去泛素酶复合体Ubp3/Bre5的制备及与Cdc48作用

泛素化是一种存在于真核细胞中与生理功能密切相关的蛋白修饰,泛素化与去泛素化处于动态调节过程中。 Ubp3是与人USP10同源的酵母去泛素化酶,结合辅引子Bre5在细胞内发挥广泛作用。为研究该复合体的工作机制,制备重组蛋白复合体,在大肠杆菌中成功表达并纯化重组Ubp3与Bre5单体及Ubp3/Bre5复合体,首次成功大规模制备重组Ubp3/Bre5复合体。通过一系列pulldown实验,检验Ubp3/Bre5与AAA家族中泛素选择性ATP酶Cdc48的相互作用模式,结果发现, Ubp3及Bre5无法单独与Cdc48结合,但Ubp3/Bre5复合体可以有效与Cdc48相互作用。提出了Ubp3/Bre5-Cdc48相互作用的新模式,制备了高质量重组Ubp3/Bre5复合体。该研究为通过生化及结构生物学进行分子机制探索奠定了基础。     

除草剂在植物体内的代谢与选择性及使用

简要论述了除草剂在植物体内的代谢反应及其调控。     

强肝抗纤汤防治大鼠肝纤维化的实验研究

目的研究强肝抗纤汤对大鼠肝纤维化的防治作用,为强肝抗纤汤的临床应用提供实验依据。方法将62只SPF级大鼠随机分为空白组,模型组,秋水仙碱组,中药低、高剂量组5组。采用复合因素法复制肝纤维化模型,造模前1 d,各组分别灌胃生理盐水或相应药物。造模及灌胃给药共进行6周,6周后对各组大鼠血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、门冬氨酸氨基转移酶(AST)含量进行检测,并进行大鼠肝脏病理形态学观察。结果与空白组比较,模型组大鼠ALT,AST含量显著升高,差异有高度统计意义(P<0.01);与模型组比较,各治疗组大鼠ALT,AST含量显著降低,差异有统计意义(P<0.05或P<0.01);与秋水仙碱组比较,强肝抗纤汤高、低剂量组ALT,AST含量降低更为显著,差异有高度统计意义(P<0.01)。结论强肝抗纤汤可有效预防实验大鼠肝纤维化形成,降低肝纤维化大鼠肝组织损伤程度,有效降低肝纤维化模型大鼠血清ALT,AST含量。     

大鼠心脏能量代谢底物随年龄增长的变化及调节

目的:研究大鼠心肌能量代谢的底物随年龄的变化及调节机制。方法:选用2个月和14个月的雄性SD大鼠,分别为青年对照(young&control,YC)组和老龄对照(aging&control,AC)组。实验末期利用超声心动图测量左心室收缩功能及舒张功能;利用高压液相波谱分析(HPLC)测定心脏ATP的含量;应用Western blot方法检测心肌GLUT-4及CPT-1的表达;用临床生化法检测血Glu、TG、TC、LDL-C、HDL-C、AST、ALT、ALP、BUN、Cr、LDH等指标。结果:实验末期,两组大鼠LVEF比较,差异无统计学意义(P>0.05)。AC组的大鼠心尖ATP含量明显低于YC组,差异有统计学意义(P<0.05)。Western blot检测显示,AC组大鼠GLUT-4与CPT-1表达量较YC组均下降,GLUT-4/CPT-1比值增大(P<0.05)。YC组大鼠血清ALP水平显著高于AC组,差异有统计学意义(P<0.05);两组大鼠的血清TG、Glu、TC、LDL-C、HDL-C、ALT、AST、Cr、BUN以及LD比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:大鼠随年龄增长出现的心肌能量代谢改变,能量产生的减少早于心脏功能的改变。     

双波长微板赖氏法检测丙氨酸氨基转移酶方法的优化

目的对检测丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,ALT)的双波长微板赖氏法进行优化。方法采用正交试验优化双波长微板赖氏法的空白试剂(磷酸缓冲液或纯化水)和Na OH浓度(0.5、1.0、1.5、2.0 mol/L),考察方法的稳定性、线性拟合度、精密性和准确性。结果以纯化水作空白,1.0 mol/L Na OH作终止溶液时,该方法具有很好的稳定性;线性拟合度好,R2=0.998 3>0.990 0;检测38和57卡门单位的丙酮酸标准溶液的板内A492/630值的变异系数均<10%,100%的样本检测结果在可接受范围内。结论优化的检测ALT的双波长微板赖氏法具有很好的稳定性、线性、精密性和准确性,且通量高,适用于大规模检测。     

谷氨酸依赖型氨基转移酶的高通量筛选方法及其应用

目的:建立谷氨酸依赖型氨基转移酶-谷氨酸脱氢酶偶联反应的96孔板高通量筛选方法,并用于大肠杆菌氨基转移酶Wec E突变库的筛选。方法:通过优化偶联指示酶-谷氨酸脱氢酶、信号分子NADH浓度及双酶偶联反应时间,建立了光学法测定氨基转移酶活性的氨基转移酶-谷氨酸脱氢酶偶联反应方法;通过定点饱和突变技术构建了大肠杆菌氨基转移酶WecE的突变库;采用96孔板高通量初筛、摇瓶复筛获得了高活性的转氨酶突变体,并对纯化的突变体进行催化活力分析。结果:建立了谷氨酸依赖型氨基转移酶目标反应与0.5 U/ml L-谷氨酸脱氢酶和0.4 mmol/L NADH信号指示反应相偶联的筛选方法;构建了氨基转移酶WecE Tyr 321饱和突变库,通过96孔板高通量筛选,获得了催化活性比野生型提高3.4倍的突变体Y321F。结论:所建立高通量筛选方法背景干扰小,准确性高,为谷氨酸依赖型氨基转移酶分子进化提供了可行性方案。     

端粒酶的研究进展

端粒/端粒酶系统可以调节细胞的增殖。通过抑制端粒酶的活性而抑制细胞的增殖,是一种肿瘤治疗的策略;通过激活端粒酶的表达而促进细胞增殖,可以治疗某些退形性疾病。近年来对此系统的研究成为热点,本文就端粒酶的作用、调节及其与肿瘤、细胞永生化方面进行综述。     

单唾液酸四己糖神经节苷脂钠治疗脑外伤癫痫44例临床观察

目的:探讨应用单唾液酸四己糖神经节苷脂钠治疗脑外伤癫痫患者的临床疗效。方法:将88例患有脑外伤癫痫疾病患者随机分为对照组和治疗组,每组44例。对照组采用传统药物治疗;治疗组在常规传统药物基础上,加用单唾液酸四己糖神经节苷脂钠治疗。结果:治疗组疗效明显优于对照组(P<0.05);癫痫症状消失时间和用药时间明显短于对照组(P<0.05);两组患者均未出现任何药物不良反应。结论:应用单唾液酸四己糖神经节苷脂钠治疗脑外伤癫痫患者疗效好,值得临床推广。     

酪蛋白糖巨肽分离条件的研究

探讨了利用了(NH4)2SO4分级沉淀、三氯乙(TCA)纯化酪蛋白的胃蛋白酶水解物中 CGMP的工艺.结果表明,经过20%和65%饱和度的硫酸铵沉淀胃蛋白酶水解物,质量分数为12%的TCA纯化得到的样品,其纯度为91.2%.整个工艺路线简便、快捷、成本较低,适合工业化生产.     

谷氨酰胺转移酶改性对花生蛋白膜性能的影响

采用谷氨酰胺转移酶对花生蛋白进行改性制备花生蛋白膜以提高膜的性能,研究了谷氨酰胺转移酶对花生蛋白膜性能、微观结构、差示扫描热量以及红外光谱的影响。与对照相比,改性花生蛋白膜的拉伸强度、断裂伸长率和阻氧性分别提高了91.69%、53.69%和4.97%;水溶性和水蒸气透过率分别降低了15.12%和了32.85%。改性后,花生蛋白膜的内部孔洞变小,结构更加致密,但热稳定性下降。研究同时表明,谷氨酰胺转移酶主要作用于花生蛋白分子中的羟基及胺基,通过交联作用形成了酰胺基团,并改变了花生蛋白分子原有的二级结构。