羊乳高F值肽酶解工艺优化

目的 探究通过生物酶解技术有效得到羊乳高F值肽的关键工艺。方法 以新鲜山羊乳为原料,采用两种酶分步水解法制备高F值肽,以蛋白质水解度和F值为指标,通过单因素试验和响应面分析法分别确定两步酶解的最佳条件,酶解液经活性炭静态吸附去除游离芳香族氨基酸,对脱去芳香族氨基酸后的酶解液进行氨基酸组成分析并测定F值。结果 水解羊乳蛋白最佳内肽酶为碱性蛋白酶,最优工艺为:加酶量4000U/g、底物浓度6%、酶解pH 9.0、温度45℃、时间3 h;最佳外肽酶为风味蛋白酶,最优工艺为:加酶量6200 U/g、酶解pH 6.5、温度49℃、时间2 h。羊乳经两步酶解及活性炭吸附后, F值可达21.82,符合高F值肽的产品要求。结论 羊乳高F值肽的酶解工艺研究可为功能性营养食品的开发及陕西羊乳的高值化利用提供技术支撑。     

利用米曲霉羧肽酶由玉米蛋白粉制备高F值寡肽

本文简述了酶法水解玉米醇溶蛋白制备高F值寡肽的主要工艺步骤。重点考察了米曲霉固态发酵产生羧肽酶的影响因素,碱性蛋白酶和米曲霉羧肽酶两次酶解蛋白后的寡肽分子量分布,活性炭吸附去除寡肽中芳香族氨基酸的效果。     

固定化酶水解鱿鱼碎肉制备高F值寡肽的工艺优化

为了研究鱿鱼碎肉通过固定化双酶水解法制备高F值寡肽的工艺,以蛋白质水解度为指标,通过单因素和正交试验确定固定化胃蛋白酶和固定化风味酶的最佳酶解条件。第1步采用固定化胃蛋白酶,其最佳酶解条件是:料水比1∶5、加酶量26.83 U/g鱿鱼碎肉、水解时间5 h、水解温度55℃;第2步采用固定化风味酶,其最佳酶解条件是:加酶量1 692 U/g鱿鱼碎肉、pH 7.0、水解温度55℃、水解时间3 h;两步酶解后的总水解度为(32.09±0.58)%,OD_(280)为0.238±0.001。酶解液经多级活性炭串联吸附脱除芳香族氨基酸后,支链氨基酸和芳香族氨基酸的比值(F值)大于20。鱿鱼碎肉经固定化胃蛋白酶和固定化风味蛋白酶分步水解后,活性炭串联吸附脱芳后可制备高F值寡肽。     

啤酒糟蛋白中高F值寡肽的制备

以啤酒糟为原料,采用双酶水解法制备高F值寡肽。通过对蛋白质水解度的测定,采用响应面法进行优化,得出双酶水解最佳条件为:碱性蛋白酶加酶量为6%、酶解时间4h、pH8.6、酶解温度56℃;木瓜蛋白酶的加酶量为3%、酶解时间3h、pH6.3、酶解温度48℃。用活性炭吸附酶解液,去除其中的芳香族氨基酸,采用G-25葡聚糖凝胶分离纯化,测其分子质量为794.24u,此时的F值为21.02。     

酶解牡蛎肉制备高F值寡肽的研究

对采用胰酶水解近江牡蛎(Ostrea rivularis Gould)制备高F值寡肽进行了研究.其方法是将所得酶解液用活性碳吸附,然后用凝胶层析纯化.通过对比6种粉状活性碳去除酶解液中芳香族氨基酸和保留支链氨基酸的能力,找出了较适宜的活性碳类型及其吸附条件:活性碳型号为TX-325型,固液比为1:30(m/V),pH=2.5,吸附时间为3 h,吸附温度为25℃.将经活性碳吸附后的酶解液用凝胶(型号为Biogel P2)层析法在流速为0.4 mL/min的条件下进行分离纯化,可得到F值大于20的寡肽混合物,其相对分子质量约1450～800.     

水解金枪鱼碎肉制备高F值寡肽

以金枪鱼碎肉为原料,采用双酶分步水解法制备高F值寡肽。通过Box-Behnken设计,确定最佳酶解条件。酶解液经活性炭静态吸附去除芳香族氨基酸,用Sephadex G-25葡聚糖凝胶层析测定高F值寡肽的分子质量分布。试验结果表明:胃蛋白酶为第1步水解用酶,酶解的最优工艺条件为酶用量650 U/g,料水比1∶7(g/m L),温度35.9℃;风味酶为第2步水解用酶,酶解的最优工艺条件为酶用量50 700 U/g,p H 6.51,温度51℃。酶解液吸附脱芳的最优条件为p H 3.0,活性炭用量1∶20(g/m L),温度35℃,时间3 h。脱芳后的酶解液经层析得到2个高F值寡肽组分,分子质量分布在600~1 300 u,F值分别为37.52,32.08。     

啤酒废酵母酶解制备氨基酸

采用风味蛋白酶、木瓜蛋白酶、中性蛋白酶作为外加酶对啤酒废酵母进行酶解,制备富含氨基酸的酶解液。对3种蛋白酶的酶解效果进行了比较。结果表明,风味蛋白酶酶解效果优于木瓜蛋白酶、中性蛋白酶。考查风味蛋白酶酶解温度、时间、pH值、加酶量对酵母抽提液中氨基氮得率和产品得率的影响,得到优化的工艺条件为:悬浮液质量分数10%,pH 5,风味蛋白酶添加量1.6%,温度50℃,酶解时间30 h,按此条件制备的酵母抽提液氨基氮得率可达到5.90%,产品得率达到59.7%。采用氨基酸分析仪对酵母酶解液进行分析,共检测出17种游离氨基酸,总含量为36.89 mg/mL酶解液。其中主要氨基酸为谷氨酸、丙氨酸、苏氨酸、亮氨酸、精氨酸、甘氨酸等。     

紫苏高F值低聚肽的制备研究

以紫苏粕为原料通过酶法水解制备紫苏高F值低聚肽,探讨Alcalase蛋白酶对紫苏粕中蛋白质水解的进程曲线。结果显示其最适条件为底物质量浓度5%(g/100ml)、pH8.5、温度60℃、酶添加浓度5ml/100g底物、时间240min,此水解液进一步用木瓜蛋白酶水解,水解条件为pH7.0、温度55℃、加酶量1%、时间4h,然后用活性炭吸附去除低聚肽中的芳香族氨基酸,吸附条件为pH4.0、温度40℃、活性炭用量7%(m/V)、时间3h,最后得到F值可达79.25的紫苏低聚肽。     

榆耳高F值低聚肽的制备及氨基酸组成分析

以榆耳为原料,提取榆耳中蛋白质,NH4Cl盐析,胰凝乳蛋白酶水解,羧肽酶去除芳香族氨基酸,收集10.6ku～2.0ku超滤膜截留范围的低聚肽,测其氨基酸组成及F值.结果表明,榆耳低聚肽的F值为22.67,支链氨基酸组成为是缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸,含量为34.8％.     

玉米黄粉二步酶解制备高F值寡肽的工艺优化

研究玉米黄粉二步酶解制备高F值寡肽的影响因素,优化其工艺参数。结果表明,蛋白酶种类、酶添加量、料液比、pH值、酶解温度和酶解时间对玉米蛋白转化率和活性肽F值产生一定影响。经单因素实验和正交试验设计优化的初次酶解条件为碱性蛋白酶添加量12.5 kU/g (以玉米黄粉质量为基准)、pH值9.0、料液比(g/mL)1∶35,50℃反应3.0 h,此条件下蛋白转化率达到85.61%。以初次酶解液为原料,经单因素实验和正交试验优化的二次酶解条件为复合风味蛋白酶添加量2.7 kU/mL(以玉米黄粉初次酶解液体积为基准)、pH值7.0、酶解温度45℃、反应时间2.5 h。玉米黄粉经二步酶解、活性炭吸附后,样品寡肽得率为35%,F值达到28.30,分子质量为493.46～912.84 Da,高F值寡肽占总含量85%以上。研究结果旨在为玉米黄粉资源综合利用提供理论和技术指导。     

复合酶水解蚕蛹蛋白制备功能性寡肽的工艺研究

为了制备分子量低、肽含量高的蚕蛹功能性寡肽,本文采用单素实验与响应面分析法,对不同蛋白酶及其不同组合、温度、pH值、底物浓度、酶的添加量等因素对蚕蛹分离蛋白水解工艺的影响进行了研究.研究结果表明,多酶复合水解可显著提高蚕蛹蛋白的水解度和寡肽得率,其中胰酶、风味蛋白酶与中性蛋白酶是最佳多酶组合,其最佳水解条件为底物浓度7.33％、酶添加量[E]/[S]3.62％、pH7.38、水解温度54.6℃、水解时间6h.在此条件下,蚕蛹蛋白的水解度高达29.2％,寡肽得率高达为81.14％.酶解后产品数均分子量为665.5 Da,重均分子量为726.9 Da,肽含量高达74.6％,而游离氨基酸含量仅为7.33％,表明复合酶解虽然提高了蚕蛹蛋白的水解度,但主要产物仍然是低分子寡肽,并没有大量生成游离氨基酸.     

以普通干酵母粉为原料的酵母抽提物制备工艺研究

为降低酵母抽提物生产对活性酵母原料的依赖,文章以普通干酵母粉为基本原料,以蛋白回收率、水解度、转化率和干物质得率为主要指标,通过单因素试验并结合正交试验优化,最终确定了其最佳制备工艺:料液比1∶9,加酶量0.5%(E/S,胰酶∶风味蛋白酶为3∶1),酶解时间16h,温度55℃,酶解pH值8.5。在该条件下制备酵母抽提物,蛋白回收率达71.84%±0.10%,水解度为29.17%±0.12%,所测定的17种游离氨基酸总质量分数达160.21mg/g,其中苦味氨基酸、甜味氨基酸和鲜味氨基酸分别占58.53%,20.38%和15.82%。肽分子量分析结果表明酵母抽提物中小于3kDa的肽段质量分数高达76.68%。     

不同蛋白酶制备鹅肉呈味肽的对比分析

以鹅肉为原料,采用中性蛋白酶、碱性蛋白酶、风味蛋白酶、木瓜蛋白酶制备呈味肽,对比分析4 种酶解液中的水解度、寡肽含量,采用氨基酸自动分析仪对酶解液游离氨基酸组成进行测定,并利用电子舌和感官评定方法对酶解液的鲜味等味道进行滋味评定。结果表明：45 ℃恒温水浴酶解6.5 h,加酶量1 200 U/g、pH 7.0、固液比1∶3（g/mL）的条件下,木瓜蛋白酶酶解液水解度最大且寡肽质量分数最高,其次是中性蛋白酶,鹅肉蛋白水解度达到29.69%,寡肽质量分数达到0.18%。此外,中性蛋白酶酶解液的风味最好。中性蛋白酶酶解后产生的游离氨基酸类型丰富,谷氨酸和丙氨酸的含量高,最终酶解液整体鲜味浓郁,并伴有酸味。因此,确定酶解鹅肉蛋白的最佳用酶为中性蛋白酶。     

多孔壳聚糖固定酵母蛋白酶条件的优化及酶学性质分析

以多孔壳聚糖微球固定酵母蛋白酶,通过对戊二醛含量、吸附时间、固定化温度、pH进行了单因素试验及正交试验,以蛋白酶酶活回收率为评价指标,确定的固定化条件为戊二醛含量1.4%,吸附温度27 ℃,pH值为10,吸附时间24 h。在此最佳条件下,固定化酵母蛋白酶酶活回收率为68.8%。酶学性质分析结果表明,固定化酶最佳反应温度较游离酶升高10 ℃,最佳作用pH较游离酶向碱性方向偏移1个pH单位。因此,用多孔壳聚糖对酵母蛋白酶进行包埋可以提高蛋白酶活性。     

鸡肉蛋白酶解工艺及水解产物成分研究

为了研究鸡肉蛋白的酶解工艺条件,采用复合酶解的方法,研究了酶种类及酶解工艺条件对水解度的影响。结果显示鸡肉蛋白的最佳水解条件:pH为7.0,料液比为1:2,酶解温度为58℃,复合蛋白酶(添加量0.33%)酶解2 h后,不灭酶,加入风味蛋白酶(添加量0.67%)再酶解2 h;并在此酶解条件下,研究测定了鸡肉蛋白酶解液中游离氨基酸成分和含量,以及酶解液中肽分子量分布的情况。酶解液中游离氨基酸种类齐全且含量丰富;酶解液的肽相对分子质量都集中在1000u以下,酶解过程中多肽不断减少,寡肽不断增加;酶解3.5 h后,相对分子质量小于1000 u的小分子肽和氨基酸含量可达99.85%。     

双酶法制备低苦味大豆寡肽的研究

利用中性蛋白酶和Flavourzyme双酶法,对大豆分离蛋白进行水解制备大豆寡肽,讨论中性蛋白酶和Flavourzyme的最佳酶解条件,以及大豆寡肽的苦味值变化。大豆分离蛋白的预处理条件为温度90℃、时间10min;中性蛋白酶的最佳酶解条件为底物浓度4%、反应温度50℃、时间4h、pH8.5、酶用量6%,水解度(DH)可达21.46%;Flavourzyme的最佳酶解条件为反应温度50℃、时间6h、pH7.0、酶用量3%。采用双酶中性蛋白酶-Flavourzyme生产的大豆寡肽,苦味明显降低。     

活性炭吸附分离芳香族氨基酸的研究

采用动态吸附法,对18种活性炭进行了筛选,并确定吸附条件为pH3,吸附温度25℃,炭-液比1∶12,吸附时间120min。根据活性炭吸附前后的蛋清寡肽混合物溶液的全波长紫外扫面结果,发现活性炭对芳香族氨基酸吸附作用较强。经氨基酸自动分析仪测得蛋清高F值寡肽溶液F值为22,游离氨基酸含量7.8%,凝胶过滤色谱测定其分子质量分布为连续的,绝大部分分布在300～800u。     

活性炭法制备栉孔扇贝高F值寡肽的工艺优化

摘要 ： 目的 研究活性炭脱除芳香族氨基酸工艺,优化活性炭吸附条件。方法 采用F值、BCAA (支链氨基酸,Branched-chain Amino Acids)保留率和AAA(芳香族氨基酸,Aromatic Amino Acids)去除率3个指标,通过单因素和正交实验研究温度、pH、吸附时间、固液比4个因素对活性炭脱除芳香族氨基酸效果的影响。结果 最佳吸附条件为温度35℃、pH 6、吸附时间2 h、固液比1:10,经活性炭吸附后,酶解液F值达到33.22,制备出了符合高F值要求的栉孔扇贝(Chlamys Farreri)加工副产物酶解液。结论 该活性炭吸附脱芳技术为栉孔扇贝加工副产物的高值化应用及栉孔扇贝的综合应用提供了新的途径。     

特异性蛋白酶酶解虾副产物制备ACE抑制肽

ACE抑制肽构效关系(QSAR)的研究认为小肽C末端氨基酸的疏水性和其ACE抑制活性之间呈正相关关系。针对性地选择胰凝乳蛋白酶和脯氨酸蛋白酶两步酶解虾副产物制备ACE抑制肽。在一定温度、pH和加酶量条件下,以蛋白质的水解度和ACE抑制率为指标,确定胰凝乳蛋白酶、脯氨酸蛋白酶的最佳酶解时间均为4h。两步酶解产物ACE抑制的IC50值为1.645mg protein/mL。经透析后,得到0~500u(组分1)和500~1000u(组分2)两个组分,组分1和组分2的IC50值分别降为0.333mg peptide/mL和1.320mg peptide/mL。质谱分析结果表明组分1中含有10个肽,分别由5~14个氨基酸组成;组分2中含有15个肽,分别由7~14个氨基酸组成。25个已知序列多肽中有22个多肽的羧基端是脯氨酸或芳香族氨基酸,与预期相符。     

活性炭在初步纯化玉米肽中的应用研究

以玉米蛋白粉酶解制备的玉米复合肽为原料,通过活性炭吸附的方法,从吸附温度、吸附时间、吸附pH值、料液比等几个方面摸索了活性炭纯化玉米肽的最佳工艺条件,结果表明：在pH值为3,吸附温度为30℃,吸附剂用量为1∶10,吸附时间为2h的条件下对玉米肽中的芳香族氨基酸进行吸附,吸附效果最好,可初步分离纯化玉米肽的作用。