毛霉蛋白酶特性研究

研究了翻曲、不同的培养时间及NaCl对分离得到的毛霉的蛋白酶活力的影响，探讨了不同的毛霉蛋白酶提取方法，并对比了福林酚法测定蛋白酶活力时的最佳吸收波长。结果表明：该株毛霉麸曲固态培养72h时蛋白酶活力最高；培养24h后翻曲1次能显著提高酶活力；用盐水麸曲制曲培养时，用蒸馏水提取可获得较高活力的复合蛋白酶；测定蛋白酶活力时，最佳吸收波长为690nm。     

地衣芽孢杆菌在麸曲中产中性蛋白酶发酵工艺条件的研究

对地衣芽孢杆菌在细菌麸曲培养过程中的最佳培养基和最佳培养条件进行了研究。结果表明,地衣芽孢杆菌麸曲产中性蛋白酶的最佳培养基为:玉米粉8g/L,黄豆粉2g/L,麸皮10g/L;最佳培养条件为:温度40℃,pH7.0,接种量10%,培养60h时,产中性蛋白酶活力达到最大,为192U/mL。     

雅致放射毛霉蛋白酶

借助超声波、电泳和高压液相色谱技术对雅致放射毛霉胞外和胞内蛋白酶进行了研究．结果表明：腐乳前期培菌时，雅致放射毛霉同时分泌胞外及胞内蛋白酶，两者酶活力变化趋势基本相同，在培菌45h时，达到最大酶活力；胞外和胞内蛋白酶均为蛋白酶系，相对分子质量组成相同；以大豆蛋白为底物时，主要水解产物相同．     

毛霉蛋白酶特性研究及在大豆肽生产中的应用

通过对毛霉蛋白酶活力的测定研究了毛霉蛋白酶的特性。研究表明,毛霉在培养的第5d～6d为旺盛期,毛霉蛋白酶的最适反应pH值为4.0～6.0,且在pH4.0～6.0时稳定性较好;毛霉蛋白酶的最适反应温度为45℃～55℃,50℃时酶活力最大,且在40℃以下热稳定性较好。1.0%NaCl、1.0%CaCl2、1.0%MnSO4和1.0%MgSO4对蛋白酶有激活作用,1.0%KCl、1.0%ZnSO4和1.0%CuSO4则对蛋白酶有不同程度的抑制作用。用毛霉所产的蛋白酶对大豆分离蛋白进行水解所得的大豆肽具有较好的质量品质。     

腐乳毛霉SH12生长性能及产酶特性研究

研究了腐乳毛霉SH12的生长性能及产酶特性。结果表明:在温度26℃、pH为7.5时,生长速率最大。Ca~(2+),Mg~(2+)浓度低于0.2%时,对毛霉的生长几乎没有影响。在36h时,毛霉菌丝体干重达到较大值。产酸性蛋白酶、中性蛋白酶、碱性蛋白酶、糖化酶、脂肪酶活力分别为67.3,339.4,372.3,293.1U/g,0.67U/mL,以蛋白酶为主。在豆腐培养基上中性蛋白酶和碱性蛋白酶活力在48h达到最大,而酸性蛋白酶活力在60h达到最大。研究结果可为毛霉SH12用于腐乳生产提供理论依据。     

毛霉蛋白酶特性研究及在大豆肽生产中的应用

通过对毛霉蛋白酶活力的测定研究了毛霉蛋白酶的特性.研究表明,毛霉在培养的第5d～6d为旺盛期,毛霉蛋白酶的最适反应DH值为4.0～6.0,且在pH4.0～6.0时稳定性较好;毛霉蛋白酶的最适反应温度为45%～55℃,50%时酶活力最大,且在40%以下热稳定性较好.1.0%NaC1、1.0%CaCl<,2>、1.0%MnSO<,4>～和1.0%MgSO<,4>对蛋白酶有激活作用,1.0%KC1、1.0%ZnSO<,4>和1.0%CuSO<,4>则对蛋白酶有不同程度的抑制作用.用毛霉所产的蛋白酶对大豆分离蛋白进行水解所得的大豆肽具有较好的质量品质.     

鲁曲-1制曲条件的优化

对影响鲁曲-1成曲中性蛋白酶活力的因素进行了优化,根据正交实验确定成曲的制备条件为N/C比值1∶1,湿豆粕含水量56%,培养时间48h和翻曲时间14h。     

酱油生产中高产蛋白酶菌株米曲霉UF366发酵条件的研究

对高产蛋白酶菌株UF366米曲霉的种子培养基、制曲培养基以及发酵条件进行研究。结果表明：最适的种子培养基为麸皮、面粉和水,其比例为4：1：4,产生的孢子数最多,达到了167亿个／g;最适的制曲培养基为豆粕、麸皮、水,其比例为6：4：5：最佳发酵条件为培养温度33℃、培养时间32h、翻曲2次、接种量4‰,蛋白酶活力达到了1084U／g。     

毛霉3039产蛋白酶特性研究

通过对毛霉蛋白酶活力的测定初步研究了毛霉蛋白酶的特性.研究表明,毛霉分泌蛋白酶的旺盛期在培养的第5至6天.毛霉蛋白酶的最适反应pH在4.0～6.0之间,且在pH4.0～6.0之间稳定性较好;毛霉蛋白酶的最适反应温度为45℃～55℃,50℃时酶活力最大,且在40℃以下热稳定性较好.1.0%NaCl、1.0%CaCl2、1.0%MnSO4和1.0%Mg2SO4对蛋白酶有激活作用,1.0%KCl、1.0%ZnSO4扣1.0%CuSO4则对蛋白有不同程度的抑制作用.     

黄曲霉液-固两步法生产麸曲的初探

在黄酒生产中发现黄曲霉菌丝比孢子具有更大的活力，菌丝制曲优于孢子制曲。黄曲霉在液体深层培养时，生长的均为菌丝体。采用液一固两步法生产麸曲可大大缩短制曲时间(由10d缩短至4d)，糖化力有所提高，感官指标较优，提高了麸曲质量。     

自然发霉条件下腐乳醅中优势微生物的分离与初步鉴定

对自然发酵腐乳醅中的优势微生物进行分离和初步鉴定,测定其最适生长温度及蛋白酶种类。结果表明:腐乳醅中优势微生物为毛霉M1和毛霉M5,毛霉M1经鉴定为总状毛霉,毛霉M5为鲁氏毛霉。毛霉M1以麦麸曲为培养基,在25℃下培养时间为72h,其产碱性蛋白酶能力达到2808.765u/g干基、产中性蛋白酶能力2453.314u/g干基,产酸性蛋白酶能力较弱为383.330u/g干基。     

CHARACTERIZATION OF A SALT-TOLERANT ACID PROTEASE PRODUCED BY BACILLUS MEGATERIUM KLP-98 AND ITS POTENTIAL AS A FERMENTATION STARTER FOR THE MANUFACTURE OF FISH SAUCE

A salt-tolerant acid protease was purified from the culture broth of Bacillus megaterium KLP-98 with a molecular weight of 64 kDa. K _m and k _cat values of the protease were 2.1 mg/mL and 6.1 s⁻¹ against azocasein as a substrate, respectively. The optimal temperature for protease activity was 60C but optimal stability temperature was below 40C. The optimal pH for protease activity was 5.5, and it was stable from pH 4.5 to 6.0. Relative activity of the protease was 73, 33, and 5% at 10, 20, and 30% NaCl concentrations, respectively. Among all the substrates tested, the best substrate for B. megaterium KLP-98 was azocasein followed by Z-Phe-Arg-NMec. The protease activity was strongly inhibited by N-ethylmaleimide and E-64. This protease was therefore presumed to be a salt-tolerant acid cysteine protease. The purified protease was applied to accelerate the fermentation of anchovy sauce, and the results indicated its potential as a fermentation starter.

PRACTICAL APPLICATIONS

The B. megaterium KLP-98 protease accelerated the fermentation of anchovy sauce and greatly improved its quality only during 2 days of fermentation, thus will decrease its production cost. Hence, fish or soy sauce industries can benefit from this protease as a fermentation accelerant.     

利用根霉发酵制作腊八豆的研究

对毛霉和根霉最适温度及产蛋白酶、淀粉酶情况进行了研究，同时对毛霉、根霉作为发酵剂对腊八豆制作从发酵到成品的总酸、氨基酸态氯及游离氨基酸的含量变化进行了探讨。结果表明：根霉、毛霉发酵腊八豆的氨基酸态氮及游离氨基酸含量都很接近，而且根霉可以在高温下发酵，因此利用根霉代替毛霉发酵制作腊八豆，不受季节的限制，还能改善腊八豆的风味，提高了劳动生产率及设备利用率。     

金橙黄微小杆菌产碱性蛋白酶培养基组成及发酵条件优化

采用单因素实验和正交实验的方法,对金橙黄微小杆菌产碱性蛋白酶条件进行优化。结果表明,最佳发酵培养基组成成分为酵母膏10g/L、玉米粉15g/L、NaCl15g/L,摇瓶培养最佳条件为初始pH8.8,培养时间28h,温度25℃,接种量6%条件下,在此条件下酶活性达到37.793U/mL。金橙黄微小杆菌对生长条件要求不高、容易培养,碱性蛋白酶产量较高,表现出了潜在的工业开发价值。     

总状毛霉紫外诱变及发酵提取壳聚糖初探

为了提高壳聚糖产量,通过对紫外诱变处理总状毛霉及发酵条件的研究,初步确定了不同发酵培养条件对总状毛霉产壳聚糖的影响,结果表明:发酵液培养基的蔗糖为50 g/L、酵母膏为2.0 g/L、硝酸钠为3.5 g/L、磷酸氢二钾为1.0 g/L、硫酸镁为0.2 g/L和硫酸铁为0.2 g/L,发酵温度控制在30℃,培养时间为48 h,壳聚糖产量为1.12 g/L。     

米曲霉Y6产中性蛋白酶和内切葡聚糖酶的研究

以提高中性蛋白酶和内切葡聚糖酶酶活为目的,优化了米曲霉Y6的制曲工艺。在单因素的试验基础上,采用正交试验优化的米曲霉Y6中性蛋白酶的最佳制曲工艺参数为温度30℃,接种量1.0×107个孢子/g干基,培养时间42h,含水量80%,其酶活达到3637U/g;内切葡聚糖酶的最佳制曲工艺参数为温度为30℃,接种量0.25×107个孢子/g干基,培养时间48h,含水量100%,其酶活达到810U/g。     

高产中/碱性蛋白酶的枯草芽孢杆菌W1菌株的筛选及条件优化

为了筛选高产蛋白酶活性细菌,以大豆及其发酵制品为目标样品,采用酪蛋白平皿筛选到一株既可产中性蛋白酶又可产碱性蛋白酶的细菌菌株W1,经形态学及16S rDNA基因序列分析鉴定为枯草芽孢杆菌枯草亚种(Bacillus subtilis subsp. Subtilis),其产中性蛋白酶和碱性蛋白酶活力分别为28.99 U/mL和33.19 U/mL。通过单因素试验对其产蛋白酶的培养条件进行初步优化,并在此基础上以总蛋白酶活力为指标对其产蛋白酶条件进一步进行正交试验优化,最佳条件为培养基初始pH 9.0,接种量4%,培养温度35℃,培养时间48 h,此条件下中性蛋白酶活力为40.39 U/mL,碱性蛋白酶活力为52.02 U/mL,总蛋白酶活力为92.41 U/mL,优化后相应酶活力分别提高了39.3%、56.7%和48.6%,这将为枯草芽孢杆菌W1菌株蛋白酶的酶学性质研究提供帮助,同时也是对蛋白酶活性枯草芽孢杆菌资源库的丰富。     

产酶培养条件对一株嗜酸乳杆菌亚油酸异构酶活力的影响

本实验用MRS培养基嗜酸乳杆菌,并通过添加亚油酸(LA)诱导其产亚油酸异构酶。单因素试验结果表明,在MRS培养基中添加糖类物质总体上不利于产酶,添加尿素、牛肉膏、酵母膏、酪蛋白等有机氮源后,酶活力比对照组有较大幅度提高,而添加无机氮源酶活力增加幅度不如有机氮源。在培养基中添加一定量的NaCl和卵磷脂也有助于酶活力的提高。由正交试验结果确定的最佳产酶条件为:培养温度37℃,培养时间24h,每100ml培养基中添加10mgLA,接种量3%(V/V)。     

Serratia sp. SYBC H发酵浮萍生产蛋白酶的研究

以富含蛋白质的浮萍作为有机氮源,接种一株通过自然筛选而得的新颖菌株Serratia sp.SYBC H,进行微生物发酵生产稀有的蛋白酶,为浮萍的高值化利用开创一条新途径。先采用单因素实验,研究影响Serratia sp.SYBC H发酵浮萍生产蛋白酶的发酵时间,碳源,C/N比,无机盐,产酶添加剂,结果发现:以小麦粉为碳源,小麦粉与浮萍比例为1:2,Na Cl,表面活性剂吐温80,显著促进Serratia sp.SYBC H生产蛋白酶。接着采用正交试验,研究影响Serratia sp.SYBC H生产蛋白酶的发酵培养基的主要组成及其使用量。结果显示,在实验范围内,影响Serratia sp.SYBC H生产蛋白酶的发酵培养基组成及其最佳使用量为小麦粉15 g/L,浮萍30 g/L,吐温80,0.8%(V/V),Na Cl 0.05 mol/L。接种发酵18 h后,蛋白酶的生产值达到最大值,发酵液中最高蛋白酶活达到1459.94U/mL。