HPLC-UV法检测微生物降解体系中西维因含量

采用高效液相色谱-紫外检测(HPLC-UV)法测定微生物降解体系中西维因含量。根据细菌和霉菌降解体系的不同性质选用适宜前处理方式,以Sepax GP-C_(18)柱(150 mm×4.6 mm,5.0μm)为色谱柱,V(乙腈)∶V(水)=(56∶44)为流动相,流速0.5 m L/min,用紫外检测器于220 nm处检测西维因。结果表明,西维因标准品保留时间为7.922 min,在0.5~100 mg/L范围内线性关系良好,相关系数0.999 1。细菌培养液中西维因平均回收率为102.01%,RSD为0.29%;霉菌培养液中平均回收率为100.76%,RSD为1.22%;最低检测限为0.4mg/L。运用该法测得实验室保藏的细菌菌株A4和B-1在LB培养基中培养2 d对20 mg/L西维因降解率分别为35.72%、38.97%;霉菌菌株M-4和YAT在MM培养基中培养7 d对20 mg/L西维因降解率分别为38.69%、51.40%。该法简单,快速,回收率和精密度高,稳定性好。     

HPLC-UV法测定微生物降解体系中3-苯氧基苯甲酸含量

采用高效液相色谱-紫外(high-performance liquid chromatography with ultraviolet,HPLC-UV)法测定微生物降解体系中3-苯氧基苯甲酸(3-PBA)的含量。以Gemini 100A C18柱(150mm×4.60mm,5.0μm)为色谱柱,乙腈-水(70:30,V/V)为流动相,流速0.7mL/min,用紫外检测器在210nm处检测3-PBA。结果显示：3-PBA对照品的保留时间为4.268min,线性范围为0.5～50.0mg/L,3-PBA平均回收率为98.919%,RSD为2.78%;运用该方法测得4种不同来源的混合菌株发酵液中3-PBA的残留量分别为24.467、86.266、2.633、1.921mg/L。本法简单、快速、准确、分离度好。     

高效液相色谱法检测蜜环菌发酵液中腺苷含量

采用高效液相色谱法对蜜环菌发酵液中腺苷含量进行检测。色谱柱:Agilent Zorbax Eclipse XDB-C18柱(4.6mm×150mm,5μm);流动相:乙腈-水(10:90,V/V);检测波长259nm、柱温30℃、流速0.5mL/min。结果表明:线性范围为0.05～0.25mg/mL相关系数r为0.99964,精密度RSD为1.26%(n=5),稳定性RSD为1.29%(n=7),重现性实验RSD为1.76%(n=5),平均回收率99.82%。该方法准确、可靠,可以快速准确的对蜜环菌发酵液中的腺苷进行定性定量分析。     

高效液相色谱法检测发酵液中甜菜碱的含量

采用高效液相色谱法(HPLC)建立发酵液中甜菜碱含量检测的新方法。使用ZORBAX 300-SCX(5μm,4.6 mm×250 mm)阳离子色谱柱,以乙腈:0.05 mol/L磷酸二氢钾比例为15∶85(V∶V)作为流动相,检测波长195 nm,流速1.0 m L/min,柱温30℃,紫外检测器检测。甜菜碱在0.005～5.0 g/L范围内线性关系良好,相关系数为0.999 9,平均回收率为103.3%,方法定量限为0.025 g/L。此方法具有样品前处理简单、检测灵敏度高、分析时间短、回收率高、重现性好等优点,可适用于发酵液中甜菜碱含量检测。     

高效液相色谱法测定发酵液中的四甲基吡嗪

采用高效液相色谱法在Hypersil NH2(300 mm×4.6 mm,5μm)上测定了发酵液中的四甲基吡嗪,流动相为乙腈-水(90︰10,V/V),流速为1 m L/min,紫外检测波长295 nm,柱温35℃。10 min内可以完成色谱检测。该方法的检出限(S/N=3)为0.03μg/L,线性范围0.02~2 g/L;方法回收率为96.7%~98.2%;RSD为0.54%~1.72%。试验结果证明,该方法是测定发酵液中四甲基吡嗪的快速、有效的定量分析方法。     

高效液相色谱分析蓝莓发酵液中鞣花酸和没食子酸

建立了高效液相色谱法测定蓝莓发酵液中鞣花酸含量和没食子酸含量的两种方法。鞣花酸的测定条件：Waters symmetry C18色谱柱,柱温25℃,流动相为46∶2∶52的甲醇—乙酸乙酯—KH2PO4/H3PO4溶液,流速0.8m L/min,检测波长254nm,检测蓝莓发酵液中鞣花酸平均回收率为92.68%,RSD为0.97%。没食子酸的测定条件：Waters symmetry C18色谱柱（250×4.6mm,5μm）,柱温35℃,流动相为甲醇：水（0.1%磷酸）=10∶90,流速为1.0m L/min,检测波长273nm,该方法检测蓝莓发酵液中没食子酸平均回收率为99.0%,RSD为0.73%。两种方法均操作简单快速,重现性好,准确度高,可分别用于香菇等食用菌发酵蓝莓制品中鞣花酸和没食子酸含量的测定。     

RP-HPLC法测定发酵液中β-苯乙醇的研究

运用反相高效液相色谱对发酵液中的β-苯乙醇进行定性定量分析确定了RP-HPLC测定发酵液中β-苯乙醇的含量的方法。色谱柱:DikmaDiamonsilC18150mm×4.6mm5μmWaters,流动相∶甲醇∶水=40∶60(v/v)流速:1.0mL/min,紫外检测波长:260nm,柱温30℃,外标法定量。结果RP-HPLC法测定浓度在4～20μL/10mL时线性关系良好,r=0.9998,平均加样回收率为97.71%,RSD为1.04%(n=5)。此方法准确,灵敏,简单,重现性好,适合于发酵液这种复杂体系中β-苯乙醇的定量分析。     

高效液相色谱示差折光法检测紫胶桐酸

采用高效液相色谱(high performance liquid chromatography,HPLC)法,利用示差折光检测器(refractive index detector ,RID)测定紫胶桐酸含量。色谱柱为Agilent ZORBAX SB-C18(4.6mm×250mm,5μm),以V(甲醇):V(水)＝60:40(0.1%三氟乙酸)作为流动相,流速1mL/min,进样体积10μL,柱温30℃。结果表明：紫胶桐酸在0.01～1.0mg/mL呈良好的线性关系,R2＝0.9994;最低检测限为0.008mg/mL;精密度RSD值为0.86%;平均加标回收率为100.23%,RSD值为0.65%。采用HPLC-RID测定紫胶桐酸的含量,操作简单,结果准确,稳定性和可信度好。     

HPLC法测定小麦胚咀嚼片中维生素E

确定了高效液相快速测定小麦胚咀嚼片中维生素E含量的方法。色谱柱为反相C18柱(150mm×4.4mm),流动相为99%甲醇,检测波长为280nm,流速1.0ml/min,线性相关系数为0.999 4,检出限为0.2mg/L,重现性的相对标准偏差(RSD)为0.24%,方法的精密度RSD为1.005%,平均回收率97.8%。     

HPLC法检测黑曲霉发酵液中5-羟甲基糠醛的研究

该研究建立了一种利用高效液相色谱法测定黑曲霉（Aspergillus niger）xj发酵液中5-羟甲基糠醛（5-HMF）含量的检测方法。样品经乙醚提取,采用Spheriorb C18柱（4.6 mm×150 mm,5 μm）为色谱柱,以乙睛∶0.1%乙酸水（冰乙酸调）=10∶90（V/V）为流动相,柱温30 ℃;流速1.0 mL/min,检测波长为l=277 nm。在该色谱条件下,5-HMF呈现较好的分离效果和重现性,其含量与峰面积呈现良好线性关系（R为0.999）,保留时间2.436 min,回收率87.12%～90.78%,精密度实验结果相对标准偏差（RSD）0.71%。测得发酵液样品中5-HMF含量为0.125 7 mg/g。该方法准确可靠,重复性好,可对黑曲霉发酵液中5-HMF的含量测定作参考作用。     

反向高效液相色谱测定发酵液中的聚苹果酸

采用高效液相色谱柱AlltimaTMC18(4.6 mm×150 mm,4μm)上定量测定发酵生产的聚苹果酸,流动相为乙腈和0.025 mol/L磷酸二氢钾混合溶液(磷酸调pH 2.5)(V:V=5:95),流速1.0 mL/min,检测波长210 nm,柱温25℃,进样量5μL。发酵液经离心除菌体、纯沉除多糖、水解处理后进样,可以将其中的L-苹果酸完全分离定量。采用液相方法的回收率为98.70%~100.65%,RSD为0.4~1.11%。采用试剂盒的方法的回收率为96.7~97.23%,RSD为0.57~1.19%。可见,液相的精确度和试剂盒相差不大。但液相的价格相对比试剂盒要便宜很多,说明该法是测定发酵液中聚苹果酸的一种很有效的方法。     

RP-HPLC法测定核桃外果皮中齐墩果酸的含量

建立核桃外果皮中齐墩果酸含量测定的反相高效液相色谱法(RP-HPLC),采用色谱柱为Intersil ODS(150 mm×4.6 mm,5μm);流动相为甲醇:水:冰乙酸(265:35:0.1,V/V);流速0.8 mL/min;进样量20 μL;检测波长为210 nm;柱温30℃.结果表明,齐墩果酸进样量在0.728～7.28 μg(r=0.999 7)范围内呈现良好的线性关系,齐墩果酸平均回收率(n=9)为101.1%,相对标准偏差(RSD)为2.44%.测得核桃外果皮中齐墩果酸含量为2.1 mg/100 g.该方法简便快速,结果可靠准确,重现性和稳定性好.     

HPLC法测定苹果树腐烂病菌发酵液中的有机酸和葡萄糖

建立了一种用高效液相色谱(HPLC)检测苹果树腐烂病菌发酵液中有机酸和葡萄糖的方法。采用Atlantis C18色谱柱(150 mm×4.6 mm,3.5μm),以5g/L NH4H2PO4(用磷酸调pH=2.5)溶液为流动相,流速为0.6mL/min,柱温30℃,应用紫外检测器检测有机酸,示差检测器来分析葡萄糖。在此色谱条件下,葡萄糖和有机酸能很好地被分离检出,平均回收率为96.2%¹02.2%,精密度RSD(n=5)为0.26%102.2%,精密度RSD(n=5)为0.26%⁰.75%,每一样品的分析时间不超过15 min。该方法能够简便、快速测定苹果树腐烂病菌发酵体系中有机酸及葡萄糖的含量。     

HPLC法测定市售白酒中的甲醛含量

本研究建立高效液相色谱法测定市售白酒中甲醛含量的分析方法。采用乙腈-2,4-二硝基苯肼和乙酸钠混合体系作为衍生液,在60℃水浴中进行衍生,提取样品中的甲醛。生成的衍生物经色谱柱Inertsil ODS-3-C18(4.6 mm×250 mm,5μm)洗脱,流动相为甲醇∶水(68∶32,V∶V),流速1.0 mL/min,柱温40℃,检测波长为360 nm。结果表明,甲醛在0.0125～1.0 mg/L浓度范围内,线性关系良好,3个不同水平的加标回收率为93.27%～98.06%,RSD值为1.98%,检出限为1.5μg/mL,12种市售白酒中的甲醛含量在0.37～12.98 mg/L之间。该方法操作简单,稳定性好,适用于快速检测白酒中甲醛含量。     

超高效液相色谱法测定清咽含片中罗汉果皂苷V

目的建立超高效液相色谱法(ultra performance liquid chromatography,UPLC)测定清咽含片中罗汉果皂苷V含量的方法。方法色谱条件为色谱柱:XSELECT HSS T_3(100 mm×2.1 mm,2.5μm);流动相:乙腈:0.1%磷酸水溶液,梯度洗脱,流速:0.4 mL/min;柱温:40℃;进样量:5μL;检测波长:203 nm。结果结果表明,罗汉果皂苷V线性范围为0.033~0.333 mg/mL(r=1.0000),检出限66.4μg/g,定量限221.6μg/g,精密度(relative standard deviation,RSD)为1.5%,平均回收率97.6%(n=9)。结论此法操作简单、准确、快速,可作为清咽含片中罗汉果皂苷V含量的检测方法。     

高效液相色谱法测定乳酸菌发酵液中γ-氨基丁酸

通过对衍生试剂浓度、衍生时间、衍生温度、检测波长、流动相比例与柱温条件的选择,建立了一种高效液相色谱（HPLC）法灵敏检测发酵液中γ-氨基丁酸（GABA）含量的方法。以邻苯二甲醛为衍生化试剂,衍生时间5 min,衍生温度为室温,色谱条件为：检测波长228 nm,流动相为乙腈-20 mmol/L结晶乙酸钠溶液（21∶79,V/V）,柱温30 ℃,流速0.8 mL/min。结果表明,在γ-氨基丁酸含量0.05 μg/mL～0.50 mg/mL范围内线性关系良好（相关系数R2=0.999 4）,平均加标回收率为91.87%～105.58%,精密度试验结果相对标准偏差（RSD）为0.55%～3.74%（n=5）,检出限为0.02 μg/mL。采用该方法检测发酵液中γ-氨基丁酸含量,其含量范围在0.157～0.369 mg/mL之间。该方法操作简单、灵敏、准确可靠,适用于发酵液中γ-氨基丁酸含量的检测。     

正相色谱法测定大豆磷脂中的磷脂酰胆碱

目的建立正相色谱法测定大豆磷脂中磷脂酰胆碱含量,用于大豆磷脂类保健食品生产过程中该物质含量的测定和质量控制。方法采用硅胶柱(4.6 mm×250 mm,5.0μm)进行分离;色谱条件为流动相:异丙醇:正己烷:蒸馏水=70:16:14(V:V:V),等度洗脱,流速:1.0 m L/min;柱温:40℃;进样量:10μL;检测波长:205nm;并进行方法学验证,考察方法检测限、精密度、回收率等指标。结果磷脂酰胆碱峰面积与其浓度呈良好的线性关系,线性范围为0.1~0.8 mg/m L(r=0.9999),检出浓度0.04μg/m L,检出限为20μg/g,定量限为66.666μg/g,精密度(RSD)为0.6%,平均回收率99.37%(n=9)。结论本文建立的方法灵敏度高,重复性好,且具有很好的专属性,能够应用于大豆磷脂类保健食品中磷脂酰胆碱含量的检测。     

高效液相色谱法测定发酵液中3-羟基丁酮

针对生物法制备3-羟基丁酮的微生物发酵体系,研究了利用高效液相色谱法测定3-羟基丁酮的方法。发酵液高速离心后经0.22μm微孔滤膜过滤,以Hypersil NH2(300 mm×4.6 mm,5μm)为分离柱,乙腈-水(90:10,V/V)为流动相,流速为1 m L/min,检测器为示差折光检测器,柱温和检测器温度均为35℃,在25 min内可以完成色谱检测。方法回收率为95.96%~101.2%;RSD为1.69%~2.09%。实验结果证明,该方法是测定发酵液中3-羟基丁酮的快速、有效的定量分析方法,具有样品预处理简单,灵敏度高的优点,适合于指导整个发酵过程中条件的优化及发酵产物的实时监控。     

HPLC-ELSD法同时测定酵母发酵液中的多元醇

建立高效液相色谱-蒸发光散射检测器法（HPLC-ELSD）测定酵母菌株发酵液中多元醇含量的方法。采用Agilent Hi-plexCa色谱柱（7.7 mm×300 mm,8 μm）,以纯水为流动相,流速0.5 mL/min,蒸发光散射检测器（ELSD）为检测器;柱温为70 ℃,进样量为4 μL。结果表明,5种多元醇在0.8～6.0 mg/mL质量浓度范围内与峰面积呈良好的线性关系（相关系数R均≥0.996）;精密度实验结果相对标准偏差（RSD）均＜5%,平均回收率为96.73%～100.46%,表明该方法灵敏度高,重现性良好,准确度高,可用于发酵液中5种多元醇的检测。以酱香型白酒酿造过程中大曲和酒醅分离的酵母为研究对象,运用该方法在酵母发酵液中检测到5种多元醇。     

高效液相色谱法测定天山花楸中金丝桃苷的含量

目的：建立天山花楸枝叶中金丝桃苷的含量测定方法。方法：采用HPLC Shim-pack VP-ODS 柱(150mm× 4.6mm,5μm),流动相为乙腈- 水(25:75,V/V),流速为1.0ml/min,柱温为25℃,检测波长为360nm。结果：金丝桃苷在0.04～0.32mg/ml 之间线性关系良好,r ＝ 0.9992,平均回收率99.7%,RSD 为2.6%;结论：本法快速、灵敏、准确、可靠、重复性好,可用于天山花楸药材的质量控制。