利用基于表面等离子体共振的生物光学传感器检测牛奶中氨苄青霉素残留的方法

采用表面等离子体共振的生物光学传感器的方法,利用生物分子相互作用分析原理及传感器对折射率的高度敏感性,结合传感器金膜表面绑定抗氨苄青霉素单克隆抗体的技术,实现了牛奶中氨苄青霉素含量的定量检测.实验中利用微型表面等离子体共振传感器构建了测量系统,介绍了传感器表面的处理方法,并对氨苄青霉素浓度为0、10、50、100ng/ml的牛奶样品进行了测量,通过对测量结果进行分析,得到了不同氨苄青霉素浓度的传感器响应图,对牛奶中氨苄青霉素含量的最低检测限达到了50ne/ml.结果表明,基于表面等离子体共振的光学生物传感器在牛奶抗生素药物残留检测方面具有很好的应用前景.     

弧菌外膜蛋白Ompk基因序列分析及其多克隆抗体的制备

弧菌外膜蛋白（outer membrane protein,OMP）OmpK不仅可激发机体的体液免疫和细胞免疫,而且可在不同血清型菌株之间产生免疫交叉反应。本研究利用克隆测序和查找GenBank获得20 株弧菌的Ompk基因序列并构建Ompk系统进化树,对比分析20 株弧菌Ompk基因序列;利用原核表达系统表达野生株Vibrio parahaemolyticus B的OmpK,纯化OmpK后制备兔多克隆抗体;采用酶联免疫吸附分析法和蛋白质印迹法（Western-blotting）分别检测抗体效价和特异性。系统进化树和基因序列比对结果显示Ompk基因在弧菌中高度保守,核苷酸序列相似性在77%以上;原核表达系统成功表达了弧菌OmpK,蛋白经纯化后成功制备的兔多抗效价达1∶16 000;Western-blotting实验证实抗体具有很好的特异性;OmpK多克隆抗体在弧菌中普遍存在免疫交叉性。因此,弧菌Ompk基因序列分析及其抗体研制,不仅为弧菌快速免疫学检测提供可能性,也为以OmpK为靶点的水产疫苗研制奠定了基础。     

氨基化聚苯乙烯微球的制备及在克伦特罗抗体纯化中的应用

进行氨基聚苯乙烯微球制备方法及其应用于克伦特罗抗体纯化的研究。通过分散聚合法制备聚苯乙烯微球,硝基反应成硝基化聚苯乙烯微球,再还原成氨基化微球。并利用电子显微镜及红外光谱仪对微球形态及结构进行表征。成功制备氨基聚苯乙烯微球后,将微球与盐酸克伦特罗分子发生重氮化反应,得到连接克伦特罗分子的微球。将这种微球免疫亲和吸附分离盐酸克伦特罗的抗体。最后将纯化后的抗体通过紫外检测,电泳检测等方法证明所制备的微球用于抗体的纯化可行。     

二硫键稳定的抗氯霉素单链抗体的构建

为构建一种食品残留检测用二硫键稳定的抗氯霉素单链抗体(sdsFvCAP)。以抗氯霉素抗体可变区基因为模板,通过引物突变PCR 在轻链和重链的可变区分别引入一个半胱氨酸定点突变,以重叠延伸PCR 组装成sdsFvCAP。在大肠杆菌系统强启动子T7 驱动下,sdsFvCAP 基因不能单独表达,而通过同义突变降低其5＇端序列GC 含量则可实现高效表达。表达产物主要以包涵体形式存在,经β- 环糊精分子伴侣系统复性可获得亲和力与母本抗体相似的sdsFvCAP。所构建的sdsFvCAP 具有取代单克隆抗体用于氯霉素残留检测的潜力。     

抗呋喃它酮代谢物噬菌体单链抗体库的构建

目的：构建抗呋喃它酮代谢物(AMOZ)的衍生物噬菌体单链抗体库。方法：从分泌抗AMOZ 的单克隆抗体的杂交瘤细胞系(BC3-E8)中提取总RNA,经RT-PCR 反转录成cDNA,设计通用简并引物,PCR 扩增抗体重链可变区基因(VH)和轻链可变区基因(VL)。经重叠延伸PCR (SOE-PCR),将VH 和VL 基因用编码(G1y4Ser)3 的linker随机拼接成单链抗体(scFv)基因,然后将其克隆到噬菌粒载体pCANTAB5E 中,转化大肠杆菌(Escherichia coli) TG1 感受态细胞,经辅助噬菌体M13K07 超感染,建立噬菌体单链抗体库。随机挑取10 个阳性克隆,经PCR 和双酶切鉴定,并测序。登陆DNAMAN 软件对序列进行分析、比对。结果：成功扩增VH、VL 及scFv 基因,并得到库容为1.2 × 106 的噬菌体抗体库,噬菌体的滴度为2.0 × 1010PFU,PCR 鉴定及双酶切鉴定文库重组率较高,软件对序列比对结果显示,scFv 基因全长序列之间差异为8.38%,VH 序列差异为3.68%,VL 序列差异为14.34%,且序列差异多集中在CDR 抗原结合区域对应的核酸序列上。结论：已构建抗呋喃它酮代谢物的衍生物噬菌体单链抗体库,为进一步富集筛选并表达抗AMOZ 的衍生物的单链抗体提供参考。     

硅胶载体氯霉素免疫亲和柱的制备

以硅胶为载体,通过硅烷偶联剂3-氨基丙基三乙氧基硅烷在其表面引入氨基,采用戊二醛法与氯霉素抗体进行偶联。该方法制备的免疫亲和柱对氯霉素抗体的偶联率达到72%,对氯霉素的最大吸附容量达到80ng/mL柱体积, 选择含70%甲醇的PBS为洗脱溶液。以牛奶为检测对象分别采用3种不同方法进行样品处理,利用免疫亲和柱实现对样品中痕量残留的氯霉素纯化富集并进行ELISA检测。     

条纹斑竹鲨的抗乙肝表面抗原的单域抗体筛选与重组抗体活性探究

对免疫HBsAg-ad亚型抗原的条纹斑竹鲨中血清、脾脏和淋巴细胞进行多组学测序结果综合分析筛选出特异性序列,构建重组表达质粒 pET-Duet-his-sumo-Anti-HBsAg-S1、pET-Duet-his-sumo-Anti-HBsAg-S2,分别转化大肠杆菌BL21(DE3),并诱导表达以及纯化重组单域抗体...     

基于人工免疫思想的蚁群算法（AIACS） 在配电网重构中的应用

针对多目标非线性整数规划的配电网重构问题,提出基于人工免疫思想的蚁群算法求解配电网重构问题。算法通过在原有蚁群模型上增加一个免疫记忆库,解对应于抗体,问题对应于抗原,并借鉴克隆选择和免疫记忆的思想进行解的构造和信息素更新。配电网编码采用基于环路的编码方式,算例结果表明,所提出算法在可以接受的计算迭代范围内可显著提高标准蚁群算法的性能。     

生物催化反应的应用

生物催化是21世纪研究比较多的一门技术,有其相对于化学催化显著的优越性,发展比较快的酶催化及抗体催化,重点介绍对其在工业催化,手性药物合成方面的应用,简要介绍在环境保护方面应用。     

一种用于多峰值函数优化的算法研究

针对基于信息熵计算抗体浓度存在的缺点,以及基于欧氏距离计算抗体相似度非常复杂,定义了一种计算抗体相似度和选择概率的新方法,并在生物免疫机理基础上借鉴遗传算子给出了一种改进的免疫遗传算法.最后进行了仿真实验,实验结果表明,所提算法的收敛性能较好,搜索速度得到了极大地提高.