不同谷物蛋白肽对自由基清除作用的研究

采用碱性蛋白酶对3种谷物蛋白(小麦、大米、玉米)进行水解得到谷物蛋白水解物,利用超滤对水解液进行分离,对比研究了所得不同谷物蛋白肽对自由基清除作用的效果,包括氧自由基、DPPH自由基和还原力等。结果表明,谷物蛋白种类及肽的相对分子质量大小对自由基清除作用均有较大影响,大米和玉米蛋白水解物的自由基清除能力较好;经超滤膜分离后,3种谷物蛋白肽中小于1 ku组分的自由基清除作用均高于其他组分。     

双酶水解罗非鱼碎肉制备肉味香精前体物研究

利用风味蛋白酶组合其他蛋白酶酶解罗非鱼碎肉,以蛋白水解液的水解度,游离氨基酸含量和肽分子量分布为指标综合评价水解效果.结果表明:木瓜蛋白酶+风味蛋白酶组合水解的水解液中游离氨基酸的总得率最高,其中鲜味氨基酸,含硫氨基酸均高于复合蛋白酶+风味蛋白酶组合和中性蛋白酶+风味蛋白酶组合的水解产物;分子量分布无明显的差异,罗非鱼水解液的肽片段的分子量明显小于畜禽肉类和植物蛋白的水解液,其分子量Mw＜ 1000u的肽段占97％以上,小肽的比例显著高于畜禽肉的水解液.     

菌酶协同发酵水解大米蛋白ACE抑制肽及其活性的研究

使用植物乳杆菌2-18和枯草芽孢杆菌Y、枯草芽孢杆菌Y4-2联合蛋白酶共同水解大米蛋白,测定大米蛋白的水解溶出率及脱除液的血管紧张素转换酶(angiotensin I-converting enzyme,ACE)抑制活性。在利用菌酶联合水解大米蛋白的组合中,植物乳杆菌2-18+风味蛋白酶/菠萝蛋白酶+胃蛋白酶/酸性蛋白酶组合对大米蛋白的水解溶出率最高,蛋白脱除率为(91.32±1.60)%。大米蛋白水解溶出液中必需氨基酸占总氨基酸含量的39.62%。通过对分子量分布分析,大米蛋白水解溶出液的多肽分子量分布主要在1 kDa～1.5 kDa部分。经植物乳杆菌2-18+风味蛋白酶/菠萝蛋白酶+胃蛋白酶/酸性蛋白酶组合对大米蛋白的水解溶出液ACE抑制率达(91.95±1.63)%,具有良好的ACE抑制活性。     

大米蛋白肽的制备与ACE抑制活性分析

通过优化大米蛋白的单酶酶解与双酶酶解工艺,确定了采用碱性蛋白酶加蛋白酶B复合酶解制备大米蛋白肽的工艺。蛋白回收率高达43.9%,制备的大米蛋白肽感官评价高、苦味低、分子质量小。对比市售的大豆蛋白肽、鱼胶原蛋白肽,3种蛋白肽的水分含量、蛋白质含量、脂肪含量基本接近。大米蛋白肽与大豆蛋白肽中分子质量<2000 Da的总比例均>80%,而鱼胶原蛋白肽中总比例仅有58.01%。这3种蛋白肽均有血管紧张素转换酶(angiotensin I-converting enzyme,ACE)抑制活性,其中大米蛋白肽的活性最高,IC 50最低,为4.97μg/mL,仅为大豆蛋白肽IC 50的21.6%,为鱼胶原蛋白肽IC 50的14.1%。通过结构分析获得的4条大米蛋白肽段序列均符合现有研究的ACE抑制活性的构效分析。测定不同批次生产的大米蛋白肽的ACE抑制活性,结果表明,ACE抑制率与IC 50值基本保持稳定。     

富含谷氨酰胺多肽的制备及其体外模拟消化

以乳清蛋白、大米蛋白和小麦蛋白为原料,通过不同酶水解制备富含谷氨酰胺多肽,根据蛋白质回收率、酰胺氮含量、分子质量分布以及抗氧化活性(羟自由基清除活性和氧自由基吸收能力)筛选不同来源的最优多肽。研究优选的3种多肽耐受胃肠模拟消化能力,确定其制剂形态并筛选富含谷氨酰胺多肽制备的最优原料。结果显示,乳清蛋白肽(胰蛋白酶组)、大米蛋白肽(风味蛋白酶组)及小麦蛋白肽(风味蛋白酶组)为优选多肽,作为模拟消化的研究对象。以乳清蛋白肽为基料的谷氨酰胺功能性食品,应选择肠溶胶囊为包装材料。大米蛋白肽、小麦蛋白肽采用普通胶囊为包装材料。小麦蛋白肽经胃肠模拟消化后酰胺氮含量增至1.90%,小分子肽(Mw 1 ku)占比高达74.59%,且抗氧化活性无显著差异(羟自由基清除率为22.89%,ORAC值为1.28μmol TE/(L·mg)肽,P 0.05),说明小麦蛋白是制备富含谷氨酰胺多肽的最优原料。     

甲鱼碱溶蛋白肽的分离及抗肿瘤活性研究

为了获得具有抗肿瘤活性的肽段,研究以水解度为评价指标,评价了4种蛋白酶(酸性蛋白酶、胰蛋白酶、中性蛋白酶、木瓜蛋白酶)对甲鱼碱溶蛋白酶解效果的影响,确定中性蛋白酶为最适酶。用酶解、凝胶色谱制备甲鱼碱溶蛋白肽,用MTT肿瘤抑制实验评价抗肿瘤能力,并用HPLC测定高活性肽段的分子质量分布。结果显示:甲鱼碱溶蛋白经中性蛋白酶酶解获得较高水解度的产物,水解度为14.47%。经Sephadex G-25分离获得分子质量184~4 588 u的小分子肽,其具有较高的抗肿瘤活性,IC_(50)为32.26μg/m L。     

小麦胚芽蛋白钙络合物的制备及结构表征

以小麦胚芽蛋白为原料,经蛋白酶酶解后与Ca2+键合形成肽钙络合物,可作为第4代钙补充剂。碱性蛋白酶具有更高的麦胚蛋白水解活性,是制备高键合钙能力水解液的最适合酶类,且水解度在21.5%时钙的结合量达最大值18 mg/g蛋白;SDS-PAGE表明碱性蛋白酶迅速降解麦胚蛋白中高分子量亚基,且50 kDa和32³4 kDa亚基的水解与钙离子键合能力密切相关;键合钙能力强的水解产物中主要含Glu、Arg、Asp、Gly,且含44%疏水性氨基酸;分子量分布显示键合钙的小肽分子量在2 000 Da以下;全波长扫描和红外图谱表明肽段上的氨基和羧基均参与了键合反应,并生成了新的物质——麦胚肽钙络合物。     

基于定量构效关系制备火麻仁蛋白ACE抑制肽

高血压是引发心血管疾病的主要因素,经常服用降压的药物会产生副作用,因而安全、高效的食源性降压肽成为关注点。本研究建立了血管紧张素转换酶(ACE)抑制肽的定量构效关系(QSAR)模型,确定ACE抑制肽的结构与其活性间的关系。将模型结果辅以计算机虚拟酶切精确掌握蛋白水解位点,筛选合适的蛋白酶水解火麻仁蛋白定向制备ACE抑制肽,并测定最终水解物的抑制效果。结果表明：基于二肽建立的SVM-AAindex模型具有最佳的预测性能(R²为0.81,RMSE为0.53),且当二肽C端氨基酸为疏水性和芳香族氨基酸时具有较强的ACE抑制效果。蛋白质组分分析发现火麻仁蛋白含有34.60%的疏水性氨基酸和芳香族氨基酸是制备ACE抑制肽的良好来源。选择虚拟酶切产生较多短肽和生物活性肽的碱性蛋白酶和枯草杆菌蛋白酶对火麻仁蛋白进行定向水解,获得的最终水解液的ACE抑制IC50值分别为1.89和2.30 mg/mL。本研究建立了一种高效精准的制备火麻仁蛋白ACE抑制肽的方法,在降血压药物上具有很好的应用前景。     

内切酶与端肽酶协同水解大豆蛋白的研究

大豆蛋白酶解常常会产生苦味,端肽酶可有效水解苦味肽,但它们对于完整的蛋白大分子几乎没有作用,因此必须与内切酶联合使用或在其后使用。研究了内切酶枯草杆菌碱性蛋白酶(Alcalase 2.4L)与端肽酶黑曲霉酸性蛋白酶(3000U/g)协同水解大豆蛋白制备寡肽的可行性,结果表明:采用端肽酶黑曲霉酸性蛋白酶与内切酶枯草杆菌碱性蛋白酶协同作用水解大豆蛋白,不但水解液的苦味值显著下降,而且大豆蛋白降解率和水解液水解度显著提高。     

鱿鱼蛋白抗菌液及其美拉德反应产物制备及抑菌作用研究

目的 制备抗菌型鱿鱼蛋白水解液,实现鱿鱼资源的高值化利用。方法 以鱿鱼蛋白(鱿鱼头和加工碎肉)为原料,经风味蛋白酶、胰蛋白酶、胃蛋白酶、碱性蛋白酶和中性蛋白酶水解,测定各水解液对鱿鱼腐败菌(specific spoilage organisms of squid after end storage at room temperature,SE-SSOs)的抑菌性,选择合适蛋白酶水解鱿鱼蛋白,在最适酶解温度和酶解pH下,研究加酶量和酶解时间对水解液抑菌活性影响,制备鱿鱼蛋白抗菌液,通过美拉德反应提高鱿鱼蛋白抗菌液对SE-SSOs的抑菌活性,探讨抑菌模式。结果 胃蛋白酶水解鱿鱼蛋白所得水解液对SE-SSOs的抑菌效果强于其他4种蛋白酶,在胃蛋白酶最适pH 2.0和酶解温度37 ℃下,胃蛋白酶添加量500 U.g_-1^和酶解2 h制备了鱿鱼蛋白抗菌液(Squid protein antibacterial hydrolysate,SAH),SAH中分子量6500 Da左右和低于1000 Da肽组分的相对含量达到46%左右。在SAH中分别添加1%和3%质量体积比(m/v)葡萄糖、果糖和壳聚糖,在120 ℃油浴下加热30 min进行美拉德反应,其中添加3%果糖的SAH美拉德反应产物(记作SAH-3Fru MRPs)对SE-SSOs抑菌作用强于SAH和其他美拉德产物。扫描电镜结果显示SE-SSOs经SAH和SAH-3Fru MRPs作用,其中一些杆菌发生严重膜损伤,而球菌的质膜相对保持较完整。结论 胃蛋白酶水解法适用于制备抗菌型鱿鱼蛋白水解液,通过美拉德反应能进一步提高水解液的抑菌作用,SAH和SAH-3Fru MRPs均可以通过膜损伤方式抑制SE-SSOs中特定菌。因此,SAH及SAH-3Fru MRPs有进一步开发应用前景。