSH和玉米肽(P<0.05)。除Fe²⁺螯合能力外,体外模拟胃肠消化不能破坏玉米糖肽的自由基清除能力和还原力。当浓度为75 μg/mL时,玉米糖肽的预处理可以显著提高氧化损伤Caco-2细胞内超氧化物歧化酶、谷胱甘肽还原酶、过氧化氢酶和γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶的活力,从提高细胞抗氧化水平的角度提高了细胞存活率。     

辣木籽抗氧化肽的分离鉴定及其稳定性分析

采用碱性蛋白酶酶解辣木籽蛋白制备抗氧化肽,通过超滤、Sephadex G-15葡聚糖凝胶柱层析分离纯化辣木籽抗氧化肽,利用LC-MS/MS鉴定其抗氧化肽序列,并分析pH、金属离子、温度对辣木籽抗氧化肽活性的影响。结果表明:当酶解物、超滤物（<3 kDa）、柱层析纯化物的浓度为8 mg/mL时,对应的还原力吸光值分别为0.21、0.75和0.83;当三者的浓度为0.6 mg/mL,对应的DPPH自由基清除率分别为50%、65%和71%。柱层析纯化物中鉴定出了5条潜在的抗氧化肽序列。稳定性研究表明,辣木籽抗氧化肽具有较好的温度和pH稳定性,65 ℃下加热30 min使其活性提高了4%;常温条件下0.25~2 mmol/L浓度的K+、Cu2+、Mg2+、Ca2+能提升辣木籽抗氧化肽的DPPH自由基清除率。综上,辣木籽抗氧化肽具有一定的活性及加工稳定性,可为辣木籽抗氧化肽的开发利用提供参考。     

具抗氧化功能益生菌菌株筛选及其对丙烯酰胺诱导肠上皮细胞氧化损伤的保护作用

目的:以1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH)自由基清除率为指标,筛选抗氧化能力强的乳杆菌,并研究其对模拟胃肠道环境的耐受性及对丙烯酰胺所致肠上皮细胞氧化损伤的保护作用。方法:以DPPH自由基清除率为指标,筛选得到清除率高的2株乳杆菌GBE17和GBE29,并进行16S rDNA测序鉴定。构建丙烯酰胺诱导的Caco-2氧化损伤模型,通过形态学观察和测定细胞培养上清液、细胞裂解液中的抗氧化物相关物质及酶活,评价其不同处理方式对Caco-2细胞氧化损伤的保护作用,并分别测定其在pH 3.0、2.5及胆盐质量分数为0.05%、0.1%环境下处理1~4 h的活菌数变化。结果:植物乳杆菌GBE17和唾液乳杆菌GBE29发酵上清液的DPPH自由基清除率分别为89.44%、79.24%。GBE17的治疗组与干预组和GBE29的干预组均可降低乳酸脱氢酶的释放,提高细胞内外超氧化物歧化酶、过氧化氢酶活性。2株乳杆菌在pH 3.0和胆盐质量分数0.1%的环境下处理4 h,存活数均高于107 CFU/mL。结论:植物乳杆菌GBE17和唾液乳杆菌GBE29通过提高细胞内抗氧化酶系的活性,有效地降低丙烯酰胺诱导肠上皮细胞的氧化损伤,且具有较好的胁迫耐受能力。     

西番莲果皮花色苷对H2O2诱导L02细胞氧化损伤的抑制作用

目的 探究西番莲果皮花色苷(peel of passion fruits anthocyanins, PPFA)对H2O2诱导人正常肝细胞L02氧化损伤的抑制作用。方法 采用噻唑蓝[3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide, MTT]法建立H2O2诱导L02细胞氧化损伤的模型, 通过测定细胞丙二醛(malondialdehyde, MDA)、乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase, LDH)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD)、过氧化氢酶(catalase, CAT)和谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase, GSH-Px)指标, 观察PPFA对细胞氧化损伤的抑制作用, 结合非靶向代谢组学显著差异代谢物分析, 探讨其抗氧化机制。结果 PPFA体外清除1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl, DPPH)自由基的半抑制浓度(half maximal inhibitory concentration, IC50)值为34.62 μg/mL, 有一定的羟自由基、超氧阴离子自由基清除能力。细胞实验表明, PPFA能够显著提高H2O2损伤的L02细胞总抗氧化力(P<0.05), 并显著降低损伤细胞中MDA生成量和LDH的释放量(P<0.05); 与损伤组相比, PPFA各剂量组SOD活性均显著升高(P<0.05), 中剂量组CAT与低剂量组GSH-Px的活性显著升高且达空白组水平(P<0.05)。代谢组学分析表明, 与损伤组相比, PPFA处理后细胞存在23种显著差异代谢物, 涉及到谷胱甘肽代谢、胆汁分泌、铁死亡和脂肪酸生物合成途径。结论 PPFA对H2O2诱导L02细胞的氧化损伤有抑制作用, 表现出显著的细胞抗氧化活性。     

紫菜薹乙醇提取物对Caco-2细胞氧化损伤保护作用

研究紫菜薹乙醇提取物的体外抗氧化能力及其对人肠上皮Caco-2细胞氧化损伤保护效果。使用二苯代苦味酰基自由基(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH)、羟基自由基(Hydroxyl radicals,·OH)清除率与总还原力来评价紫菜薹乙醇提取物的体外抗氧化能力。通过建立过氧化氢(H2O2,250μmol/L)诱导的Caco-2细胞氧化损伤模型来评估紫菜薹乙醇提取物对氧化损伤细胞的保护效果。紫菜薹乙醇提取物对受损细胞生存率的影响以MTT法测定。细胞内超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)、过氧化氢酶(Catalase,CAT)和谷胱甘肽过氧化酶(Glutathione peroxidase,GSH-Px)水平按说明书使用试剂盒测定。丙二醛(Malondiadehycle,MDA)含量以硫代巴比妥酸法(Thiobarbituric acid reactive substance,TBARS)测定。2’,7’-二氢二氯荧光黄双乙酸钠(Dichloro-dihydro-fluorescein diacetate,DCFH-DA)探针测定细胞内活性氧(Reactive oxygen species,ROS)水平。炎性介质白介素(Interlukin,IL)-1β和IL-8的分泌水平以酶联法(Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)测定。紫菜薹乙醇提取物具有较强的DPPH和·OH自由基清除力和总还原力,能显著提升受损细胞的生存率并增强细胞内源性抗氧化物酶(SOD、CAT和GSH-Px)的活性。同时,紫菜薹乙醇提取物还能降低受损细胞内MDA与ROS水平,并抑制IL-1β和IL-8的分泌。结果提示,紫菜薹乙醇提取物具有较强的体外抗氧化能力,可通过增强细胞内源性抗氧化酶的活力来显著改善H_2O_2造成的Caco-2细胞氧化应激损伤并降低所引发的炎症反应。     

紫娟茶花青素的抗氧化活性及稳定性

目的:研究紫娟茶花青素的抗氧化活性及稳定性。方法:采用FRAP法、ABTS法和DPPH法测定紫娟茶花青素的抗氧化能力,并以紫娟茶花青素的保存率为考察指标,探讨贮藏条件对其稳定性的影响。结果:当紫娟茶花青素的FRAP值为0.5 mmol/L时,所需花青素浓度为0.39 μg/mL;其清除ABTS+·和DPPH·的IC₅₀分别为0.76和0.13 μg/mL;在供试浓度范围内,紫娟茶花青素的总抗氧化能力、清除ABTS+·和DPPH·能力均与其浓度呈正相关,且均强于V_C。pH可明显影响紫娟茶花青素溶液的颜色和光谱特性,当pH≤6.0时,其颜色变化相对稳定;随着温度升高、保存时间延长,紫娟茶花青素的保存率逐渐降低(p<0.05);光照、氧化剂(H₂O₂)、还原剂(Na₂SO₃)及金属离子(Fe3+、Cu2+、Mg2+、Ca2+、Al3+)对花青素保存率也有显著性影响(p<0.05),且光照时间越长,H₂O₂、Na₂SO₃浓度越高,作用时间越长,花青素的保存率越低。结论:紫娟茶花青素具有较强的抗氧化活性,但其稳定性相对较差,宜于酸性、低温、避光环境中保存;且保存时应避免接触氧化剂、还原剂及Fe3+、Cu2+、Mg2+等金属离子。     

橄榄苦苷对核桃油抗氧化稳定性的研究

通过测定过氧化值(POV)、清除DPPH自由基、清除羟自由基能力以及总抗氧化能力的体外抗氧化活性,探究橄榄苦苷对核桃油的抗氧化能力,并通过响应面法优化,筛选出最佳浓度复配抗氧化剂。结果表明:橄榄苦苷对核桃油有较强的抗氧化和清除自由基的能力,当橄榄苦苷的添加量为200 mg/kg时,其POV值为(12.6±0.49) mmol/kg,清除DPPH能力、羟自由基能力为(72.5±0.38)%、(76±0.62)%,总抗氧化能力为(69.6±0.55)%;橄榄苦苷、柠檬酸和VC对核桃油的抗氧化稳定性有较好的增效作用,最佳浓度配方为265 mg/kg橄榄苦苷+135 mg/kg柠檬酸+197 mg/kg%VC。     

圆叶葡萄籽原花色素稳定性及其抗氧化性研究

以诺贝尔圆叶葡萄籽为原料,用乙醇提取原花色素并研究其稳定性和抗氧化性。结果表明,圆叶葡萄籽原花色素在温度低于80 ℃时具有良好的稳定性,pH 4～8范围内该原花色素较稳定;金属离子K+、Na+、Mg2+、Ca2+、Zn2+对原花色素的稳定性影响不明显,而Cu2+、Fe3+有明显的破坏作用;抗坏血酸对原花色素无明显影响,过氧化氢则显著降低其稳定性;较长时间的光照对其稳定性不利。抗氧化试验结果表明,圆叶葡萄原花色素对1,1-二苯-1-苦基苯肼自由基（DPPH·）、羟基自由基（·OH）有明显的清除效果,并具有一定的还原能力。     

响应面法优化爵床总黄酮的提取工艺及理化性质

目的:采用响应面法优化爵床总黄酮的回流提取工艺,并对其进行稳定性和抗氧化活性考察。方法:以爵床为药材,选择不同的料液比、乙醇体积分数、提取时间和提取温度作为单因素,以爵床总黄酮提取量为指标,进行单因素考察;继而运用响应面法进行优化,获得最佳提取工艺。通过设定不同的温度、光照、pH以及金属离子等条件,考察爵床总黄酮的稳定性;通过对DPPH自由基清除率进行测定,评价其抗氧化活性。结果:爵床总黄酮提取工艺的最佳条件,料液比1:23 g/mL、乙醇体积分数55%、提取时间20 min、提取温度70 ℃;提取量为9.02 mg/g。稳定性试验结果表明,爵床总黄酮在30~90 ℃、pH4~9条件下较稳定,在金属离子Cu2+、Fe2+、Zn2+、Al3+、Ba2+条件下较不稳定。DPPH自由基清除率结果表明,爵床总黄酮对DPPH自由基的IC₅₀为0.079 mg/mL。结论:响应面法优化爵床总黄酮回流提取工艺稳定、可靠,提取物具有一定的稳定性和抗氧化活性。     

浸泡时间对绿豆浸泡液中多酚及抗氧化活性的影响

研究了不同浸泡时间对绿豆浸泡液中多酚、黄酮、DPPH自由基清除能力、ABTS+·自由基清除能力、总抗氧化能力的影响,分析了多酚、黄酮含量与抗氧化能力之间的相关性。结果表明:浸泡时间在4~12 h内,随着浸泡时间的增加,浸泡液中多酚、黄酮含量显著增加,ABTS+·自由基清除能力、DPPH自由基清除能力显著增强,浸泡12 h后,增长趋势渐缓;总抗氧化能力在4~8 h内,随浸泡时间的增加而快速增大,之后保持缓慢增长,24 h时总抗氧化能力达到最大;多酚、黄酮含量与抗氧化能力之间具有显著的相关性(P0.01)。     

龙须菜ACE抑制肽的体外稳定性和抗氧化活性研究

以龙须菜为原料,通过酶解法制备分子量<1 kDa的龙须菜蛋白,分别以冷冻干燥和喷雾干燥收集多肽组分(GLP-F、GLP-S),研究其在体外环境的活性保留率和抗氧化能力。通过血管紧张素转化酶(Angiotensin Ⅰ converting enzyme, ACE)活性抑制、总抗氧化能力、DPPH·清除能力、羟自由基清除能力、超氧阴离子清除能力等实验测定多肽抗氧化能力及体外稳定性。结果表明,通过ACE抑制活性为指标,两多肽在ACE抑制活性均有较好的IC₅₀值(0.62、0.70 mg/mL),金属离子Zn2+和Cu2+促进两个多肽ACE活性的保留,Al3+、K+、Fe3+等离子均能较好保留两多肽的ACE抑制活性,Ca2+的加入则降低了多肽的ACE抑制活性。随着NaCl浓度的升高,GLP-F和GLP-S的ACE抑制活性降低;高糖浓度下GLP-F的ACE抑制活性较好保留,GLP-S的ACE抑制活性显著增加（P<0.05）。GLP-F在强酸强碱环境下ACE抑制活性略降低5%,GLP-S的ACE抑制活性不受酸碱pH环境的影响;在低于40 ℃的温度条件下,GLP-F和GLP-S的ACE抑制活性得到保留。在模拟体外胃肠消化系统可知:GLP-F为前体型抑制肽,GLP-S为真抑制型抑制肽。?20 ℃条件下两者活性都能保持稳定,而GLP-F在4 ℃贮藏至14 d活性保留降至40.67%。体外抗氧化试验表明,GLP-S在总抗氧化能力、DPPH·、·OH和O₂?·清除能力方面均优于GLP-F。因此,GLP-F多肽体外降血压活性稳定性上更优于较GLP-S,而GLP-S在抗氧化方面效用高于GLP-F,此为龙须菜多肽开发为天然降血压肽和抗氧化肽提供理论参考。     

不同蜂蜜抗氧化活性和抑制酪氨酸酶活性的比较

该研究采用分光光度法测定了10种蜂蜜中总酚酸和总黄酮的含量及对酪氨酸酶的活性抑制,采用1,1-二苯基苦基苯肼（DPPH）自由基清除法和铁离子还原（FRAP）法测定了其体外抗氧化活性。结果表明,10种蜂蜜总酚酸含量为116.46~2 133.33 mg PCA/kg,总黄酮含量为8.31~120.81 mg QUE/kg,DPPH自由基清除IC50为16.25~674.22 mg/mL,铁离子还原FRAP值为0.50~7.39 mmol Fe2+/kg,酪氨酸酶抑制IC50为9.15~350.26 mg/mL。荞麦蜜的DPPH自由基清除能力（IC50为16.25~45.83 mg/mL）、铁离子还原能力（3.21~7.39 mmol Fe2+/kg）和酪氨酸酶活性抑制能力（IC50为9.15~14.16 mg/mL）显著高于其他几种蜂蜜（p<0.05）。蜂蜜抗氧化活性、酪氨酸酶抑制活性与蜂蜜中总酚酸、总黄酮含量显著相关（p<0.05）。该研究为蜂蜜功能性产品的开发提供了依据。     

壳聚糖及其衍生物的抗氧化作用

采用邻二氮菲-Fe2+氧化法和DPPH法,研究5种壳聚糖及其衍生物——壳聚糖(chitosan)、壳寡糖(ol-igo-chitosan)、羧甲基壳聚糖(CM-chitosan)、N-乙酰氨基葡萄糖(GLcNAc)、氨基葡萄糖盐酸盐(GlcNH2.HCl)的体外清除羟自由基和DPPH.自由基的能力。结果表明:在实验设置的浓度范围内,对羟自由基的清除能力依次为oligo-chitosan>chitosan>GLcNAc>GlcNH2.HCl>CM-Chitosan,且其清除能力随着浓度的增加而增加。其中2 mg/mL的Oligo-chitosan对羟自由基的清除率最大达到97.81%,相当于4 mmol/L的VC对羟自由基的清除能力。对DPPH.的清除能力大小依次为oligo-chitosan>chitosan>GlcNH2.HCl≥GLcNAc>CM-chitosan,且其清除能力随着浓度的增加而增加。2 mg/mL oligo-chitosan的清除率为97.34%,大于6mmol/L VC的清除速率79.92%。2种方法测定的结果比较一致。