烟草种子附生真菌群落结构与多样性

为了解烟草种子附生真菌的群落结构和多样性。采用Illumina MiSeq高通量测序技术测定K326、云烟85、L8、301种子的附生真菌。结果表明K326种子的优势属为链格孢属（Alternaria）、赤霉菌属（Gibberella）、隐球菌属（Cryptococcus）、镰刀菌属（Fusarium）及红酵母属（Rhodotorula）等;云烟85的优势属为赤霉菌属、小画线壳属（Monographella）、链格孢属、红酵母属及镰刀菌属;301的优势属为链格孢属;L8的优势属为链格孢属、曲霉菌属、镰刀菌属、赤霉菌属及隐球菌属等。      

三株芽孢杆菌的生防特性研究

为明确贝莱斯芽孢杆菌（Bacillus velezensis）GY1、解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens）GY10和枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）GY12的生防特性,采用平板试验法、对扣法、盆栽试验等,对三株生防菌的抑菌谱、次生代谢产物、挥发性物质、根际定殖能力和促生能力等进行了研究。结果表明,GY1、GY10、GY12培养液可以显著促进烟草种子的萌发和烟株的生长;三株生防菌抑菌谱广,对烟草赤星病菌、黑胫病菌及花生镰刀菌等9种病原具有显著的抑制作用,并且都具有分泌嗜铁素和蛋白酶的能力;三株生防菌发酵上清液和挥发性物质对链格孢菌（Alternaria alternata）和烟草疫霉菌（Phytophthora parasitica var.nicotianae）具有显著抑制作用;菌株的分泌蛋白热稳定性好,对烟草赤星病菌具有显著的体外抑菌活性,并对酸性环境具有较高的耐受性;根际定殖结果表明,GY1-GY10-GY12复配与单菌株相比能增加各生防菌在烟草根际的定殖。以上结果对于菌株GY1、GY10、GY12生防特性的深入挖掘和产业化开发具有一定的指导作用。     

洋葱霍尔德氏菌对玫瑰香葡萄采后灰霉病的抑制活性

为研究生防菌洋葱霍尔德氏菌B-1的生防潜力,并为其生产性应用奠定基础,研究洋葱霍尔德氏菌B-1的生物量最大值的培养时间、浓度和发酵时间对玫瑰香葡萄采后病害的抑制效果。结果表明,在接种后24 h,拮抗菌B-1的抑菌效果最好,抑菌圈直径达2.81 cm。在液体培养基中,生防菌可有效抑制灰葡萄孢霉孢子萌发和芽管伸长,稀释5倍发酵液和发酵原液可完全抑制灰葡萄孢霉孢子萌发,稀释40倍发酵液孢子萌发率下降60.39%。在0,16℃和26℃温度条件下,拮抗菌均可显著降低葡萄采后自然腐烂率。菌株B-1不论是在离体条件还是在活体条件下,均有抑制灰葡萄孢霉的作用,能有效防治葡萄采后灰霉病的发生,是一株生防潜力较好的菌株。     

棘孢木霉T-6对烟草促生及对黑胫病和根黑腐病的抗病作用

利用生防菌防治土传病害是植物病害防治中的重要措施,在温室盆栽条件下研究了棘孢木霉T-6对烟草促生和抗病效果。结果表明,棘孢木霉T-6对烟草黑胫病菌、烟草根黑腐病菌的菌丝生长抑制率分别达49.62%、59.23%;温室盆栽条件下,棘孢木霉T-6对黑胫病和根黑腐病的防治效果分别达到74.45%和75.14%。棘孢木霉T-6处理后提高了烟草叶片叶绿素含量、类胡萝卜素含量和超氧化物歧化酶、过氧化物酶、过氧化氢酶的活性,棘孢木霉T-6处理的烟株生长状况明显好于对照。棘孢木霉T-6能够促进烟株生长和提高烟草对黑胫病和根黑腐病的抗性,具有良好的应用潜力。     

贝莱斯芽胞杆菌F10促生作用及对烟草青枯病的防治效果

为明确植物根际促生细菌（Plant growth-promoting rhizobacteria,PGPR）对烤烟促生和抗病作用,以前期试验分离获得的贝莱斯芽胞杆菌（Bacillus velezensis）F10为材料,通过盆栽和田间小区试验考察其对烟草的促生作用和对烟草青枯病的防治效果。结果表明,生防菌F10处理后,烟草根系和地上部生长显著优于对照,烟草叶片过氧化物酶（POD）、超氧化物歧化酶（SOD）和过氧化氢酶（CAT）活性提高。盆栽和田间小区试验中生防菌F10对烟草青枯病的防治效果分别为60.49%和54.91%,大田烟叶产量、上等烟比例和上中等烟比例比对照分别提高11.82%、31.46%和13.17%。生防菌F10对烟草生长具有促进作用,对烟草青枯病具有较好的防治效果,烤烟经济效益显著提高。      

烟草赤星病拮抗菌Q96的筛选鉴定及其防病效果研究

为分离筛选对烟草赤星病有良好防效的拮抗菌,以烟草赤星病链格孢菌为靶菌,从蚯蚓粪中经初筛和复筛获得拮抗菌,通过形态、生理生化特征和16S rDNA分析鉴定拮抗菌种类,并对烟草赤星病的防治效果进行了研究。结果表明,筛选出一株拮抗菌Q96,初筛和复筛的抑菌率均超过60%,经鉴定为副地衣芽孢杆菌（Bacillus paralicheniformis）,其活菌液（稀释10倍）对孢子萌发和菌丝生长的抑制率分别为73.33%和79.68%,粗发酵液离体防效可达60.04%。Q96菌株可作为抗烟草赤星病生防菌剂的菌种资源。     

烟草镰刀菌根腐病（Fusarium spp.）拮抗菌L210的鉴定及生防潜力评价

为筛选烟草镰刀菌根腐病（Fusarium spp.）的高效拮抗菌株,通过平板对峙、盆栽和大田复筛试验,从平顶山烟区烟株根际土壤中分离筛选拮抗菌;利用形态观察、生理生化测试和16S rDNA序列分析对拮抗菌进行鉴定,并对拮抗菌抗镰刀菌根腐病的机理进行研究。结果表明：从10份土壤样品中共分离土壤微生物菌株512株,其中以L210菌株对镰刀菌根腐病抑制效果最好,平板对峙抑菌直径71.4 mm,抑菌率为68.2%;盆栽和大田防病试验的发病率分别为0、6%,病情指数分别为0、1.5,防治效果分别为100%和77.9%。初步鉴定L210菌株为液化沙雷氏菌（Serratia liquefaciens）,其抑菌机理为溶解尖孢镰刀菌的菌丝,使其失去侵染能力,进而抑制病原菌的生长。菌株发酵液中含有几丁质酶和纤维素酶,可溶解病原菌的细胞壁,还可显著诱导提高烟苗中多酚氧化酶（PPO）、过氧化物酶（POD）和苯丙氨酸解氨酶（PAL）等防御酶的活性。因此,菌株L210在烟草镰刀菌根腐病的生物防治中具有较大的应用潜力。     

烟草种子附生细菌群落结构与多样性分析

为揭示烟草种子附生细菌的群落结构和多样性,采用分离培养法分析了6个烟草品种（烤烟K326、云烟85、云烟87及红花大金元,雪茄烟301和白肋烟L8）种子可培养附生细菌种类,并采用Illumina高通量测序技术研究了4个品种（K326、云烟85、雪茄烟301和白肋烟L8）种子附生细菌的群落结构与多样性。结果表明:6个品种种子上共分离鉴定出细菌35株,可培养优势附生细菌有假单胞菌（Pseudomonas）、芽胞杆菌（Bacillus）、肠杆菌（Enterobacte）、泛菌（Pantoea）、鞘氨醇单胞菌（Sphingomonas）等菌属。高通量测序结果表明:K326、白肋烟L8和云烟85种子的附生细菌结构上存在共性与差异,共有的优势菌有假单胞菌、泛菌、鞘氨醇杆菌（Sphingobacterium）、肠杆菌、糖芽胞杆菌（Saccharibacillus）、寡养单胞菌（Stenotrophomonas）、根瘤菌（Rhizobium）等菌属,烟草品种附生细菌多样性排序依次为云烟85＞K326＞L8＞301。      

枯草芽孢杆菌Tpb55抗烟草普通花叶病毒（TMV）活性研究

利用三生-NN烟测定Tpb55菌悬液对烟草普通花叶病毒(TMV)钝化、预防和治疗作用,结果表明,Tpb55菌悬液对TMV具有较好的钝化、预防和治疗效果,枯斑抑制率分别为96.15%、79.72%和65.71%.选用易感TMV烟草品种K326为试验材料,测定Tpb55对TMV控病作用,结果表明,先接种Tpb55菌液再接种TMV的烟株,发病程度明显低于接种TMV再接种Tpb55菌液的烟株;不论在烟株接种TMV前或后,用Tpb55菌液处理烟株的叶片与只接种病毒烟株相比,叶片内过氧化物酶(POD)、多酚氧化酶(PPO)、苯丙氨酸解氨酶(PAL)活性均显著提高,以接毒前Tpb55菌液处理的烟株活性水平最高.从本试验结果来看,Tpb55具较强的抗TMV活性,可通过直接接触钝化作用及诱导烟草抗病性米抑制TMV侵染.     

荧光假单胞菌YG-1对烟草根黑腐病菌的体外拮抗

为丰富烟草根黑腐病菌高效拮抗菌资源,从玉溪烟草种植区根际土壤中分离烟草根黑腐病高效拮抗菌,结合生理生化特性和16S rDNA序列分析鉴定高效拮抗菌,测定菌株发酵液挥发性物质及发酵液粗提物对根黑腐病菌的拮抗活性。结果表明,筛选得到的12株拮抗菌中YG-1表现出最强的拮抗活性,经生理生化特性和16S rDNA序列分析鉴定为荧光假单胞菌（Pseudomonas fluroescens）。菌株YG-1发酵液挥发性物质可有效抑制烟草根黑腐病菌的生长,使菌丝扭曲畸形,并且降低产孢量,经GC-TOF-MS测定,YG-1发酵液含有酸、醛、酯以及一些含硫化合物,其中酸类物质和含硫化合物抑菌效果强。菌株YG-1发酵液粗提物能破坏烟草根黑腐病菌孢子质膜,当粗提物质浓度为0.25 mg/mL时,孢子失膜率达55.42%,同时检测到有明显的离子和核酸渗漏。拮抗菌YG-1具备开发为生防菌剂的潜力。     

氮素营养对烤烟叶片淀粉积累及SPS、淀粉酶活性的影响

在大田条件下研究了烤烟红花大金元(HD)和K 326叶片淀粉积累动态,分析比较了不同施氮量和氮素形态对叶片淀粉含量和蔗糖磷酸酯合成酶(SPS)、淀粉酶活性的影响.烟株生长进入成熟期后,叶片开始快速积累淀粉,接近成熟时达到最高;中部叶片淀粉含量HD为40%左右、K 326为25%左右.成熟期叶片淀粉含量、SPS活性与施氮量呈负相关,HD淀粉酶活性随施氮量增加呈下降趋势,K326淀粉酶活性与施氮量的关系在刚封项后为负相关,叶片接近成熟时为正相关.施氮不足或过量会增加原烟淀粉含量.氮素形态对HD淀粉代谢的影响不如K 326明显;在N-NH4+N-NO3-为11时,K 326淀粉含量、SPS和淀粉酶活性较低.     

烤烟中草酸、苹果酸和柠檬酸含量的分析研究

以云南、四川、河南、重庆4个烟区云烟85、K326和红大3个品种的B2L、C2L、X2L等级烟叶为材料,采用GC法测定了169个烤烟烟叶样品中草酸、苹果酸和柠檬酸的含量,并对不同产地、品种、等级和部位烤烟烟叶的多元有机酸含量进行了统计分析,结果表明:①同一地区、K326和云烟85的相同等级烤烟烟叶中草酸、苹果酸和柠檬酸含量均没有显著差异;红大和云烟85的苹果酸含量没有显著差异,而红大的草酸和柠檬酸含量均高于云烟85;②不同地区、相同品种和等级的烤烟叶中,草酸含量均没有显著性差异;苹果酸、柠檬酸含量差异显著,含量的变化趋势为:河南重庆云南和四川;③同一地区和品种、不同部位的烤烟叶中,草酸含量均为上部明显高于中部和下部,而中部和下部相当;苹果酸含量在3个部位均有较大差别,依次为:上部中部下部;柠檬酸含量下部最高,中部与上部无显著差异。     

亚氯酸钠对鲜烟酶促棕色化反应的影响

以烤烟K326为试验材料, 通过暗箱试验研究了不同浓度亚氯酸钠(SC), 叶面喷施和浸泡两种处理方式对鲜烟酶促棕色化反应的影响。结果表明, 200 mg/L SC对鲜烟酶促棕色化反应的抑制作用最为显著。喷施和浸泡两种处理方式对酶促棕色化反应的影响无显著差异。SC对不同成熟度鲜烟酶促棕色化反应抑制效果不同, 其中以M3成熟度(9~10成黄绿)效果最好。SC处理和对照烟叶多酚氧化酶(PPO)活性变化表现出基本相同的规律, 但SC处理烟叶PPO活性均低于同期对照烟叶。     

外源水杨酸对低温胁迫下低温敏感性不同的烤烟品种烟叶生理特性的影响

  目的  探究低温胁迫下外源水杨酸对低温敏感型不同烤烟品种叶片生理特性的影响,并筛选最佳外源水杨酸的缓解浓度。  方法  以低温不敏感型品种红花大金元及低温敏感型品种K326为材料,通过盆栽试验研究不同浓度外源水杨酸对4℃低温胁迫下红花大金元和K326叶片相对电导率（REC）、丙二醛（MDA）含量、抗氧化酶活性、渗透调节物质含量及多酚代谢的影响。  结果  低温胁迫下,2个低温敏感性不同的烤烟品种的相对电导率、丙二醛含量、多酚氧化酶活性及苯丙氨酸解氨酶活性均显著上升,其中,K326的丙二醛含量上升幅度远大于红花大金元,达94.07%;而3个抗氧化酶活性均被显著降低,K326的可溶性糖含量及总酚含量、红花大金元的可溶性蛋白含量均显著上升。施加外源水杨酸后,K326及红花大金元的叶片相对电导率及丙二醛含量均显著降低,而3个抗氧化酶活性及苯丙氨酸解氨酶活性均显著上升,红花大金元的可溶性糖含量及可溶性蛋白含量、K326的总酚含量均显著上升;当外源水杨酸浓度为50~100 mg/L时对各个指标的缓解效果较好。  结论  外源水杨酸浓度50 mg/L处理对红花大金元及K326的缓解效果均达到最佳。      

中国烟叶矿质营养及主要化学成分含量特征研究

利用2002年抽样调查的220个烤烟样品,对我国烤烟中的氮、钾、磷、钙、镁、锰、铜、锌、硼、钠、铁、氯、烟碱、还原糖等14个指标的含量特征进行了分析。结果表明:1)除钙、钠、锌、硼、还原糖、烟碱外,其余指标在品种之间的差异极显著,但不同指标在品种之间的高低秩序不同。在样本数较多的K326、云烟85、云烟87、NC82、NC89中,K326的钾含量为1.79%,显著地高于云烟85、NC82、NC89,NC82、云烟87的氯含量分别为0.39%、0.32%,显著地高于K326、云烟85、NC89中的氯含量;2)氮、硼、烟碱含量从上部烟叶到下部烟叶显著地依次降低,而钾、铁、还原糖则从上部烟叶到下部烟叶显著地依次升高;3)烟碱含量地域之间的差异不明显,而其余指标在地域之间的差异极显著,但不同指标在品种之间的高低秩序不同。河南烟叶的钾含量显著地低于其他省份,贵州烟叶的氯离子含量显著地高于其他地方,湖南烟叶的还原糖含量显著地低于其他所有地方;4)我国烟叶氮、磷、钾、钙、镁、锰、氯、铜、锌、硼、钠、铁、烟碱、还原糖含量落在巴西烟叶范围之内的理论概率分别为0.525、0.598、0.485、0.338、0.462、0.839、0.449、0.384、0.275、0.586、0.621、0.586、0.739、0.684;还原糖、烟碱、钾、氯含量符合"国际型优质烟叶"质量标准的概      

K326和云烟85不同部位烟叶挥发性成分分析

采用同时蒸馏萃取和GC/MS法分析了云烟85 和K326 上部(B2F)、中部(C2F)和下部(X2F)烟叶的挥发性成分,并对这些烟叶进行了评吸。结果表明:①除新植二烯和二十八烷外,云烟85烟叶中许多挥发性物质的含量比K326高,但其挥发性物质总量比K326 的低,K326 中部叶总挥发性物质含量比云烟85多0.8mg/g, 达4.0mg/g,下部叶多出0.5mg/g;②下部叶中含较多的新植二烯、3-呋喃甲醛、巨豆三烯酮、硬脂酸和棕榈酸,中部叶中有较多的苯甲醇,而上部叶中降茄二酮较多;③中部叶的总挥发性物质含量最高,上部叶次之,下部叶最低,与评吸结果一致;④云烟85中部叶的吸味品质好于K326,但上下部叶不及K326。     

烤烟新品种黔西1 号的选育及其特征特性

黔西1 号是从烤烟品种K326 自然变异株中系统选育而成的烤烟新品种。黔西1 号大田生育期127 d,田间生长整齐,抗气候斑点病,抗病性较强,平均产量2090.40 kg/hm²,产值19 907.40 元/hm²,均价9.70 元/kg,上等烟率30.12%,分别比对照K326 提高3.22%、7.98%、6.01%和12.68%,烟叶外观质量较好,化学成分协调,吸食品质总体较好,综合性状略优于对照K326。     

烤烟新品种云烟87的选育及特征特性

烤烟新品种云烟87是用云烟2号为母本,K326作父本杂交,经系谱选择育成,2000年7月通过云南省烟草品种审评委员会审评,12月通过全国烟草品种审定委员会审定,云烟87主要农艺状稳定,变异系数小于对照K326,田间生长整齐一致,据多年异地试验结果,云烟87自然株高181．5cm打顶株高115cm,大田着生叶数26片,有效叶数18－20片,腰叶长77．5cm,宽31．0cm,大田生育期112d左右,节距6．0cm,上下节距分布均匀,中抗黑胫病,南方根结线虫病和青枯病,抗抓哇根结线虫病,耐肥水,适应性广,叶片厚薄均匀,层落黄好,易烘烤,平均产量2613kg/hm^2,均价4．84元/kg,上等烟比例45．07％,产值12259．5元／hm^2;比对照品种K326产量增加3．2％,均值提高0．52元,上等烟比例提高10．14个百分点,产值增加13．3％。初烤原烟多金黄色,色度强,油分多,叶片结构疏松,厚度适中,主要化学成分含量适宜,比例协调,烟碱平均含量2．2％,原烟香气质好,综合评吸指标优于生产推广主栽品种K326。云烟87具有优良,稳产、适应性广,抗逆力强,易烘烤等特点。     

贵州烤烟色素含量和颜色值随生育期的变化及其相关性

为了进一步探讨贵州烤烟生长特性,以K326、毕纳1号、贵烟1号、贵烟2号和K326有机烟为材料,研究了大田生育期（35、70、105 d）烟叶质体色素含量和颜色参数值的变化幵进行了相兲分析。结果表明,生育期烤烟烟叶质体色素含量和颜色参数（H＊除外）值均呈逐渐下降的趋势。毕纳1号35 d和105 d质体色素含量显著高于其他材料;K326有机烟70 d和105 d质体色素含量显著低于其他材料,但其L＊、b＊和C＊值显著高于其他材料。不同烤烟材料生育期烟叶L＊和H＊值差异均显著,且b＊和C＊值105 d显著高于35 d和75 d。不同烤烟材料烟叶质体色素含量与颜色参数值相兲均显著,其中质体色素含量与L＊、a＊值相兲系数较大,在0.805~0.866之间。线性回归分析表明,变量叶绿素b R2值（R^2=0.915）最大,变量类胡萝卜素R2值（R2=0.847）最小;自变量中线性回归系数正值Xa＊最大,其次是XH＊。相对类胡萝卜素,烤烟生育期烟叶叶绿素含量与颜色参数值的线性回归性更好。     

K,Ca,Zn离子对烤烟种子萌发及幼苗抗旱性的影响

用１９８．０２ｍｍｏｌ／ＬＫ＋、１．２４ｍｍｏｌ／ＬＺｎ＋＋浸种均可促进种子萌发，提高发芽率。高浓度的Ｃａ＋＋（２２．５２ｍｍｏｌ／Ｌ）对种子产生一定的渗透胁迫，并起到筛选作用。Ｋ＋、Ｃａ＋＋、Ｚｎ＋＋均能提高种子活力指数和烟苗素质；浸种和液培对幼苗生长有促进作用，并能提高烟苗的抗旱能力，但其机理有所差异。在干旱胁迫时，Ｋ＋对烟苗的主要作用表现在增加细胞的保水能力上，而Ｃａ＋＋则表现为稳定细胞膜的结构，减少可溶性物质的大量渗出，使相对电导率下降，并能显著提高细胞中的ＣＡＴ活性；Ｚｎ＋＋在增强ＳＯＤ活性上有显著作用。Ｚｎ＋＋和Ｃａ＋＋均使可溶性蛋白质含量增加。试验还表明，ＮＣ８９的抗旱性好于Ｋ３２６。