小麦酯酶的纯化、冻干及对有机磷农药的检测

该文研究从小麦面粉提取的小麦酯酶粗酶液的纯化、冻干和其有机磷农药的最低检测限。确定了用饱和度为30%和60%的硫酸铵对小麦酯酶粗酶液进行分段盐析,纯化后酶液的比酶活是纯化前的2.4倍;最佳保护剂为5%的聚乙二醇,它不仅可以有效保护纯化后的小麦酯酶在冷冻干燥过程中不失活,而且还具有良好的稳定性;最后确定了冻干小麦酯酶酶粉中敌敌畏、敌百虫、毒死蜱、乐果和辛硫磷等5种有机磷农药最低检测限分别为0.01 mg/kg、0.02 mg/kg、0.05 mg/kg、0.07 mg/kg和0.03 mg/kg,均低于国家规定农药最大残留量,冻干酶粉对敌敌畏灵敏度最佳。     

猪腰豆幼苗中乙酰胆碱酯酶和酯酶活性及其对农药的敏感性

选取猪腰豆为研究对象,测定不同时期、不同部位猪腰豆幼苗中乙酰胆碱酯酶(AchE)和酯酶活性,选取活性最高的部位提取酶,分别检测其对有机磷及氨基甲酸酯类农药的灵敏性,确定最低检测限。结果表明：AChE在6d子叶中比活力最高为0.969U/mg;酯酶活力在2d幼芽中最高为1.9433U/mL;AChE对农药反应的灵敏性高于酯酶,对敌敌畏、氧化乐果、灭多威的最低检测限分别为0.025、0.07、0.07mg/kg,低于国家规定的允许残留限量,可以满足农药残留快速检测的要求。     

有机磷农残检测用植物酯酶的研究

本文研究了多种植物种子中植物酯酶的提取方法和总酯酶活力,得出了最佳提取条件。并且研究了不同来源的植物酯酶对有机磷农药的敏感性,确定了黄豆来源酯酶对敌敌畏等五种农药的最低检测限。结果表明,以黄豆来源的植物酯酶的总酯酶活力和敏感性为最好。     

鲫鱼肝脏AChE的提取及有机磷农药对AChE的抑制效应研究

本研究利用淡水鲫鱼肝脏为主要原材料提取乙酰胆碱酯酶(acetylcholinesterase,AChE),并设计正交试验确定了鲫鱼肝脏中乙酰胆碱酯酶的最佳提取条件:通过酶抑制法衡量敌敌畏、辛硫磷、三唑磷、乐果等四种不同种类有机磷农药对粗酶液的抑制作用;将鱼肝和鱼脑中乙酰胆碱酯酶活性及蛋白含量的进行对比研究。研究结果表明:提取液pH值、提取液种类以及原料与提取液的质量体积比对酶液的活性影响显著;被测四种有机磷农药中,敌敌畏对AChE活性抑制作用最强。鱼脑的AChE比酶活是肝脏的AChE比酶活的3～7倍。     

黑豆酯酶检测氧乐果残留条件的优化

目的研究以氧乐果为代表的有机磷农药残留检测条件。方法以黑豆酯酶为酶源,a-乙酸萘酯为底物,采用酶抑制法,考察黑豆酯酶稀释倍数、显色时间、反应温度3个因素对黑豆酯酶活力测定的影响。然后通过3因素3水平响应面法优化黑豆酯酶活力的测定条件,并确定氧乐果对黑豆酯酶的最佳抑制时间和检测的灵敏度。结果当黑豆酯酶稀释倍数为18,显色反应时间为10 min,反应温度为41℃时,黑豆酯酶活力测定的吸光度值达到0.811。氧乐果抑制黑豆酯酶的最佳时间是4 min。绘制氧乐果对黑豆酯酶的标准曲线,得到最低检测限为0.1μg/mL。结论本研究获得了以黑豆酯酶抑制法检测氧乐果残留的最佳条件,其检测限低于有机磷农药氧乐果残留检测的最低限值要求(0.2μg/mL)。因此,以黑豆酯酶为酶源的酶抑制法可以作为有机磷农药氧乐果残留快速检测的一种有效手段。     

电位法快速检测有机磷及氨基甲酸酯类农药灵敏度的研究

以黄豆中提取的植物酯酶为检测用酶,根据酶抑制反应前后ΔpH变化,建立了电位法快速检测有机磷及氨基甲酸酯类农药残留的方法。测定了20种有机磷及9种氨基甲酸酯类农药的灵敏度,经与国家规定的最大残留限量(MRL)相比较,有28种农药的最低检测限(LDC)可达到MRL限值要求。     

植物酯酶法检测有机磷农药的敏感性和检测限的研究

采用本室自制的植物酯酶,对19种有机磷农药进行了敏感性试验,并测定了该酶对这19种有机磷农药的最低检测限(LOD)。研究表明,所制备植物酯酶对受试的18种有机磷农药均有良好的敏感性,且最低检测限远低于国家规定的最大残留限量(MRL),因此,该酶可作为有机磷农药残留检测用酶。     

气相色谱法同时测定果酱中多种有机磷农药残留

提出同时测定果酱中甲胺磷、敌敌畏、氧乐果、马拉硫磷、毒死蜱、水胺硫磷、喹硫磷七种有机磷农药残留的检测方法。在选定的色谱条件下,添加浓度在0.01～1.00mg/kg之间时七种有机磷农药的平均回收率(n=6)在82.0%～97.0%之间,相对标准偏差分别为1%～5%,方法的最低检出限(七种有机磷农药)均设为0.01mg/kg,结果显示该方法具有快速、简单、准确、灵敏度高的特点,能满足日本肯定列表的检测要求。     

乙酰胆碱酯酶在有机磷和氨基甲酸酯类农药快速检测中的应用

为满足食品中有机磷和氨基甲酸酯类农药的快速检测，研究采用酶抑制显色方法，应用自制的乙酰胆碱酯酶制成农药快速检测试剂盒检测有机磷和氨基甲酸酯类农药，检测灵敏度在0．001mg／kg-0．1mg／kg范围。试剂盒为现场检测这两类农药提供了简便而快捷的方法。     

速测卡法快速检测蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留

目的对数字农药残留速测卡速检蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留方法的可靠性及实用性进行评价。方法采用改良后的速测卡对有机磷及氨基甲酸酯类农药的最低检出限进行试验,以及检测蔬菜样品中农药残留情况,并与标准方法进行对比;并对不同生产批号的产品进行重复性试验。结果速测卡对有机磷和氨基甲酸酯类农药的最低检出限在0.01~3.0 mg/kg;对敌敌畏可达到0.01 mg/kg;对乙酰甲胺磷灵敏度较低,为3.0 mg/kg。检测样品时,速测卡与标准方法阴性符合率为95.2%,阳性符合率为94.1%。5个生产批号的速测卡检测结果一致,批次间重复性较好。结论速测卡法具有快速、准确、方便、灵敏等特点,适用于基层对蔬菜中有机磷及氨基甲酸酯类农药残留进行定性分析。     

An electrochemical bioassay for dichlorvos analysis in durum wheat samples

The use of an acetylcholinesterase inhibition assay for the detection of dichlorvos in durum wheat samples by a simplified extraction procedure is reported. After an incubation step, the residual activity was determined with an amperometric biosensor using a portable potentiostat. The use of electric eel and recombinant acetylcholinesterase was compared. The effect of the matrix extract was evaluated by using various sample:solvent ratios, 1:2.5, 1:5, 1:10, and 1:20. The optimal extraction ratio, considering the electrochemical interferences and the effect on enzyme activity and bioavailability of the pesticide, was 1:10. Calibrations were performed in buffer and durum wheat extract. The calculated detection limits in buffer solution were 10 ng/ ml and 0.045 ng/ml for electric eel and recombinant acetylcholinesterase, respectively, whereas operating in the matrix extract they increased up to 45 ng/ml and 0.07 ng/ml, corresponding to 0.45 mg/kg (extraction ratio 1:10) and 0.07 mg/kg in samples. These characteristics allowed the detection of contaminated samples at the maximum residue limit, which is 2 mg/kg and well below. Fortified samples of durum wheat were obtained with both dichlorvos and the commercial product Didivane, which contains dichlorvos as an active molecule. At all the tested levels, the occurrence of contaminant was detected with an average recovery of 75%. The total assay time, including the extraction step, was 30 min. Because several extractions as well as most of the assay steps can be run simultaneously, the throughput for one operator is 12 determinations per hour.     

小麦酯酶电化学生物传感器构建及其对敌敌畏的检测

以来源于植物的小麦酯酶(plant-esterase from wheat flour,wPLaE)为检测酶源,利用纳米金(gold nanoparticles,AuNPs)和多壁碳纳米管(multi-walled carbon nanotubes,MWNT)的协同电催化放大作用,构建一种可用于有机磷农药检测的新型电化...     

鸡肝酯酶在有机磷和氨基甲酸酯类农药检测中的应用研究

利用农药对酯酶活力的抑制反应,分别采用游离的和固定化的鸡肝酯酶,对不同浓度的敌敌畏、敌百虫、马拉硫磷和西维因进行了测定。结果发现,在低浓度时,农药浓度的对数值与其对应的酶活抑制率之间具有较好的线性关系;并且与游离鸡肝酯酶相比,固定化酶不同程度地降低了对农药检测的下限值。敌敌畏、马拉硫磷和西维因的检测下限值依次从游离酶检测时的0．001、4．34和2．52mg/L,降低到了用固定化酶检测时的0．00004、0．0004和0．78mg/L。固定化的鸡肝酯酶对敌百虫的检测下限改善不大。     

加速溶剂提取-凝胶渗透色谱净化-气相色谱测定咸鱼中的敌敌畏

建立咸鱼中敌敌畏残留的气相色谱分析方法。采用加速溶剂萃取(ASE)提取咸鱼样品中的敌敌畏,经凝胶渗透色谱(GPC)净化,浓缩定容后用GC-FPD 检测分析,外标法定量。样品添加水平为2.5 × 10-2mg/kg 和10.0 ×10-2mg/kg 时,敌敌畏的回收率在74.4%～96.8% 之间,方法检出限为5.0 × 10-4mg/kg。本方法准确、自动化程度高、净化效果好,满足残留分析要求。     

Improved Determination of Phoxim Residue in Stored Wheat by HPLC with DAD

ABSTRACT:  This article presents an improved method to detect the phoxim residual in whole wheat grain (not milled). The authors used petroleum ether (PE) as solvent to extract phoxim in darkness, and then determined it with high-performance liquid chromatography (HPLC) with diode array detector (DAD) at 280 nm. Use of PE improved the extraction efficiency of phoxim from grain samples over those obtained using acetone, recovery of 83.3% and 65.9%, respectively. Light produced more side effect on the extraction of this pesticide than with darkness, recovery of 63.2% and 83.3%, respectively. The combination of PE with darkness yielded a higher recovery of phoxim in liquid-phase extraction. The peak area of phoxim compared with its absolute values of phoxim in standard solution concentration range from 0.005 mg/kg to 0.253 mg/kg showed a good linear calibration ( R ² = 0.9999). Recoveries, at spiked concentrations of 0.02, 0.05, and 0.10 mg/kg, varied between 83.3% and 106.3% with relative standard deviations (RSD) ranging from 6.5% to 8.0%. The present method provides sufficient sensitivity as reflected by the values of limit of detection (LOD) and limit of quantification (LOQ). LOD was 0.002 mg/kg (S/N 3), and the estimated LOQ was 0.006 mg/kg (S/N = 10). Use of the proposed method successfully detected phoxim residue in wheat grain from Beijing and Kunming City of China.     

发酵豆制品中脱氢乙酸检测方法的优化

对发酵豆制品中脱氢乙酸的检测方法进行优化,考察了蛋白沉淀剂种类、除油脂方法、除盐方法、提取方法、提取时间、固相萃取小柱种类对样品前处理的影响和流动相体系对色谱条件的影响,建立了一种利用固相萃取-高效液相色谱（SPE-HPLC）测定发酵豆制品中脱氢乙酸的方法。结果表明,该方法在1～50 μg/mL范围内线性关系良好,相关系数R2＞0.999,方法检出限为1.0 mg/kg。精密度试验结果RSD为0.6%,在加标量为2.0 mg/kg、5.0 mg/kg、10.0 mg/kg的3个水平下,样品加标平均回收率为81.7%～99.1%,相对标准偏差（RSD）为0.6%～2.7%（n=6）。该方法具有灵敏度高、重现性好、分析时间短等优点。     

基质固相分散辅助加速溶剂萃取- 气相色谱法测定花生中有机磷农药残留

基质固相分散辅助加速溶剂萃取- 气相色谱法测定花生中5 种有机磷农药残留。花生样品与硅藻土、弗罗里硅土混合后装填萃取池,加速溶剂萃取仪在10.0MPa、80℃条件下,丙酮作为提取溶剂,加热5min,静态提取5min,循环2 次的条件下用气相色谱(氮磷检测器)进行分析。在添加水平为0.05、0.1mg/kg 时,花生中5 种有机磷农药的加标回收率为88.2%～104.5%,测定结果的相对标准偏差为3.2%～7.1%(n=6),检出限为0.030～0.038mg/kg。该法具有良好的分离效果、较宽的线性关系和较高的灵敏度。     

气相色谱-质谱联用法测定茶叶中21种农药残留

该实验建立了茶叶中21种农药残留的气相色谱-质谱（GC-MS）多反应监测模式（MRM）定性、定量分析检测方法,探讨不同 提取方法、提取溶剂、浓缩方式等试验因素对茶叶农药多残留测定结果的影响。 结果表明,以正己烷-丙酮（1∶1,V/V）混合溶剂超声提 取、氮吹浓缩,用气相色谱-质谱法对茶叶样品中21种农药进行定性定量检测,21种农药在0.05～1.00 μg/mL范围内呈良好的线性 关系,相关系数（R2）为0.998 0～0.999 9。 在茶叶样品中分别添加质量浓度0.05 mg/kg、0.20 mg/kg、0.40 mg/kg的农药组分,平均回收率 为83.46%～92.13%,相对标准偏差（RSD）为4.88%～8.51%,检出限为0.002 7～0.021 9 mg/kg,该方法具有前处理简便快捷、灵敏度 高、成本低等优点,在实际茶叶农药残留检测中得到了广泛应用,能满足日常的茶叶农药残留检测。