富硒农产品中硒代氨基酸形态及其在不同蛋白组分中的分布

目的：探究富硒西兰花、富硒大豆、富硒玉米、富硒大麦苗不同溶解性蛋白组分中硒代氨基酸形态及分布情况。方法：利用高效液相色谱—氢化物发生—原子荧光光谱联用技术测定4种富硒禾谷类和十字花科农产品中硒代蛋氨酸(SeMet)、硒代胱氨酸(SeCys2)、甲基硒代半胱氨酸(MeSeCys)和硒代乙硫氨酸(SeEt)含量,并分析各硒代氨基酸在清蛋白、球蛋白、醇溶蛋白和谷蛋白等不同溶解性蛋白组分中的分布特点。结果：4种富硒植物的硒代氨基酸在不同蛋白组分中的含量及分布存在显著差异(P＜0.05)。富硒大豆、富硒玉米、富硒大麦苗的有机硒以SeMet形式存在,在4类蛋白组分中分布较一致且相对含量均高于66%,不存在SeEt;富硒西兰花的有机硒主要以SeCys2和SeMet为主、MeSeCys次之,前二者在清蛋白和谷蛋白组分中的分布较一致且约占有机硒含量的36%,但在球蛋白和醇溶蛋白组分中均以SeMet存在,相对含量最高达60%,其次为SeCys2约占有机硒含量的34%。富硒西兰花中存在极少量的SeEt约占有机硒含量的5%。结论：3种禾谷类农产品(富硒大豆、富硒玉米、富硒大麦苗)的不同溶解性蛋白中均以SeMet为主;而富硒西兰花的不同溶解性蛋白则以SeMet和SeCys2为主,并且其清蛋白和谷蛋白还富含较多的MeSeCys。     

富硒灵芝液态深层发酵工艺研究

采用灵芝作为富硒的载体,进行富硒灵芝液态深层发酵实验,研究灵芝对无机硒的生物转化能力。利用正交实验设计,对富硒灵芝液态深层发酵条件如摇床转速、接种量、pH等进行了优化。结果表明,灵芝能在含有低浓度亚硒酸钠(50～200mg/kg)的培养基中生长,并在菌丝体内富集硒。在优化的发酵条件下,富硒灵芝菌丝体干质量为38.0g/L,菌丝体硒含量为1568μg/g,总富硒量为59584μg/L。     

富硒玉米蛋白水解物中硒肽及含硒氨基酸的结构鉴定

为了明确硒在玉米蛋白中的赋存形式,采用高效液相色谱-质谱联用法(HPLC-MS/MS),结合质谱数据库比对以及高效液相色谱-等离子体质谱法(HPLC-ICP/MS),对富硒玉米蛋白水解物中硒肽及含硒氨基酸的结构进行鉴定。结果确定了5个小肽,其氨基酸序列分别为:SeMet-MeSeCys-Glu、Met-MeSeCys-Glu、MeSeCys-Glu-Asp、Ile-MeSeCys-Glu、γ-Glu-MeSeCys;确定了4种含硒氨基酸,分别为硒代蛋氨酸(SeMet)、硒代乙硫氨酸(SeEt)、L-硒-甲基硒代半胱氨酸(MeSeCys)、硒代胱氨酸(SeCys2)。借助于标样对含硒氨基酸和二肽进行定量,5个硒肽均含MeSeCys,其中只有一个肽段含SeCys2;但在含硒氨基酸中则是以SeMet含量最高为(586.3±49.5)ng/g,最低的是SeCys2为(102.6±9.0)ng/g。     

HPLC-ICP-MS法测定富硒小麦中硒的形态

建立高效液相色谱-电感耦合等离子体质谱联用(high performance liquid chromatography-inductively coupled plasma mass spectrometry,HPLC-ICP-MS)检测富硒小麦中4种硒形态分析方法。使用微波辅助酶萃取富硒小麦中亚硒酸盐(SeIV)、硒酸盐(SeVI)、硒代蛋氨酸(SeMet)和硒代胱氨酸(SeCys2),采用Hamilton PRP X-100色谱柱,以6 mmol/L柠檬酸为流动相,pH=5.0,在9 min内可完全分离4种硒形态。SeCys2、SeIV、SeMet、SeVI的检出限分别为0.23、0.15、0.30、0.16μg/L,线性相关系数(r2)均大于0.999。以富硒小麦为基体进行加标回收试验,SeCys2、SeIV、SeMet、SeVI的回收率在93.7%～105.2%之间,相对标准偏差为2.2%～6.6%(n=6)。方法简单快速,具有良好的精密度和准确度,适用于富硒小麦中硒形态分析。     

液相色谱——氢化物发生原子荧光光谱法测定富硒稻谷中硒的形态

建立了富硒稻谷中硒代胱氨酸(SeCys)、亚硒酸根(Se(IV))、硒代蛋氨酸(SeMet)、硒酸根(Se(VI))4种硒形态的高效液相色谱-氢化物发生原子荧光光谱分析方法。稻谷样品采用链霉蛋白酶E酶解提取,40 mmol/L磷酸氢二铵为流动相,经汉密尔顿阴离子交换柱分离后的溶液引入仪器进行氢化物发生-原子荧光光谱法测定。结果表明,4种硒形态标准曲线线性关系良好(R~2≥0.999 0),方法检出限为0.008 01-0.059 25 mg/kg,回收率为85.9-103.9%,RSD3%。本方法前处理简单,灵敏度高,能有效地分离并检测出稻谷中多种硒形态含量。     

高效液相色谱–电感耦合等离子体质谱联用测定稻米中5种硒形态（网络首发、推荐阅读）

利用高效液相色谱–电感耦合等离子体质谱联用技术建立了富硒大米中5种硒形态的检测方法。采用反向C18 色谱柱，对流动相离子对浓度、洗脱盐浓度、pH值进行了优化，最终确定流动相组成为15 mmol/L乙酸铵溶液，pH5.5和0.2 mmol/L四丁基氢氧化铵（TBAH），硒–甲基硒代半胱氨酸（SeMeCys）、硒代半胱氨酸（SeCys）、硒代蛋氨酸（SeMet）、四价硒Se(VI)和六价硒Se(IV)5种硒形态获得基线分离。大米样品用酶提法提取，通过对酶的种类、酶的用量及酶解时间等对提取效率的研究，确定样品与蛋白酶（protease）XIV酶量比为20∶1为最佳，且最佳酶解时间为20 h。结果表明本方法分离效率高，方法线性良好，灵敏度高，回收率为77.1%~107.3%，硒–甲基硒代半胱氨酸（SeMeCys）、硒代半胱氨酸（SeCys）、硒代蛋氨酸（SeMet）的检出限和定量限分别为0.0015mg/kg和0.005 mg/kg，四价硒Se(VI)和六价硒Se(IV)检出限和定量限分别为0.002 5 mg/kg和0.009 mg/kg。为全面评价富硒大米质量和后续开展富硒大米膳食暴露评估提供技术支撑。     

高效液相色谱-电感耦合等离子质谱法分析富硒茶叶中硒的形态

建立富硒茶叶中硒代胱氨酸（SeCys2）、甲基-硒代半胱氨酸（SeMC）、亚硒酸根（Se（IV））、硒代蛋氨酸（SeMet）、硒酸根（Se（VI））5?种硒化合物的高效液相色谱-电感耦合等离子体质谱的分离检测方法。方法利用Hamilton?PRP-X100色谱柱对富硒茶叶中5?种硒化合物进行分离,利用电感耦合等离子体质谱对硒元素进行检测,外标法定量测定5?种硒化合物的含量。研究采用蛋白酶K溶液为提取剂,超声提取60?min,以柠檬酸溶液为流动相,梯度洗脱,5?种硒化合物在15?min内得到了有效分离。5?种硒化合物标准曲线的线性相关系数不小于0.999?8,检出限为0.13～1.09?μg/L。该前处理方法样品加标回收率在91.8%～109.4%之间。方法操作简便、分离效果好、检出限低,适用于富硒茶叶中硒的形态分析。     

反相高效液相色谱法测定富硒脱水菜心中的硒代氨基酸

建立了柱前衍生反相高效液相色谱-紫外检测富硒脱水菜心中硒代胱氨酸(SeCys)、硒甲基半胱氨酸(SeMeCys)和硒代蛋氨酸(SeMet)的方法,优化了样品预处理方法,并评价其定量分析的线性、准确性、重复性和检出限,结果显示:以0.1mol/LHCl为提取溶剂,超声处理8h,提取效果最佳;3种硒代氨基酸的平均加标回收率为95.7%～112.9%;在各硒代氨基酸的线性范围内,线性关系良好(R>0.999);保留时间和峰面积重复性的相对标准偏差(RSD)均分别低于2.0%和5.0%;酸性条件下的检出限为0.004～0.009mg/L。     

高效液相色谱-电感耦合等离子体质谱联用法分析新疆巴旦木中硒形态

摘要：目的 建立高效液相色谱-电感耦合等离子体质谱联用法(high performance liquid chromatography combined with inductively coupled plasma mass spectrometry, HPLC-ICP-MS)测定新疆巴旦木(Amygdalus communis L.)中硒代蛋氨酸(selenomethionine, SeMet)和亚硒酸根[selenous acid, Se(IV)] 2种硒形态的分析方法。方法 研究采用超声波辅助酶提法提取巴旦木样品中硒形态, 选用Dionex IonPac AS19阴离子分析柱进行分离, pH值为9.2的磷酸二氢铵水溶液作为流动相, 进样量为100 μL。结果 实现了在500 s内2种硒形态基线分离, SeMet和Se(IV)的方法检出限均为0.006 mg/kg, 加标回收率为90%~106%。对巴旦木样品中SeMet和Se(IV)含量进行测定, 2种硒形态的含量分别为37和20 μg/kg。结论 所建立的方法易操作、分离效果好且检出限低, 可以作为一种分析巴旦木中2种硒形态的有效方法。     

亚硒酸钠和硒代蛋氨酸对人结肠腺癌细胞的毒性作用

探讨两种硒化物对人结肠腺癌Caco-2细胞的毒性作用。将Caco-2细胞暴露在不同浓度的亚硒酸钠(SeIV)和硒代蛋氨酸(SeMet)中培养24 h,用Annexin V-FITC/PI双染色法检测在同样浓度的SeIV和SeMet培养下细胞的凋亡率,并设置不做硒处理的空白对照。用MTT法检测细胞存活率;检测细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)释放率、细胞内的超氧化物歧化酶SOD活力和谷胱甘肽GSH的含量。相同浓度时(0.8μg Se/mL),与对照相比,SeIV诱导细胞凋亡显著率上升(p0.05),SeMet变化不显著。一定浓度的SeIV(≥0.4μg Se/mL)和SeMet(≥40μg Se/mL)与对照组相比均显著降低细胞的存活率(p0.05);随着Se含量的升高细胞的存活率呈下降趋势,SeIV、SeMet的IC_(50)分别为2.56、215.55μg Se/mL。当SeIV浓度为≥0.8μg Se/mL,SeMet浓度为≥40μg Se/mL时,细胞的LDH释放率均显著高于对照组(14.80%)(p0.05)。当SeIV浓度≥4μg Se/mL,SeMet≥4μg Se/mL时,细胞的SOD活性均显著低于对照组(56.76 U/mg prot)(p0.05)。当SeIV浓度≥4μg Se/mL,SeMet浓度为160μg Se/mL时,细胞的GSH含量均显著低于对照组(61.67μg/mg prot)(p0.05)。一定浓度的SeIV和SeMet会使Caco-2细胞产生氧化应激而导致细胞毒性,诱导细胞凋亡。     

外源硒处理的花生芽蛋白中五种硒形态分析

为了探究花生发芽后的富硒规律,本研究用不同浓度Na2SeO3浸泡花生子粒发芽5d后,分析外源硒对花生发芽情况的影响,并分别通过电感耦合等离子体质谱法（Inductively Coupled Plasma-Mass Spectrometry,ICP-MS）和高效液相色谱-电感耦合等离子体质谱联用（High Performance Liquid Chromatography-Inductively Coupled Plasma-Mass Spectrometry,HPLC-ICP-MS）分析花生芽不同部位（子叶、胚轴、胚根）的总硒含量和花生芽蛋白中5种硒形态（硒代胱氨酸SeCys2、硒代半胱氨酸MeSeCys、亚硒酸根SeIV、硒代蛋氨酸SeMet、硒酸根SeVI）的组成特征及变化规律。结果表明,随着Na2SeO3浸泡浓度的升高,花生芽长、芽粗和发芽率均呈降低的趋势;高浓度的外源硒抑制了花生发芽过程中硒元素由子叶向胚轴和胚根的转移;未经硒浸泡的花生发芽后,三个部位均检测到三种硒形态,其中SeCys2占比最高,随着硒浓度升高,各部位硒形态种类增加,无机硒（SeIV和SeVI）占比逐渐升高,SeCys2和MeSeCys占比逐渐降低,SeMet占比没有规律性变化,各部位有机硒总量占比降低,无机硒向有机硒转化率收到抑制。     

氮离子注入蛹虫草选育高效富硒菌株的研究

为了更好地开发蛹虫草资源,对蛹虫草菌株富集微量元素硒的培养条件进行了优化,选择最佳参数的低能离子束注入蛹虫草,通过石墨炉原子吸收光谱法检测注入前后菌丝体中硒元素的含量。结果表明：蛹虫草发酵富硒的最优培养条件为蛋白胨质量浓度3 g/100 mL、葡萄糖质量浓度3 g/100 mL、亚硒酸钠质量浓度为8 μg/mL、pH值为7,此时,富硒率为21.58%。离子束最佳注入参数为：注入离子为N+,注入能量10 keV,注入剂量1.82×1015 ions/cm2,选育出富集微量元素硒较高的10 株菌株,最高富硒率为30.97%,比出发菌株提高了近42%。     

海芦笋食品的富硒规律及其优化

选取海水蔬菜海芦笋作为研究对象,在海芦笋生长后期采用不同浓度、不同喷洒次数以及不同pH 值的亚硒酸钠溶液对其进行叶面喷洒处理,得出了喷洒浓度、喷洒次数以及亚硒酸钠溶液pH 值对硒吸收以及有机硒转化率的影响。采用响应面(RSM)优化试验方法,得出了海芦笋的最佳富硒方案：200mg/L,2 次,pH7.3。在此条件下,有机硒含量可达到1.29 μg/g,总硒含量为2.58 μg/g,有机硒转化率可以达到50%。     

富硒深层培养对灵芝生长代谢的影响

研究了硒对灵芝生长代谢的影响。考察了灵芝对硒的耐受浓度 ,硒对灵芝菌丝量、灵芝蛋白、灵芝多糖和矿物质代谢的影响 ,并探讨了硒对灵芝菌丝内部分酶代谢的影响。实验结果表明 :灵芝对硒的最大耐受浓度为 4 0 0 μg/ g,在硒浓度 4 0 0 μg/ g以内 ,硒对灵芝菌丝量、菌丝蛋白质及多糖的代谢没有明显的改变 ;除可明显增加矿物质锌的含量外 ,对铜、铁、锰和钙含量无影响 ;对菌丝内硒的富集作用是极其明显的 ,最高可达 70 0 0μg/ g左右 ;硒对灵芝酯酶同工酶、过氧化物酶同工酶没有结构上的影响 ,仅增加酶的活性。     

硒对常见蔬菜种子萌发的影响及在植株中的分布

分析不同质量浓度的Na2SeO3对蔬菜种子萌发的影响及硒在蔬菜不同器官中的分布,采用种子萌发实验和盆栽实验,应用氢化物发生-原子荧光法测定总硒,透析法分析有机硒。结果表明：随着Na2SeO3质量浓度的升高,蔬菜种子的发芽势、发芽率、简易活力指数、发芽指数均呈先上升后下降的趋势,但个体之间存在一定差异。绿豆在2.5 mg/L的处理液条件下各项活力指标达到最好,但随着Na2SeO3质量浓度升高,其各项指标开始下降。蔬菜植株中总硒含量随着浇灌液中Na2SeO3质量浓度的增加呈明显的上升趋势,在10.0 mg/L的高硒环境下对硒的富集能力为：上海青＞快菜＞茄子＞辣椒＞西红柿。茄子、辣椒、西红柿3 种蔬菜不同部位中硒含量分布存在显著差异,其中m（有机硒）≥1/2m（总硒）。实验结果可为筛选最适宜水培液中Na2SeO3质量浓度和选择适宜培育的富硒蔬菜种类,以及选择硒含量高的部位进食提供理论依据。     

极大螺旋藻的硒富集化培养研究

为得到大量含有机硒的极大螺旋藻(Spirulina maxima),以生物量和藻体内硒富集量作为指标,研究不同硒添加量和硒添加方式对极大螺旋藻生长及富硒效果的影响。结果表明,分8d等量(100μL)多次添加100μg/mL Na2SeO3溶液,是最佳添加量和添加方式,可得到生物量为0.903g/L,单位干藻粉有机硒含量为1413.168μg/g的富硒极大螺旋藻。     

Chemical characterisation and speciation of organic selenium in cultivated selenium-enriched Agaricus bisporus

The selenium concentration in Agaricus bisporus cultivated in growth compost irrigated with sodium selenite solution increased by 28- and 43-fold compared to the control mushroom irrigated solely with water. Selenium contents of mushroom proteins increased from 13.8 to 60.1 and 14.1 to 137 μg Se/g in caps and stalks from control and selenised mushrooms, respectively. Selenocystine (SeCys; detected as [SeCys]₂ dimer), selenomethionine (SeMet), and methyl-selenocysteine (MeSeCys) were separated, identified and quantified by liquid chromatography–electrospray ionisation-mass spectrometry from water solubilised and acetone precipitated proteins, and significant increases were observed for the selenised mushrooms. The maximum selenoamino acids concentration in caps and stalks of control/selenised mushrooms was 4.16/9.65 μg/g dried weight (DW) for SeCys, 0.08/0.58 μg/g DW for SeMet, and 0.031/0.10 μg/g DW for MeSeCys, respectively. The most notable result was the much higher levels of SeCys accumulated by A. bisporus compared to SeMet and MeSeCys, for both control and selenised A. bisporus.     

食品中硒元素形态分析的研究进展

硒是人体必需的微量元素,具有丰富的化学形态,分为无机硒和有机硒,不同硒形态对人体的生物活性不同。无机硒主要包括硒酸Se(Ⅵ)、亚硒酸Se(Ⅳ),有机硒主要包括硒蛋白、硒核酸和硒多糖等大分子硒,及硒代胱氨酸(selenocystine,SeCys2)、硒代蛋氨酸(selenomethinonine,SeMet)、甲基硒代半胱氨酸(methyl selenocysteine,MeSeCys)、硒代乙硫氨酸(selenoethionine,SeEt)等小分子硒化物。无机硒不易吸收,可能对人体造成危害,有机硒易吸收,适当摄取对人体有多方面益处。准确测定食品中不同硒形态及具体含量,对人体按需摄入硒元素具有重要指导意义。本文总结了近年来食品行业中硒形态检测研究涉及的领域,包括果蔬、水产、药食同源的中药、茶叶、谷物等方面的研究,常用的提取、分离、分析技术,重点介绍了高效液相色谱-电感耦合等离子体质谱联用技术和液相色谱-氢化物发生-原子荧光光谱联用技术在不同食品中检测硒形态的应用情况,并展望了未来硒形态分析的前景。     

硒在香菇体内的生物转化及硒蛋白的生物活性

采用香菇深层发酵对无机元素硒进行富集和转化 ,获得了硒含量为 2 2 5 μg/g的香菇菌丝体。硒参与蛋白质、多糖等大分子物质的合成 ,被转化为有机硒 ,有机化程度为 72 9% ,其中 68 2 %以硒蛋白的形式存在。硒对氨基酸和蛋白质的合成具有促进作用 ,其含量分别比对照提高 15 96%和 18 3 %。与无机硒相比 ,硒蛋白吸收利用率高 ,生物活性强 ,饲喂硒蛋白的大鼠体内硒水平和GSH Px活性明显较高。将硒蛋白提取出来 ,取代亚硒酸钠等无机硒作为补硒功能性食品或药品的基料 ,具有广阔的开发前景