进境多肉植物细菌性褐腐病的病原分离与鉴定

目的通过对病变叶片进行细菌的分离鉴定,明确韩国进境多肉植物上叶片褐色腐烂病斑的病原。方法采用组织分离法,从韩国进境多肉植物叶片中分离纯化到1株细菌菌株,对该菌株进行了鉴定和生物学特性研究。结果形态及培养特征、生理生化特性的研究结果表明该菌株在营养琼脂(nutrient agar,NA)培养基上单菌落圆形淡黄色,边缘整齐。菌体直杆状,周生鞭毛运动,无芽孢,为革兰氏阴性菌。经形态鉴定、培养特征、生理生化、致病性测定及16S rDNA序列分析,确认引起该多肉植物发生褐腐病的病原是菠萝泛菌(Pantoea ananatis)。结论经过对发生细菌性褐腐病的叶片进行病原分离与鉴定,有效阻止了菠萝泛菌的远距离传播。     

娃娃菜（Brassica campestris）软腐病病原菌的分离与鉴定

为鉴定导致娃娃菜采后软腐病的主要病原菌,以新鲜娃娃菜为试验材料,常温贮藏一定时间至发病后,选取典型软腐病病症叶片进行菌株的分离纯化和致病性测定,通过形态学观察、生理生化和分子生物学鉴定得出病原菌的相关种属。结果表明:娃娃菜软腐病病原菌株C-2和C-11菌落呈圆形,乳白色,稍凸起,菌体呈短杆状,为革兰氏阴性菌;可在37 ℃和含有7% NaCl培养基中正常生长,可利用柠檬酸盐和明胶,并能够利用葡萄糖、果糖、蔗糖、甘油、半乳糖、水杨苷、麦芽糖、甘露醇和山梨醇作为碳源发酵产酸;基于16S rDNA基因序列系统发育关系表明,C-2和C-11与其他的P.carotovorum subsp. odoriferum（Pco）菌株形成明显的Pco类群,因此,可以判断该菌株属于胡萝卜软腐果胶杆菌Pco亚种,该研究结果可以为娃娃菜软腐病的研究与防治提供理论基础。     

广西烟草一种斑枯病新病原菌的鉴定

为明确导致广西田林县烟草叶片斑枯的病原菌种类,采用组织分离法对典型发病叶片的病原菌进行分离,并以菌丝块接种法测定分离物的致病性。用PDA和V8培养基培养并观察其形态特征,再将其rRNA-ITS和TUB2序列联合进行分子鉴定。结果表明,分离获得的代表菌株可致烟草叶片发病,在PDA培养基上不能产孢,在V8培养基上培养可形成分生孢子器和分生孢子。分生孢子器近球形,直径70 ~150 μm。分生孢子为单胞,无色,呈椭圆形,平均大小7.1 μm×2.7 μm。代表菌株的rRNA-ITS和TUB2序列Blastn比对及系统进化树分析显示,其与木瓜拟多隔孢（Stagonosporopsis caricae）的相似度分别为99.61%和100%,与S. caricae归为同一分支。结合致病性和形态特征,将广西烟草斑枯病的病原菌鉴定为S. caricae。      

导致酱油胀袋微生物的分离与鉴定

春、夏两季是酱油胀袋的高发时期,导致酱油胀袋的原因大多数是由微生物引起的。文中利用高糖培养基、营养琼脂培养、MRS培养基、马铃薯蔗糖培养基来分离产自浙江绍兴地区的已胀袋酱油中的微生物。结果仅用营养琼脂培养基从样品中分离、纯化出了7株细菌,编号:k1、k2、k3、k4、k5、k6、k7;没有在胀袋酱油中分离到酵母菌和霉菌。经产气实验证实只有k2菌株能在酱油中产气,根据《伯杰氏细菌鉴定手册》对k2菌株的菌体和菌落形态特征、生理生化特征等进行系统分析,初步鉴定k2菌株为巨大芽孢杆菌。     

洛阳地区烟草根际土壤中多粘类芽孢杆菌的分离与鉴定

为从烟草根际土壤中筛选得到对烟草土传病原真菌具有拮抗作用的细菌菌株,用稀释平板法分离土壤样品获得根际细菌菌株,再用平板对峙培养法测定细菌菌株的拮抗作用,通过形态特征观察、生理生化测定及16S rDNA序列分析来鉴定拮抗细菌的种类。结果表明,从30份根际土壤样品中共分离、纯化得到180个细菌单菌落,其中49株细菌对供试病原真菌具有一定的抑制作用。菌株TS681、TS682和TS683对3种病原真菌均具有较好的拮抗作用,对瓜果腐霉的抑菌率均大于51.43%,对寄生疫霉的抑菌率均大于68.75%,对尖孢镰刀菌的抑菌率均大于60.00%。结合菌株的形态特征、生理生化特征与16S rDNA序列的分析结果,将菌株TS681、TS682和TS683鉴定为多粘类芽孢杆菌(Paenibacillus polymyxa)。     

人体肠道中多雷拟杆菌的分离与鉴定

目的：从健康人体肠道菌群中分离筛选出拟杆菌菌株，并进行鉴定培养。方法：从4位无肠道疾病史，且在研究前近1个月内未使用抗生素的健康供体中采集粪便样品，于添加有血红素、维生素K1的脑心浸液肉汤培养基中初筛，再于添加有脱纤维羊血、血红素、维生素K1的布氏琼脂培养基复筛，将筛选到的菌株进行形态学及培养特征的观察、革兰氏染色及显微镜的镜检、生理生化鉴定、菌落PCR反应和16S rRNA保守序列测定与分析，以确定种属。结果：筛选得到的NG01菌株经厌氧培养后在血平板上产生灰白色、不透明、表面光滑、边缘规则、湿润、轻微隆起、呈圆形、中等大小的菌落，菌株专性厌氧，呈革兰氏阴性，无芽孢，棒杆状，排列无规则，能发酵葡萄糖、蔗糖、甘露糖、乳糖等，不发酵D-山梨醇、肌醇、核糖等，氧化酶和过氧化氢酶检测均呈阴性。经Blast序列比对，NG01菌株与Bacteroides dorei 175的16S rRNA相似度达到98.96%。结论：分离得到的NG01菌株在细菌形态、培养特性、生理生化反应结果符合拟杆菌属特征。     

建立快速分离鉴定新疆番茄酱腐败菌的方法

采用国家相应的检测标准,根据番茄酱属酸性罐头食品(pH<4.6)的特点以及按照外方提出的要求,分离、鉴定引起番茄酱腐败变质的目标菌。通过对大量不同类型培养基的筛选,对培养出的微生物进行菌体形态、菌落特征及其生理生化等特性进行鉴定。实验结果表明,平酸菌增菌培养基为枯草芽孢杆菌生长的最适培养基,麦芽浸膏汤培养基为栖稻黄色单胞菌的最适培养基;分离得到的2株菌经VITEK-32生化鉴定仪鉴定为枯草芽孢杆菌和栖稻黄色单胞菌。通过本次实验为建立对引起番茄酱腐败变质微生物的快速筛选方法打下一定的基础。     

建立快速分离鉴定新疆番茄酱腐败菌的方法

采用国家相应的检测标准,根据番茄酱属酸性罐头食品(pH＜4.6)的特点以及按照外方提出的要求,分离、鉴定引起番茄酱腐败变质的目标菌.通过对大量不同类型培养基的筛选,对培养出的微生物进行菌体形态、菌落特征及其生理生化等特性进行鉴定.实验结果表明,平酸菌增菌培养基为枯草芽孢杆菌生长的最适培养基,麦芽浸青汤培养基为栖稻黄色单胞菌的最适培养基;分离得到的2株菌经VITEK-32生化鉴定仪鉴定为枯草芽孢杆菌和栖稻黄色单胞菌.通过本次实验为建立对引起番茄酱腐败变质微生物的快速筛选方法打下一定的基础.     

一株产酯化酶菌株的分离鉴定及产酶

从浓香大曲中分离筛选得到一株产酯化酶的菌株,鉴定并研究了其产酯化酶的特性。利用微生物分离技术筛选得到产酯化酶的红曲霉FBKL3.0018,根据形态特征、培养特征、生理生化特征并结合分子生物学方法进行鉴定。结果鉴定菌株FBKL3.0018为红曲属的紫色红曲霉(Monascuspurpureus)。菌株的酯化力较高,可用于生产酯化酶制剂和高酯化大曲等。     

一株产蓝色素菌株的筛选及初步鉴定

从土壤中分离得到一株产蓝色素的放线菌,并将其编号为D2013。经过形态特征、培养特征以及结合生理生化反应初步鉴定该菌株;结果表明,该菌株是一种典型的链霉菌。通过与已知产蓝色素链霉菌碳源利用情况及生理生化特性的比较;比较发现菌株D2013可能为新种,暂将其命名为链霉菌D2013。     

腊鱼中优势乳酸菌的分离、纯化及性质鉴定

为了改进传统腊鱼生产工艺并研究腊鱼生产中优势乳酸菌的种类及性质,利用鉴别性培养基从传统腊鱼制品中分离得到25株疑似菌株,根据生理生化实验确定其性质,获得4株优势菌株分别为干酪乳杆菌、德氏乳杆菌保加利亚种、香肠乳杆菌、乳酸乳杆菌,并考查了4株菌株的24h产酸能力及生长特性。     

高活性纤维素降解菌的分离鉴定

从土壤中分离到6株产纤维素酶的细菌，进一步筛选培养获得1株酶活较高的菌株，定名为S3。对S3的初步分类学鉴定初步将其归为纤维单胞菌属（Cellulomonas）。     

进口黑虎虾中霍乱弧菌的鉴定及其挥发性产物分析

目的对进口黑虎虾中分离的菌株F14-2进行种属鉴定,通过顶空气相色谱-质谱联用法(headspace gas chromatography-mass spectrometry,HS-GC-MS)分析分离菌株液态培养代谢的挥发性产物。方法应用VITEK 2 Compact全自动微生物鉴定系统分析菌株的生理生化特征,利用荧光定量PCR特异性扩增检测病原菌,通过顶空气相色谱-质谱联用法分析分离菌株F14-2的代谢的挥发性产物。结果菌株F14-2为革兰氏阴性菌,生理生化特征与霍乱弧菌(Vibrio cholerae)的相似性为98%,荧光定量PCR检测和血清凝集试验进一步确认为非O1非O139群霍乱弧菌,菌株F14-2在营养肉汤(nutrient broth)中代谢的挥发性产物主要有乙醇、异戊醇、乙酸和2-乙基己醇。结论进口黑虎虾中分离的菌株F14-2鉴定为霍乱弧菌,该菌产生的挥发性产物为霍乱弧菌的鉴定提供参考。     

甘南牧区牦牛乳酸奶中产乳糖酶菌株的筛选、鉴定及产酶条件研究

采用含X-gal的筛选培养基,从甘南牧区采集的25份牦牛乳酸奶中分离筛选到20株产乳糖酶微生物,其中菌株SYA2产乳糖酶活力最高,综合形态学、生理生化特征和16S rDNA序列同源分析结果,将其鉴定为肠杆菌属(Enterobacter sp.)。对菌株Enterobacter sp.SYA2产酶条件的研究表明:发酵温度为37℃,发酵周期为24h,培养基初始pH6.5时有利于该菌株产酶,此条件下乳糖酶活力为8.00U/mL。     

烟草青枯菌拮抗放线菌的筛选及鉴定

为筛选出烟草青枯菌的有效拮抗菌,本研究从烟草根围土壤中分离了97株放线菌,通过平板对峙培养法筛选出抑菌圈直径均达20 mm以上的拮抗放线菌3株.根据其在鉴别培养基上的培养特征、孢子和孢子链的形态特征,生理生化特性以及16SrDNA序列分析对这3株拮抗放线菌进行鉴定.结果表明,3株拮抗放线菌都属于链霉菌属(Streptomyces),分别为粉红孢类群中的玫瑰暗黄链霉菌(S. roseofulvus Preobrazhenskaya)、绿色类群中的橄榄绿链霉菌(S. olivaceoviridis Preobrazhenskaya)和灰褐类群中的黄麻链霉菌(S. corchorusii Ahmed).其中,玫瑰暗黄链霉菌菌株对青枯劳尔氏菌的拮抗效果最好,其平均抑菌圈直径可达54.66 mm;橄榄绿链霉菌菌株的拮抗效果次之,其平均抑菌圈直径为43.20 mm;黄麻链霉菌平均抑菌圈直径为20.34 mm.     

烟碱降解菌的筛选与初步鉴定

为分离具有高效降解烟碱能力的菌株,以湖南省浏阳县烟草土壤为菌株来源,使用选择性培养基进行初筛和复筛,并对高效降解菌株做菌落形态、个体形态和生理生化鉴定。通过试验,初筛到13株能降解烟碱的菌株,复筛得到降解烟碱活性最高的细菌菌株F4。它能在以烟碱为唯一碳源和氮源的培养基中生长良好,在液体烟碱培养基中培养14 d,能将培养液中的烟碱降解87.51%。根据形态特征和理化分析结果,初步鉴定该菌为肠杆菌科摩根氏菌属摩氏摩根氏菌亚种(Morganella fulton morganella morganii subsp)。      

庆阳豆豉优势菌株的分离鉴定

为了确定庆阳豆豉的主要作用微生物,获得优势发酵菌株,以甘肃庆阳7个县区农户所制的发酵豆豉为材料,采用不同培养基分离纯化,通过平板透明圈法初筛,发酵液蛋白酶、纤维素酶和淀粉酶活性测定,对传统豆豉发酵微生物进行了分离筛选,最后对优势菌株进行生理生化鉴定及16S rDNA分子生物学鉴定。共分离出22株细菌菌株,初筛获得10株均可分解蛋白质、淀粉和纤维素能力的菌株,其中QY2b蛋白酶和纤维素酶活性最高,分别达到了25.37 U/mL和6.015 U/mL。通过对QY2b的形态观察及生理生化试验,结合16S rDNA鉴定手段,确定该优势发酵菌种为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)。     

鄂尔多斯地区酸粥细菌多样性分析及乳酸菌的分离鉴定

以采集自内蒙古鄂尔多斯地区的8个酸粥样品为研究对象,利用Illumina MiSeq高通量测序技术,对样品进行细菌菌群结构及多样性研究,分离鉴定其优势菌株。结果表明:8个样品中的细菌主要来自厚壁菌门(Firmicutes)和变形菌门(Proteobacteria),乳酸杆菌属(Lactobacillus)和醋酸杆菌属(Acetobacter)为优势菌属。乳酸杆菌属在各样品中占比最高,为42.63%～97.49%。SZ1、SZ2样品与其他样品的菌群结构差异较大,可能与不同采集时间有关。对上述样品中的乳酸菌进行分离纯化,通过生理生化试验结合分子生物学方法,鉴定获得1株干酪乳杆菌(Lactobacillus casei),1株发酵乳杆菌(Lactobacillus fermentum),2株植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)和4株副干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei)。上述研究结果为酸粥工业化生产提供菌种资源和理论依据。     

腌腊肉制品中乳酸菌的筛选鉴定及其在腊肠中的应用

为筛选适合传统腌腊肉制品的优良乳酸菌菌株,从多种农家自制传统腌腊肉制品中分离纯化出9株优势乳酸菌。通过发酵特性筛选,得到一株性状优良菌株10M-7,并制备该菌株的干粉发酵剂,以未接种发酵剂腊肠为对照,分析此发酵剂对腊肠感官品质和微生物变化的影响。结果表明,10M-7菌株具有良好的产酸特性和抑菌性能。根据形态学、生理生化特征和16S rRNA序列分析,鉴定其为植物乳杆菌,采用冷冻干燥法制备纯种发酵剂,并制作人工发酵腊肠。发酵剂组pH值在初期便迅速下降,且始终低于对照组;发酵剂组乳酸菌迅速生长繁殖,且葡萄球菌和大肠杆菌数量与对照组相比明显降低。感官评价表明,当添加量为10~4CFU/g原料肉时,能够很好地保持和改善产品风味,使产品整体感觉更好。