NMDA受体显像剂99Tcm-NCAM的制备和受体结合分析

用99Tcm标记新的美金刚胺(memantine)衍生物N-[2(N-(2-巯基乙基))氨基乙酰基]-N-(2-巯基乙基)-3, 5-二甲基金刚烷胺基乙酰胺(N2S2-memantine,简称NCAM),并通过优化标记条件获得放射化学纯度达95%以上的标记化合物99Tcm-NCAM.脂溶性实验测得其脂水分配系数lg P=1.90.放射性受体结合分析显示,其与N-甲基-D-门冬氨酸(NMDA)受体结合具有饱和性,根据受体B区理论编制的计算机程序求出NMDA受体结合参数最大结合容量Bmax=56.8 μmol/g,平衡解离常数Kd=706.3 nmol/L,特异性NMDA受体拮抗剂能阻断其与NMDA受体的结合.结果显示99Tcm-NCAM与NMDA受体结合具有中等程度的亲和力和结合特异性,具有较好的脂溶性,易透过血脑屏障,有可能成为一种新的NMDA受体显像剂.     

人溶菌酶基因在毕赤酵母中的表达及发酵条件的优化

目的在毕赤酵母中表达人溶菌酶(Human lysozyme,hLY)基因,并对发酵条件进行优化。方法将人工合成的hLY成熟肽基因克隆至表达载体pPIC9K中,电转化至毕赤酵母GS115,通过抗G418筛选获得高拷贝重组子GS115/hly,经甲醇低温诱导表达后,取发酵液上清进行SDS-PAGE分析及酶活性检测,并对培养基初始pH值、甲醇添加量、诱导温度和时间进行优化。结果人工合成的hly测序结果与GenBank中报道的核酸序列完全一致;GS115/hly经PCR鉴定,hly基因已整合入GS115基因组内;经甲醇诱导表达的GS115/hly发酵液上清具有溶菌活性,活性达30U/ml;经SDS-PAGE分析,在相对分子质量约15200处可见目的蛋白条带;GS115/hly的最佳诱导条件为:培养基初始pH5.0,甲醇添加量2.0%,26℃诱导108h。结论在毕赤酵母GS115中表达了具有较高酶活性的hLY,并对发酵条件进行了初步优化。     

一株产低温碱性蛋白酶海洋细菌Pseudoalteromonas flavipulchra HH407的筛选与生长特性

对从连云港海域筛选的一株产低温碱性蛋白酶的海洋适冷菌HH407进行鉴定和生长特性研究结果表明,该菌为革兰氏阴性杆菌,好氧,端生鞭毛,无芽孢及荚膜,大小为0.4～0.7μm×1.0-1.8μm,在酪蛋白培养基的菌落特征为椭圆金黄色、光滑、半透明、四周隆起.根据其生理生化性质、16S rDNA 同源性和系统进化树分析初步鉴定该菌属于 Pseudoalteromonas flavipulchra.该菌的生长温度范围为0～40℃,最适生长温度为20℃;pH范围为5.5～11.0,最适生长pH值为8.5;NaCl质量浓度范围为0.5～13 g/dL,最适生长NaCl质量浓度为4 g/dL,无NaCl时不能生长.该菌能较好利用胰蛋白胨、酵母膏和蛋白胨等蛋白质物质,对糖的利用较差.该菌株所产蛋白酶在pH 10.0和35℃时表现最高酶活.     

番茄红素纳米分散体抗小鼠肝移植瘤的作用

为了研究番茄红素纳米分散体对肿瘤生长的影响及其机制,采用乳化-蒸发工艺(超声乳化)制备了番茄红素纳米分散体并用小鼠移植型肝癌模型研究了番茄红素纳米分散体的体内抗肿瘤作用和对机体抗氧化、抗增殖能力的影响。采用乳化-蒸发工艺(超声乳化)可获得纳米级别的番茄红素分散体系;番茄红素纳米分散体以1.95mg/kg,3.9mg/kg剂量给移植型肝癌H22小鼠用药10d后,移植瘤生长抑制率分别为32.37%,54.34%;同时可提高小鼠血清谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性,降低丙二醛(MDA)含量;可提高小鼠肝组织总抗氧化能力(T-AOC)、超氧化物歧化酶(SOD)活性,降低过氧化氢(H2O2)、MDA含量;下调增殖细胞核抗原(PCNA)蛋白表达。研究表明,番茄红素纳米分散体在体内能明显抑制移植瘤的生长,其机制可能与提高机体的抗氧化活性、抑制肿瘤细胞增殖有关。     

壳聚糖降低脂质过氧化作用的研究

通过体外油脂抗氧化试验,与常规抗氧化剂VC进行对照;大鼠喂养试验,测定体内脂质过氧化的指标。添加质量分数为0.02%的壳聚糖对猪油和粗榨菜油均有抗氧化作用,但不如等量VC效果明显,但当添加质量分数增大为0.05%后,壳聚糖与VC在实验后期抗氧化能力接近;壳聚糖能显著降低大鼠高脂饮食引起的血清游离脂肪酸浓度上升,降低脂质过氧化物代谢产物丙二醛的含量,提高机体主要的抗氧化酶超氧化物歧化酶、过氧化氢酶和谷胱甘肽过氧化物酶的活性。因此,壳聚糖能通过调节体内抗氧化酶活性来改善脂质过氧化的状况。     

T-2毒素的高灵敏时间分辨荧光免疫分析

以时间分辨荧光免疫分析(TRFIA)方法建立快速灵敏的T-2毒素的全自动检测方法. 采用T-2-BSA包被96孔板作为固相抗原,与游离的T-2竞争有限的抗T-2单克隆抗体,以Eu3+标记的羊抗鼠抗体示踪,采用间接竞争免疫分析方法在解离增强荧光免疫分析体系中建立T-2-TRFIA.同时对这一方法的稳定性、灵敏度、回收率和特异性进行考核.此方法灵敏度为0.2 μg/L,测量范围0.2～500 μg/L,批内变异为7.5%,批间变异为12.7%,平均回收率为89.6%.与赭曲霉毒素A、黄曲霉毒素B1、牛血清白蛋白无交叉反应.10条不同时间进行的间接竞争T-2-TRFIA的效应点均值ED80、ED50和ED20分别为2.66,6.97,29.11 μg/L.同时,用TRFIA和ELISA试剂盒同时检测T-2毒素,在ELISA和TRFIA产品的共同可测范围之内,两者的相关系数为0.926.     

人脑钠肽与人血清白蛋白融合蛋白在毕赤酵母中的分泌表达及其活性

目的在毕赤酵母中表达重组人脑钠肽(BNP)与人血清白蛋白(HSA)融合蛋白,并检测其活性。方法重叠PCR法拼接BNP二联体与HSA基因,插入表达载体pPIC9K,电穿孔法转化毕赤酵母GS115,甲醇诱导表达,并对表达产物进行SDS-PAGE分析、Western blot鉴定及活性检测。结果融合基因(BNP)2-HSA经测序正确,重组表达质粒经双酶切鉴定构建正确。诱导72h,融合蛋白表达量最高,可达200mg/ml,且具有良好的反应原性,其活性为rhBNP标准品的1%。结论已在毕赤酵母中成功表达了具有一定生物活性的(BNP)2-HSA融合蛋白,为开发BNP长效药物奠定了基础。     

庆大霉素发酵液薄层色谱（TLC）分析方法研究

通过对庆大霉素(GM)薄层色谱(TLC)检测体系进行优化,得出了最佳的制板条件,最佳展开剂系统以及显色系统,并对该检测方法的重复性以及检测限进行了考察.最终将得到的最佳检测体系应用到庆大霉素发酵液的检测中,成功实现了对发酵液主组分C1,C1a,C2(C2a C2)的有效分离检测,分离度及 R f 值均达到要求.并且,通过对发酵液进行简单的纯化浓缩后,运用该检测体系成功实现对10个组分的有效检测.另外,将该TLC体系与微生物效价检定法结合,可以较准确地得到各组分的含量比,通过与HPLC检测结果进行比较,发现结果基本一致.该方法简单快速,结果可靠,能满足发酵试验与生产中对成份需要快速检测的要求.     

基于大孔树脂吸附的樟芝胞外总三萜的分离工艺

以总三萜的洗脱效果为考察指标,研究了大孔树脂分离纯化的吸附性能及洗脱参数。结果表明,XAD-16大孔树脂适宜樟芝胞外总三萜的富集分离,其再生能力良好,吸附过程符合Langmuir方程。同时获得了XAD-16大孔树脂对三萜类化合物的动态分离条件:上样发酵液的pH为6.0,吸附流速为2 mL/min,解吸附溶剂为乙醇。溶液中三萜类化合物的初始浓度为0.97 mg/mL,获得了纯度为260.54 mg/g的总三萜样品。     

细点圆趾蟹含肉下脚料酶解物中抗氧化肽的分离与鉴定

目的：从细点圆趾蟹含肉下脚料的胰蛋白酶酶解产物中分离鉴定具有高ABTS+·清除率的抗氧化肽。方法：通过超滤系统、Sephadex G-15和半制备型RP-HPLC,从细点圆趾蟹含肉下脚料酶解产物中分离制备抗氧化肽,用超高效液相色谱-电喷雾飞行时间串联质谱（UPLC-ESI-TOF-MS/MS）对肽的结构进行表征,再通过合成肽对其结构与ABTS+·清除率进行验证。结果：获得2个ABTS+·清除能力较强的抗氧化肽,其氨基酸序列分别为Tyr-Glu-Gly（YEG）和Tyr-Glu（YE）。合成肽YEG和YE的分子质量分别为367.35 u和310.30 u,纯度分别为98.52%和98.04%,清除ABTS+·的IC50值分别为0.456 mg/mL和0.184 mg/mL,且YE的IC50值比L-还原型谷胱甘肽高30.30%。结论：细点圆趾蟹含肉下脚料的胰蛋白酶酶解产物含有抗氧化活性的肽类成分,为其抗氧化肽的开发提供理论依据。