新疆零售牛肉中沙门菌毒力基因的检测

目的了解新疆库尔勒市零售牛肉沙门菌污染状况和沙门菌分离株毒力基因携带状况。方法参考食品安全国家标准GB 4789.4-2016的方法,采用培养基培养和沙门菌生化鉴定试剂盒对零售牛肉中的沙门菌进行分离鉴定,并对沙门菌分离株10种毒力基因(inv A、hil A、ssa Q、mgt C、sii D、sop B、spv B、spv C、spv D、spv R)进行PCR检测。结果 317份牛肉样品共检出沙门菌阳性样品28份,分离鉴定到阳性沙门菌28株,污染率为8.8%(28/317);除ssa Q、spv C毒力基因外,其余8种毒力基因均有检出。毒力基因inv A和spv R具有高度的稳定性,携带率均为100%(28/28);毒力基因sii D、spv B和spv D的携带率也较高,分别达78.6%(22/28)、75.0%(21/28)和75.0%(21/28)。结论新疆库尔勒市零售牛肉沙门菌污染较为严重,应采取措施加强对新疆库尔勒市牛肉生产各环节的防控与食品卫生监督。     

市售鲜鸡蛋中沙门氏菌的分离鉴定及毒力岛基因检测

目的:监测市售鲜鸡蛋中沙门氏菌的污染情况,检测分离菌株的致病性及其毒力岛基因携带情况,了解沙门氏菌分离株毒力岛基因的携带与其致病力的相关性。方法:从陕西省不同地市的超市中随机购买鲜鸡蛋,无菌取其蛋壳膜分离沙门氏菌,聚合酶链式反应方法扩增沙门氏菌菌属特异性invA基因鉴定分离株;对分离菌株进行无特定病原体(SPF)雏鸡的致病性试验,依据GenBank发表的基因序列,设计引物聚合酶链式反应检测沙门氏菌毒力岛(SPI)核心蛋白基因。结果:从陕西省55家超市1100枚鲜蛋中分离鉴定出30株沙门氏菌,分离率达2.73%;动物致病性实验表明,30株沙门氏菌中13株有致病力,其中强致病力菌株有7株,占23.3%;分离菌株的毒力岛基因携带率分别为:SPI-1 60%、SPI-2 73.3%、SPI-3 100%、SPI-4 90%、SPI-5 76.7%,毒力岛基因SPI-1+SPI-2的携带与细菌致病性有关。结论:市售鲜鸡蛋中沙门氏菌携带率为2.73%,分离菌株对动物具有一定的致病力,毒力岛基因SPI-1+SPI-2的携带与沙门氏菌的致病性呈正相关。     

温州市单核细胞增生李斯特菌的毒力基因及血清学分型和分子分型研究

目的了解温州市近十年单核细胞增生李斯特菌分离株的血清型、毒力基因及分子分型特征。方法用聚合酶链式反应(PCR)方法对单核细胞增生李斯特菌进行血清型及毒力基因检测;用多位点序列分型(MLST)方法对单核细胞增生李斯特菌进行分子分型,并绘制MLST数据的最小生成树。结果 97株单核细胞增生李斯特菌分离株分为4种血清型,以血清型1/2b、1/2a为优势血清型,占比分别为48.45%(47/97)、35.05%(34/97);而毒力基因iap、prfA基因阳性率均为100.00%(97/97),hlyA、inlA基因阳性率均为97.94%(95/97),plcB基因阳性率为96.91%(94/97)。其中患者分离株5种毒力基因阳性率均为100.00%(6/6)。97株单核细胞增生李斯特菌分离株得到20个MLST型别,其中ST87型是优势型别,其次为ST121和ST9,ST1和ST779型是患者特有的,ST2、ST3、ST5型分布于食品和患者分离株。结论温州市不同来源的单核细胞增生李斯特菌分离株分子型别呈多态性,食品和患者分离株存在相同的ST型,且这些菌株大部分携带毒力基因,具有潜在的致病性,因此食品中单核细胞增生李斯特菌污染的潜在风险不容忽视。     

宁波地区沙门氏菌耐药性监测及毒力基因筛查

目前宁波地区沙门氏菌对常用抗生素的耐受情况及主要毒力基因携带率的系统检测尚未见报道。本研究选取2006—2013年间宁波地区分离获得的121株沙门氏菌(共27个血清型),对其进行耐药谱检测,相关耐药基因及毒力基因筛查。结果显示:对12种常见抗生素的耐药率依次是:氨苄西林19.8%,四环素13.2%,强力霉素12.4%,复方新诺明11.6%,氯霉素8.7%,链霉素6.6%,妥布霉素3.3%,头孢曲松2.5%,环丙沙星0.8%,诺氟沙星0%,庆大霉素0%,阿米卡星0%。耐药基因携带率:blaTEM100%,blaPSE29.2%,blaCMY-24.2%,blaCTX8.3%,blaSHV0%,tet A 100%,tet B 100%,tet G 70.8%,tet C 20.8%,sul I 100%,sul II 100%,sul III 80%。毒力基因avr A、ssa Q、gip A、sod C1、mgt C的携带率均达100%,sop E 96.9%,ssi D 93.8%,spo B 93.8%,spv C 21.9%。上述结果表明:宁波地区沙门氏菌耐药情况比较严重,耐药基因与毒力基因携带率较高。本研究为宁波地区沙门氏菌疫情的防控提供数据支持。     

不同来源肠炎沙门菌毒力基因特征分析

目的研究石家庄地区不同来源的肠炎沙门菌毒力基因携带情况的差异及特点。方法收集石家庄地区早市生禽销售点、生禽屠宰场及食物中毒标本中分离出的肠炎沙门菌124株,对其中8种毒力基因(invA、sopE、agfA、spvR、hilA、stn、pefA、shdA)进行聚合酶链式反应(PCR)检测。结果肠炎沙门菌具有不同的毒力基因谱型,8种毒力基因在不同来源的肠炎沙门菌中均有检出,其中毒力基因invA、sopE、stn、hilA、spvR、pefA在食物中毒分离株中的携带率高,均在94%以上。食物中毒分离株与早市生禽销售点分离株的8种毒力基因携带率差异无统计学意义(P0.05),而生禽屠宰场分离株与食物中毒和早市生禽销售点分离株之间差异有统计学意义(P0.05)。结论石家庄地区早市生禽销售点检出的肠炎沙门菌中易致病的高风险株较多,应加强对生禽的卫生监督与防控。     

食源性沙门氏菌分离株致病性研究和毒力相关基因检测

为研究零售鲜肉源沙门氏菌（Salmonella）优势血清型分离株的致病性及相关毒力基因的相关性,本研 究分别取4 种优势血清型S. derby、S. agona、S. enteritidis、S. typhimurium沙门氏菌分离株对SPF级昆明小鼠进行致 病性实验,采用改良寇氏法计算半数致死量,判断4 种血清型沙门氏菌的毒力,并通过聚合酶链式反应检测实验 菌株中9 种毒力相关基因的分布情况并分析其相关性。结果表明,4 种不同血清型的沙门氏菌分离株对小鼠均有 40%～70%的致死率,S. enteritidis、S. agona、S. derby对昆明小鼠的致病力相似,S. typhimurium较弱,且发现致病 力的强弱与毒力岛SPI-2中的sseL基因密切相关。     

牛奶源金黄色葡萄球菌血清型、毒力基因及PFGE分型

目的：研究生鲜牛奶中金黄色葡萄球菌分离、荚膜多糖血清型分布、毒力基因携带及脉冲场凝胶电泳（pulsed field gel electrophoresis,PFGE）分型情况。方法：从河南省4?个地区奶牛养殖场采集生鲜牛奶样品按照国标法进行分离,扩增耐热核酸酶基因nuc鉴定金黄色葡萄球菌,利用聚合酶链式反应方法测定荚膜多糖血清型和毒力基因携带情况,采用PFGE分析菌株间的相关性和遗传关系。结果：从350?份生鲜牛奶样品中分离鉴定到80?株金黄色葡萄球菌,分离率为22.86%。荚膜多糖血清型测定发现,cap5（60%）是流行血清型。从这些阳性菌株中,发现有62?株（77.5%）携带有毒力基因,毒力基因set、hlb、hld、lukED、ebp、clfA和clfB,检出率分别为40.00%、51.25%、57.50%、60.00%、58.75%、57.50%和58.75%。此外,47?株（58.75%）菌携带不少于6?个毒力基因,流行的毒力基因谱型为set-hla-hlb-hld-lukED-cna-ebp-clfA-clfB。PFGE结果显示,获得72?株菌的PFGE图谱,按90%的相似性可分为12?个簇和46?种PFGE型。D簇（3?种PFGE型）、G簇（3?种PFGE型）和J簇（5?种PFGE型）菌株中均检出一定基因类型的毒力基因,表明河南地区生鲜牛奶中金黄色葡萄球菌毒力基因广泛存在于多种PFGE型别中。结论：生鲜牛奶均有一定程度的金黄色葡萄球菌污染,多数菌株携带毒力基因,且毒力基因的类型较为复杂,这对消费这些牛奶的人群构成潜在的健康威胁。PFGE分型菌株主要以克隆形式进行传播,且克隆型具有多样性和差异性,故临床应加强生奶及乳品血清型、毒力基因检测及分子分型研究。     

2018年广州市水产品中创伤弧菌和河弧菌检测分析

目的 了解为期一年的监测中广州市水产品创伤弧菌和河弧菌污染水平、菌株携带毒力基因和分子分型情况。方法 对广州市水产品中创伤弧菌和河弧菌进行分离鉴定,毒力基因鉴定和肠道细菌基因间重复序列聚合酶链式反应(Eric-PCR)。结果 创伤弧菌阳性率为10.4%(31/298),河弧菌为5.0%(15/298)；用PCR法检测创伤弧菌毒力溶血素基因vvhA全部阳性,vcgC/E和16S rRNA A/B分型结果显示,共有CB型、EA型和CA型3种基因型别。河弧菌毒力相关基因vfh、toxR全部阳性,hupO携带率为60.0%(9/15)、vfp携带率为80.0%(12/15)；Eric-PCR扩增出8～14条100～2 000 bp之间的条带,将15株河弧菌在相似系数为0.8处分为5个群11个类型。结论 广州市水产品中创伤弧菌和河弧菌污染情况较严重,大部分菌株携带毒力基因,Eric-PCR结果显示15株河弧菌在亲缘关系上具有相关性,应加强防控。     

食源性沙门菌毒力岛基因分布及特征研究

目的研究食源性沙门菌毒力岛的分布特征及其与食物中毒的关系。方法收集市售食品、市售生鸡肉、食物中毒标本沙门菌分离株,进行血清学分型,并应用聚合酶链式反应方法检测沙门菌毒力岛(Salmonella pathogenicity island,SPI)基因SPI1~SPI5,进行统计学分析。结果 152株沙门菌菌株中,检出16种血清型,以肠炎沙门菌为优势血清型,不同来源的该血清型菌株的毒力岛谱型有差异。SPI1在食物中毒菌株中检出率最高,市售生鸡肉SPI1的携带率高于市售食品。结论沙门菌的毒力岛谱型分布与菌株的不同来源相关,其中SPI1与沙门菌食物中毒呈正相关,市售生鸡肉有引起沙门菌食物中毒的潜在风险。     

沙门氏菌血清型快速PCR鉴定方法的建立

通过传统玻片凝集试验对78株沙门氏菌进行血清型检测,结果将这些沙门氏菌分成以鼠伤寒沙门氏菌和肠炎沙门氏菌为主的21种血清型,其中沙门氏菌SJTUF10023证实为自凝菌,无法鉴定血清型。利用MLST可以较精确地预测、区分不同血清型菌株,聚类的各个分支与血清型基本呈对应关系(96.2%,75/78),其中有3株沙门氏菌(1株阿贡纳、1株阿伯丁和1株斯坦利)聚类结果与血清型不一致。根据O抗原(rfb基因簇)、H1抗原(fli C基因)和H_2抗原(flj B基因)分别设计引物进行PCR反应,并与测序相结合,对78株沙门氏菌进行血清型测定,结果仅1株伤寒沙门氏菌的H_2抗原出现假阳性结果,准确度达98.7%(77/78),且编号为SJTUF10023的自凝菌被鉴定为鼠伤寒沙门氏菌,说明该方法能够准确、快速检测沙门氏菌血清型,有望在沙门氏菌血清型鉴定中成为替代传统血清分型的方法。     

肉鸡屠宰场多重耐药沙门氏菌Ⅰ类整合子与磺胺类耐药基因（sul1、sul2和sul3）的检测

目的：了解肉鸡屠宰场多重耐药沙门氏菌Ⅰ类整合子及磺胺类耐药基因携带情况。方法：采用纸片扩散法对肉鸡屠宰场84 株沙门氏菌分离株进行10 种抗生素敏感性实验;应用聚合酶链式反应（polymerase chain reaction,PCR）方法检测多重耐药沙门氏菌sul1、sul2、sul3和int1基因。结果：84 株沙门氏菌对氨苄西林和萘啶酸耐药率高达100%,对环丙沙星、四环素、甲氧苄啶/磺胺甲噁唑、大观霉素、氟苯尼考、庆大霉素耐药率分别为39.29%、35.71%、35.71%、35.71%、22.62%、14.29%。38 株沙门氏菌对3 种及以上抗生素耐药,属于多重耐药菌株。38 株多重耐药菌株中,有20 株携带Ⅰ类整合子。30 株对甲氧苄啶/磺胺甲噁唑耐药的菌株中,均能检测到sul1或sul2或sul3基因,与表型耐药100%符合,其检出率分别为40%、100%、63.3%。结论：肉鸡屠宰场中沙门氏菌耐药现象已不容乐观,沙门氏菌多重耐药性与Ⅰ类整合子的携带之间关系密切,且Ⅰ类整合子在磺胺类耐药菌株的产生中起到重要作用。     

Expression profiles of effector proteins SopB, SopD1, SopE1, and AvrA differ with systemic, enteric, and epidemic strains of Salmonella enterica

The presence and expression of sopB, sopD1, sopE1, and avrA genes encoding virulence associated effector proteins were studied comparatively in 405 Salmonella enterica strains. They belong to different serovars and clonal types (genotypes, phage types) and originated from different clinical (systemic infection, focal enteritis, enterocolitis) and epidemic sources (epidemics, sporadic cases). The sopB and sopD1 determinants were commonly prevalent, but sopE1 and avrA genes only in 55% and 80%, respectively. A correlation of this pattern of absence and presence of the respective genes to the epidemic and clinical origin could not be detected. In contrast, the expression of the respective genes appeared differently: SopB and SopE1 proteins are well produced, but SopD1 and AvrA proteins only rarely under the applied standard culture conditions. However, using a range of different environmental signals (temperature, pH, cations, etc.) some of the S. enterica nonproducer strains (e. g., S. Agona, S. Bovismorbificans, S. Virchow, etc.) begin to produce AvrA and SopD1. They turned now into an expression profile which was found typically for the epidemic strains of S. Typhimurium and S. Enteritidis. Also S. enterica strains from systemic infections could be characterized by their strong SopB and SopE1 expression while SopD1 and AvrA proteins were missing. Although it is premature to outline generally a correlation of these expression profiles and the clinical and epidemiological potency of Salmonellae, the reported results allow a first understanding how a fine tuning of their virulence will take place.     

肉鸡生产链中肠炎沙门氏菌耐药性分析及ERIC-PCR分型

目的：了解肉鸡生产链中肠炎沙门氏菌耐药性情况以及各生产环节菌株间亲缘关系,为临床用药及菌株追踪溯源提供依据。方法：采用微量肉汤稀释法对171 株肠炎沙门氏菌进行13 种抗菌药物药敏实验;采用肠杆菌基因间重复共有序列-聚合酶链式反应（enterobacterial repetitive intergenic consensus-polymerase chain reaction,ERIC-PCR）法对33 株不同生产环节耐药菌株进行分子分型;采用SPSS 20.0软件、Gel-Pro Analyer 4.0和NTSYS pc 2.1软件进行分析。结果：171 株肠炎沙门氏菌对13 种药物耐药情况不同,其中对氨苄西林耐药情况最严重,耐药率高达90.06%,对恩诺沙星、氧氟沙星最为敏感,耐药率均仅为5.26%;不同环节间耐药性差异极显著（P＜0.01）;多重耐药率高达95.32%,共有26 种耐药谱型。不同环节的33 株肠炎沙门氏菌分为4 种（Ⅰ～Ⅳ）基因型,遗传相似性在66%～100%,Ⅰ型为优势基因型;基因型相同的菌株耐药谱不一定相同,反之,耐药谱相同的菌株基因型不一定相同。结论：肉鸡生产链条中沙门氏菌对多种抗菌药物产生耐药性,且耐药谱种类繁多;沙门氏菌能够沿着生产链进行水平传播,肉鸡场环节菌株基因型相对复杂,菌株基因型与耐药表型之间无明显相关性。     

Serological characterization and prevalence of spvR genes in Salmonella isolated from foods involved in outbreaks in Brazil

Salmonella strains (n = 75) isolated from foods involved in foodborne outbreaks occurred in Rio Grande do Sul State, Brazil, during 1999 and 2000 were studied. Strains were serotyped and submitted to PCR analysis to verify the prevalence of Salmonella plasmid virulence (spvR) regulatory gene. Among the 75 isolates, 73 (97%) were classified as Salmonella enterica serovar Enteritidis. All of the Salmonella strains isolated in 1999 were classified as serotype Enteritidis, whereas in 2000 two isolates were serotyped as Salmonella Derby and Salmonella Typhimurium. Regarding the prevalence of spvR gene, 62 strains (82.7%) were PCR positive, and a positive correlation (P < 0.05) between the strains of Salmonella Enteritidis and the presence of spvR gene was demonstrated, which suggests that this gene is a characteristic of the Salmonella Enteritidis analyzed.     

Salmonella hadar对喹诺酮类药物耐药性及其耐药基因分析

目的：研究新疆乌鲁木齐市部分农贸市场内检出的21 株Salmonella hadar对2 种喹诺酮类抗生素的药敏性及相关耐药基因,更好地了解耐药性的产生和传播途径,确保食品安全。方法：用琼脂稀释法测定Salmonella hadar的药敏性,用聚合酶链式反应和测定基因序列的方法确定耐药沙门氏菌中与喹诺酮类抗生素耐药性相关的喹诺酮类抗性决定区突变基因以及质粒携带的耐药基因。结果：21 株Salmonella hadar对萘啶酮酸的耐药率达100%,对环丙沙星表现为敏感;qnrB、qnrA、qnrS基因的检出率分别为52.30%、4.76%、4.76%;21 株Salmonella hadar均为gyrA和parC基因同时突变,gyrA基因的突变类型是Ser83Phe,parC基因的突变类型是Thr57Ser。结论：新疆乌鲁木齐Salmonella hadar对喹诺酮类药物的耐药状况应当予以关注,其耐药决定区突变基因及质粒携带的耐药基因在一定程度上会影响Salmonella hadar的耐药机制。     

食源性沙门氏菌耐药表型与耐药基因的研究

为了解食源性沙门氏菌（Salmonella）的耐药状况以及耐药基因与耐药表型的关系,从基因水平上探究Salmonella的耐药机制。本研究对215 株分离自1 093 份市售新鲜肉类中的Salmonella进行了耐药状况检测,设计了16 种引物对耐药基因进行聚合酶链式反应（polymerase chain reaction,PCR）扩增,并对扩增产物进行克隆测序。结果显示,分离株对磺胺异恶唑耐药率最高（71.7%）,其次为四环素（69.8%）、甲氧嘧啶（67.9%）和复方新诺明（52.8%）,分离株对环丙沙星、呋喃妥因和头孢类比较敏感。三重及以上耐药的菌株占60.5%,最多可以耐受13 种抗生素;PCR共扩增到10 种耐药基因,测序结果表明扩增到的序列与GenBank上相应参考序列的相似性均在99%以上;β-酰胺类以及四环素类的耐药基因检出情况与耐药表型具有很高的一致性,符合率均在90%以上,其次为磺胺类（81.6%）。说明本研究中的食源性Salmonella分离株的耐药率高,多重耐药情况较为严重,耐药表型与耐药基因检测结果基本一致。     

武汉肉类食品中大肠杆菌O157∶H7分离株stx亚型和毒力特征分析

从22 家市场销售的117 份肉类食品中分离出4 株大肠杆菌O157∶H7菌株,经PCR检测这4 株菌的stx、hly、 eae毒力基因均为阳性。采用聚合酶链式反应（polymerase chain reaction,PCR）法对这4 株菌的stx亚型进行鉴定。 3 株菌同时携带stx1、stx2基因,且均为stx1a、stx2a亚型。菌株EC5.11仅携带stx2基因,但在所有的stx2分型PCR反 应中都为阴性。用PCR扩增该菌株stx2基因全长并克隆测序,序列分析结果表明EC5.11志贺毒素基因为stx2c亚型。 采用Vero细胞毒性实验检测这4 株菌产志贺毒素的状况,结果显示这些菌株都具有一定的Vero细胞毒性。