一株产α-淀粉酶菌株的分离筛选、鉴定及酶学性质研究

为了更加经济、更高产量的分离出高纯酶,该实验从富含淀粉的土壤中筛选出1株高产淀粉酶的菌株LZ-10,通过菌落形态观察、生理生化特性实验、16S rDNA序列和gyrB基因序列分析对其进行鉴定。采用硫酸铵盐析,DEAE-52阴离子交换纤维素纯化,用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）检测蛋白分子质量。结果表明,菌株LZ-10鉴定为枯草芽孢杆菌（Bacillussubtilis）。纯化后的淀粉酶比活力为59.91 U/mg,纯化倍数为4.53,回收率为60.5%,分子质量为55.4 kDa。对其酶学性质进行研究,得出菌株LZ-10所产淀粉酶最大酶活力为41.6 U/mL,最适作用温度为50 ℃,在50～70 ℃温度环境下其稳定性较高;最适pH值为7.0,在pH=5.0～7.0的环境条件下稳定性较高;Ca2+、Mg2+、Na+、K+对淀粉酶有激活作用;乙二胺四乙酸（EDTA）、Fe2+、Zn2+对淀粉酶有抑制作用。     

从天山花楸中分离筛选纤维素酶产生菌及其酶学性质研究

从天山花楸茎、叶和果实中分离到53株内生细菌,利用刚果红初筛平板获得透明圈较大的4株菌,在此基础上进行摇瓶复筛,得到一株产纤维素酶活力较高的菌株(S11)。该菌发酵培养12h,产羧甲基纤维素酶(CMCase)酶活力最高达到39.47U/mL。该酶最适反应pH值为5.0,在pH 5.0～6.0范围内较稳定;最适反应温度为50℃,在50℃以下酶的热稳定性较好,60～70℃几乎完全失活;各种供试金属离子与化学试剂对酶活性都有不同程度的抑制作用,其中Ca2+、SDS和EDTA的抑制作用最强。     

三七渣固态发酵所产淀粉酶的酶学特性研究

考察了黑曲霉固态发酵三七渣所产淀粉酶的酶学特性。研究结果表明,该淀粉酶的最适温度为60℃;当温度为30~50℃时,具有较好的热稳定性,保温处理2 h后其酶活仍可保持在90%以上;其最适pH为5.0;当pH为3.0~5.0时,具有较好的pH稳定性,在4℃冷藏保存2 h后其酶活仍可保持在80%以上;Mn2+对该淀粉酶有轻微的激活作用,K+、Na+、Mg2+、Fe3+、Zn2+和Ni2+对该淀粉酶有弱抑制作用,Cu2+则对其有强抑制作用。该淀粉酶米氏常数Km值为0.64 mg·mL-1,最大反应速率Vmax为0.45 mg/min。     

牦牛酸奶酪中高产乳糖酶菌株分离鉴定及其酶学性质

为获得藏区牦牛酸奶酪中的产乳糖酶活力高的菌株,采用含X-gal的培养基进行初筛,从购买的10份样品中筛选到10株产乳糖酶细菌;发酵复筛后,发现其中RTM-111菌株的产酶活力最高。综合形态学特征、生理生化实验及16S rDNA序列分析,确定该菌株为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)。对该菌株所产乳糖酶的酶学性质研究表明,该酶的最适反应温度为50 ℃,最适pH为7.5。稳定性实验表明,该酶在温度40~50 ℃、pH6.5~8.0时具有较高稳定性。金属离子Na+、Mg2+和Mn2+对酶活性具有较强的激活作用,而Cu2+、Zn2+和EDTA对酶活有显著的抑制作用。枯草芽孢杆菌RTM-111产乳糖酶活力高、酶的性质稳定,具有潜在应用价值。     

内生黑曲霉产脂肪酶条件研究及其粗酶酶学特性

针对新疆酿酒葡萄中获得的1株产脂肪酶的内生黑曲霉菌株C2J6,研究了该菌株的产酶条件及酶学特性。结果表明,该菌适宜的产酶条件为1%的乳糖为碳源,1%的蛋白胨为氮源,培养基初始pH值为8.0,培养温度35℃,培养时间约72h,此时所产脂肪酶的活力可达18.75U/mL。该菌所产脂肪酶粗酶液的最适反应温度为40℃,最适反应pH值为7.0,为中温中性酶;在50℃保温1h酶活力保留54.55%,具有良好的热稳定性;在pH值3.0~7.0范围内较稳定,有一定的耐酸性。金属离子Mn2+对酶活力有促进作用,Zn2+、Fe2+、Cu2+对酶活力有抑制作用,K+、Ca2+、Na+、Mg2+对酶活力影响不大。该酶在以葵花油和谷物调和油为底物时,酶活分别为228%和180%,明显高于橄榄油和油烟机废油。     

芽孢杆菌B15胞外蛋白酶和淀粉酶的酶学性质研究

为探索芽孢杆菌B15胞外蛋白酶和淀粉酶在饲用酶制剂方面的应用,试验对其产酶情况及胞外酶的酶学性质进行了研究。结果显示,该菌株产蛋白酶和淀粉酶的最高酶活性分别为(181.9±3.5)U/mL和(50.2±1.6)U/mL。蛋白酶和淀粉酶的最适作用温度范围分别为40℃～50℃和40℃～70℃,最适作用pH值为7和5～7。蛋白酶和淀粉酶经40℃～50℃热处理,以及在pH值为5～9的缓冲液中较稳定。蛋白酶被EDTA所抑制,属金属蛋白酶,金属离子(10mmol/L)Mg2+和K+对其有激活作用,Fe2+有抑制作用,而Fe2+对淀粉酶有一定的激活作用。     

重组大肠杆菌耐热α - 淀粉酶的分离纯化及其酶学性质研究

对重组大肠杆菌耐热α- 淀粉酶分离纯化及其酶学性质进行研究,结果表明：该酶分子量约为90kD,最适温度为60～70℃,最适pH 值为6.6,酶学动力学常数Km 值为143.52mmol/L;酶活力在pH5.4～7.8 较为稳定;4℃保存2 周酶活力仅下降一半,35℃保温3d 有50% 以上的酶活力,70℃以上酶失活很快;Mn2+ 对酶催化作用有较大的促进,K+、Ca2+ 有微弱的促进作用,Mg2+ 对催化反应无影响,Cu2+ 的抑制作用最强,其他金属离子Co2+、Zn2+、Fe2+ 对酶催化作用有不同程度的抑制作用;有机离子对酶催化作用均是抑制作用,其中抑制作用最强的是SDS。     

云芝(Coriolus versicolor)木质素过氧化物酶(LiP)酶学性质分析

研究云芝(Coriolus versicolor)产木质素过氧化物酶(Lip)酶活力随时间的变化情况,以及温度、pH 值、金属离子及化合物对云芝LiP 酶活力和稳定性的影响,对该酶底物浓度效应和Km 值进行测定。结果表明：云芝培养12d,其酶活力最高,为72U/mL。该酶的最适温度为40℃,在30～40℃范围内稳定;最适pH 值为2.5,pH 值在2.0～3.5 较稳定;Zn2+ 对LiP 有激活作用,Na+ 对酶活力没有影响,Ca2+、K+、Mg2+、Mn2+、Cu2+ 及EDTA、SDS、β- 巯基乙醇都表现出抑制作用;Km 值为2.05 × 10-4mol/L。     

虎杖内生真菌Aspergillus aculeatus HZ001产β-葡萄糖苷酶的酶学特性

中药虎杖含有丰富的虎杖苷,利用生物转化技术将其转化为白藜芦醇是制备天然白藜芦醇的有效方法。虎杖内生真菌Aspergillus aculeatus HZ001细胞可催化虎杖苷转化为白藜芦醇,该文对该菌株产胞内β-葡萄糖苷酶的酶学性质进行研究。结果表明:该酶的最适反应温度为60℃,在低于60℃时有较好的稳定性;最适反应pH为4.8,在pH 3.6~4.0时有较好的稳定性;Fe^2+对其活力有激活作用,相对酶活力可达到120%,Ca^2+、Co^2+、Mg^2+等离子对酶活力有明显的抑制作用,其中Co^2+的抑制作用最明显;十二烷基硫酸钠、巯基乙醇、二甲基亚砜和乙二胺四乙酸(ethylene diamine tetraacetic acid,EDTA)4种抑制剂对该酶活力具有抑制作用,其中EDTA的抑制效果最为明显,相对酶活力仅有10%左右。在最适催化条件下,进行酶催化动力学分析,米氏常数K m值为2.571 mmol/L,最大反应速率V max值为0.594μmol/(mL·h)。     

Bacillus subtilis AS35发酵麦糟产β-葡聚糖酶粗酶性质的研究

研究了由Bacillus subtilis AS35发酵麦糟制备的β-葡聚糖酶的性质,研究表明,该酶在55℃~65℃时酶活力较高,最适反应温度为60℃;最适反应pH值为5.5,在pH值为4.0~7.0时有较高的稳定性,在4℃保存24h后,残余酶活超过85%;在1mmol/L的浓度条件下,Fe2+、Co2+、Ca2+,尤其是Co2+对酶活性有明显的激活作用;Pb2+、Fe3+、A13+对酶活性有明显的抑制作用。     

L-谷氨酸氧化酶的分离纯化及酶学性质的研究

采用硫酸铵分级沉淀、HPLC脱盐、离子交换、Superdex G-200凝胶层析等步骤从华美链霉菌(Streptomyces sp.)发酵液中分离纯化L-谷氨酸氧化酶(GLOD),经过SDS-PAGE电泳检测,样品达到电泳级纯,分子量为140ku。对纯化的GLOD研究发现,该酶的最适反应温度为50℃,最适pH值为7.0,温度稳定范围为0℃～50℃,pH稳定范围在6.0～9.0,GLOD催化L-谷氨酸的米氏常数Km为2.1×10-4mol/L,Na+、K+、Mg2+对酶活几乎没有影响,而Hg2+、Cu2+、Ag+均不同程度的抑制酶的活性。     

唾液乳杆菌XH4B的a-半乳糖苷酶纯化及性质研究

本研究通过超滤、SephedaxG200凝胶过滤层析纯化来源于唾液乳杆菌XH4B（GeneBank索引号：JXl25456）的a-半乳糖苷酶,并对其酶学性质进行了研究。结果表明,超滤时采用100kDa的滤膜,分子量大于100kDa的组分有酶活。利用SephadexG200进行柱层析洗脱至370-400min时得到的组分表现出明显的a-半乳糖苷酶活力。SDS．PAGE电泳结果表明,该酶的蛋白质单体分子量为70-80kDa,未变性的酶蛋白应为多聚体,总分子量大于100kDa。利用酶比活力计算的结果,相对于粗酶,超滤纯化效率为149．80％,柱层析纯化效率为391．91％。经响应面优化,确定唾液乳杆菌XH4B来源的a-半乳糖苷酶最佳酶促反应条件为：柠檬酸缓冲液pH值5．5,离子强度0．15mol／L,反应温度52℃。该酶对pNPG的Km值为0．817。相对于纯水,各类金属离子中,仅有心和Na＋对酶活力有正向的激活作用,酶活力分别达到了102．50％和104．18％。EDTA（96．54％）,Mg”（91．53％）,ca2＋（82．51％）,以及DTT（79．38％）能够较大限度保留酶活力,而Zn2＋、cu2＋、pb2＋、Fe3＋和vc则显著阻碍了酶促活力,仅能保留5-7％。     

使用分离自啤酒废水的木霉菌TP09固态发酵提纯β-葡聚糖酶

使用木霉TP09固态发酵,提纯并鉴定了β-1,3-葡聚糖酶的部分性质。采用饱和度为70%的（NH4）2SO4及DEAE-琼脂糖凝胶CL-6B柱层析纯化,β-葡聚糖酶相对粗酶溶液纯化了28.7倍,酶回收率为45.2%。经SDS-PAGE分析,该酶分子量近似54.6KD。酶最适反应pH为5.0,最适温度为50℃。在pH3.0～5.0、温度30～70℃酶活相对稳定。Fe^3＋、Mg^2＋、Mn^2＋以及Cu^2＋对该酶有抑制作用,Zn^2＋、Ca^2＋和Fe^2＋则有激活作用。底物选择性研究表明该酶为β-1,3-葡聚糖酶、β-1,4-葡聚糖酶。该酶可作用于含β-1,3、β-1,4糖苷键的底物,对含α-1,4和α-1,6糖苷键的底物无作用。表明分离自啤酒废水的木霉TP09生产的β-1,3-葡聚糖酶可增强不溶性β-1,3-葡聚糖的可溶性,促进了其在免疫疗法中的应用。     

氢氧化镁络合除钡工艺初探

高纯氢氧化镁性能优越,用途广泛,但工业氢氧化镁常含杂质,影响其应用性能。为此,文章以含钡盐(氯化钡和硫酸钡)杂质的工业氢氧化镁(纯度97.0%)为原料,探索了采用EDTA络合除杂制备高纯氢氧化镁的工艺规律,考查了温度、EDTA浓度及pH值对除钡效率的影响,通过热力学计算初步分析了EDTA作用机制。研究结果表明:EDTA浓度越高,络合除钡率越高,在pH值12~13、60℃~70℃条件下除钡率可达80%以上,获得纯度高达99%的高纯氢氧化镁产物。     

Enterobactersp．SYA2乳糖酶酶学性质研究

采用硫酸铵盐析对Enterobactersp．SYA2乳糖酶进行分级沉淀,研究了该酶的最适作用温度、热稳定性、最适作用pH、pH稳定性及金属离子的影响。结果表明：选取硫酸铵的饱和度30％～85％进行分级沉淀,分级沉淀后得到乳糖酶的比活为45．85U／mg;该酶最适作用温度为40℃～45℃,在35℃和40℃处理时酶活损失不大,在45℃和50℃处理时酶活损失较大,最适作用pH为6．5,pH在6．0－8．5酶活最为稳定,Mg^2＋、Mn^2＋、Na^＋对该酶有一定激活作用,Zn^2＋,Cu^2、Fe^2＋对该酶有不同程度的抑制作用,当酶添加量为1U／mL,乳清水解率3h达50％;而添加量为2U／mL时乳清水解率1h达50％。     

超声波辅助提取大花金鸡菊花色素及其稳定性研究

以新鲜大花金鸡菊(Coreopsis grandiflora)花瓣为原料,采用超声波提取法对大花金鸡菊花色素的提取条件及理化性质进行研究。结果表明,大花金鸡菊花色素提取最佳工艺条件为:乙醇体积分数70%、料液比1∶5(w/v)、提取温度30℃,提取时间20min。大花金鸡菊花色素耐酸碱和耐氧化、还原性物质。常用的食品添加剂(葡萄糖、氯化钠等)以及金属离子Na+、Cu2+、Mg2+、Ca2+等对色素无明显影响。     

果胶酶对甜菜渗出汁清净效果的影响

甜菜制糖中渗出汁中的果胶含量对生产有较大的影响.采用果胶酶对甜菜渗出汁进行清净效果研究,考察果胶酶的用量、酶解pH、酶解温度、酶解时间对渗出汁的过滤速度和果胶去除率的影响.单因素实验结果表明:果胶酶用量为5 - 15mg/kg,温度为50 - 60℃,pH值为4.0 -5.5,酶解时间10-15min条件下,果胶酶对渗出汁澄清处理的效果较好.在单因素的基础上,采用正交实验优化工艺,得到最佳的工艺条件为:果胶酶用量为15mg/kg,酶解pH 5.0,酶解温度50C,酶解时间15 min.此时果胶去除率为44.38％.     

产中性蛋白酶种曲培养基的优化及酶学特性研究

以中性蛋白酶活力为检验指标,采用响应面法对米曲霉产中性蛋白酶的种曲培养基进行优化,确定其最佳配方组成为：面粉用量2．24g,花生粕用量8．46g,氯化钙用量0．028g,种曲中性蛋白酶活力高达15559．40U／g。经研究纯化后中性蛋白酶酶学特性,发现中性蛋白酶的最适pH为7．0,在pH5．0-7．0范围内具有良好的稳定性;最适作用温度为50℃,在40-55℃条件下能保持较高的酶活力;试验金属离子对蛋白酶没有显著的激活作用,Ba^2＋、Fe^2＋、Zn^2＋和Cu^2＋具有显著的抑制作用。     

多形汉逊酵母破壁抽提的研究

实验以多形汉逊酵母为原料,采用自溶结合外加酶法制备酵母水解物。研究了自溶时间、氯化钠浓度、初始pH值、温度、木瓜蛋白酶添加量等因素对多形汉逊酵母水解的影响。结果表明:15%酵母悬浮液(以酵母干重计)在温度50℃,pH 5.5,氯化钠浓度为3%,木瓜蛋白酶添加量0.02%(w/w)的条件下水解32h,上清液中氨基酸态氮的含量最高,达到0.64g/100mL,其固形物得率为56.32%。