PD-1抗体在肿瘤治疗中的应用

肿瘤通过刺激免疫系统的抑制受体改变原有免疫反应,进行免疫逃逸。通过阻断T细胞抑制受体,阻断肿瘤的发生,为抗肿瘤免疫提供了潜在的治疗方法。PD-1(programmed death-1)是T细胞抑制受体,在T细胞功能性紊乱时持续表达,其可作为停止信号在肿瘤中限制T细胞的效应功能。阻断PD-1信号可有效帮助衰竭T细胞,促进抗肿瘤免疫应答。PD-1抗体在癌症治疗及免疫刺激中具有重要作用,本文就PD-1及其配体、PD-1/PD-Ls信号通路以及PD-1抗体在肿瘤治疗中的应用作一综述。     

抗体芯片技术检测乳腺癌患者血清中PAI-1的表达

目的采用抗体芯片技术检测乳腺癌患者血清中纤溶酶原激活物抑制因子-1(plasminogen activator inhibitor,PAI-1)的表达。方法制备鼠抗人PAI-1单抗腹水及多抗,经ProteinA-Sepharose-4B柱纯化后,点至醛基玻片上(点样浓度均分别为1和0.1 mg/ml),制备抗体芯片,加入待测血清(分别进行1∶2、1∶10、1∶100稀释),利用晶芯Luxscan10K-A芯片扫描仪扫描,芯片图象分析软件晶芯SpotData Pro分析后,获得最适点样浓度和血清稀释倍数。采用优化后的抗体芯片法检测202份乳腺癌患者和204份健康体检者血清样本中PAI-1的表达。结果确定点样单抗最适浓度为1 mg/ml,血清最适稀释倍数为1∶100。PAI-1在204份健康体检者血清样本中阳性率为4.4%(9/204),在202份乳腺癌患者血清中的总体阳性率为25.2%,特异性为96%;其中119份发生转移和83份未发生转移的乳腺癌患者血清中PAI-1阳性率分别为35.3%(42/119)和10.8%(9/83),阳性率随肿瘤的分期进展而升高。结论 PAI-1在乳腺癌患者血清中的表达明显高于健康体检者,且随着肿瘤的分期进展阳性率升高,其有望成为新的乳腺癌血清筛查指标。     

4、6B、9V型肺炎链球菌荚膜多糖血清IgG抗体定量ELISA检测方法的初步验证

目的对4、6B、9V型肺炎链球菌荚膜多糖血清IgG抗体定量ELISA检测方法进行初步验证。方法以国际参考血清007sp为标准,测定4份国际质控血清的4型、6B型及9V型IgG抗体值,绘制标准曲线,确定检测范围、线性(R2)、检测限及定量限;连续测定该4份国际质控血清的4、6B、9V型IgG抗体各10次,计算回收率,验证该方法的准确性;在同一次试验内连续测定3份本室制备的质控血清的4、6B、9V型IgG抗体各10次,计算变异系数(CV),验证方法的试验内精密性;在不同次试验间连续测定15份质控血清的4、6B、9V型IgG抗体各10次,计算CV值,验证方法的试验间精密性;利用3份本室制备的质控血清进行抑制试验,验证方法的特异性。结果该方法检测4、6B、9V型IgG抗体的范围分别为0.034~8.325、0.093~22.625和0.066~16.400 ng/ml,R2均大于0.99,检测限分别为0.41、0.64和0.77 ng/ml,定量限分别为1.60、2.66和2.80 ng/ml;该方法检测4份国际质控血清的4、6B、9V型IgG抗体,除96/728和96/770质控血清的4型抗体测定值远远超出理论值外,其他检测结果准确性均良好;该方法的试验内变异系数均小于15%,试验间变异系数绝大多数小于20%;多糖抗原与血清抗体的反应具有特异性,其中,检测4型抗体的特异性最高,检测6B型抗体的特异性略差。结论该方法的检测范围、线性、检测限和定量限均达到可接受标准,准确性、精密性和特异性良好,可用于肺炎球菌疫苗临床血清的检测。     

表面等离子共振技术快速测定牛血清白蛋白含量

目的采用表面等离子共振(surface plasmon resonance,SPR)技术快速检测痕量牛血清白蛋白(bovine serum albumin,BSA)含量。方法将兔抗BSA抗体标记到表面等离子共振芯片表面,监测BSA与抗体结合后SPR芯片表面的变化,利用SPR技术建立快速检测痕量BSA的新方法,对建立的方法进行检出限、定量限和最佳线性范围的确定,并进行重复性验证及初步应用。结果抗体的标记水平为10 000 RU,对BSA具有良好的亲和能力;基于信噪比为3时,BSA的检出限为0.003 ng/ml,基于信噪比为10时,BSA的定量限为0.01 ng/ml,BSA浓度在0.01~100 ng/ml范围内,与SPR仪响应值的变化量呈良好的线性关系,R2=0.997 9;用建立的SPR方法检测不同浓度BSA的日内RSD为3.3%~4.6%,日间RSD为3.4%~4.8%,均小于5%;SPR方法和间接竞争酶联免疫测定法(indirect competitive ELISA,icELISA)检测不同浓度BSA含量的结果比较,差异无统计学意义(P0.05)。结论已建立了采用SPR技术检测BSA的新方法,可用于痕量BSA的快速检测。     

人源化抗CD20单克隆抗体的理化性质及结晶条件的筛选

目的分析人源化抗CD20单克隆抗体的理化性质,并初步筛选其结晶条件。方法分别采用还原、非还原SDS-PAGE及高效液相体积排阻色谱(size exclusive chromatography-HPLC,SEC-HPLC)法检测抗体纯度;还原SDSPAGE测定抗体轻重链相对分子质量;毛细管电泳测定抗体等电点;高效液相阳离子交换色谱(ion exchange chromatographyHPLC,IEC-HPLC)法检测抗体电荷异质体含量;悬滴气相扩散法初步筛选抗体的结晶条件。结果人源化抗CD20单克隆抗体的非还原SDS-PAGE纯度为100%,还原SDS-PAGE纯度(轻链+重链)为100%,重链、轻链相对分子质量分别为58 000和27 000,SFC-HPLC纯度为99.2%;等电点为9.2;抗体表面电荷分布较均一;得到的蛋白晶体为孪晶,分辨率约为8埃。结论该抗体的纯度达到结晶要求,以其理化性质为基础,初步筛选出了结晶条件,为其结构和功能的研究奠定了基础。     

生物医药产业概述

全球医药产业增速变缓促使国际医药巨头加大对生物医药产业的投资。生物医药在全球范围内掀起研发热潮,中国作为新兴市场的主力,表现尤为抢眼。抗体、疫苗、重组蛋白三大主力生物医药产品在销售额和上榜数量上不断刷新全球畅销药品榜单。我国生物医药产业起步虽晚,但已获长足进展。该文从生物医药研发、市场、企业层面报告了国内外生物医药产业现状。     

龙血素A和龙血素B的酶联免疫检测方法的建立

建立了龙血素A和龙血素B间接竞争酶联免疫吸附分析方法,并用于测定龙血素A和龙血素B的含量。分别合成龙血素A和龙血素B人工抗原制备其多克隆抗体,建立二者间接竞争酶联免疫吸附分析方法并评估其分析性能。结果表明:抗龙血素A血清和抗龙血素B血清的效价分别达到8 000和30 000;龙血素A和龙血素B的最低检测限分别为3.9ng·mL-1和26.1ng·mL-1,批内精密度分别为CV≤10.7%和CV≤9.9%,批间精密度分别为CV≤11.5%和CV≤12.3%,回收率分别为87.4%~110.8%和109.8%~113.5%,与各自的6种类似物的交叉反应率最大分别为9.20%和3.64%,在4种龙血竭药物中的最大含量和最小含量分别相差4.05倍和3.57倍。龙血素A和龙血素B间接竞争酶联免疫吸附分析方法的检测精密度、准确度和特异性均较好,可快捷有效地用于药物检测和分析。     

神经精神性系统性红斑狼疮相关自身抗体的研究进展

神经精神性系统性红斑狼疮(NPSLE)的发病机制目前普遍认为是直接或间接的多种免疫机制作用的结果。NPSLE发病的不同表现形式与多种自身抗体相关,可能存在以下几种相关自身抗体:抗神经元抗体、抗磷脂抗体、抗NR2抗体、抗核糖体P蛋白抗体、抗微管相关蛋白2抗体、抗内皮细胞抗体、抗胶质原纤维酸性蛋白抗体。这些自身抗体可能成为提示或预测NPSLE的特异标记物,值得进一步探讨和证实。     

中和抗体和细胞免疫在病毒疫苗有效性评价中的相互关系

在病毒疫苗有效性评价中,中和抗体和细胞免疫是相辅相成的两个方面。但是,因为疫苗种类不同,针对不同病毒,其诱导中和抗体和细胞免疫的机制也不同,因此,对疫苗有效性评价尚无统一的标准。然而,用科学的方法检测疫苗诱导的中和抗体和细胞免疫,针对不同的病毒疫苗建立科学有效的检测标准,对疫苗有效性评价及发展均有重要意义。本文就上述问题探讨中和抗体和细胞免疫在病毒疫苗有效性评价中的相互关系。     

抗体重链轻链可变区连接条件的优化

采用重叠延伸PCR(SOE-PCR)法拼接VH、Linker、VL,优化了SOE-PCR中模板量、引物量、退火温度及DNA聚合酶量。确定了优化的连接条件为:50μL反应体系中,SfiI-VH-Linker-232ng,Linker+-VL-NotI 200ng,于64.8℃退火,7个循环后,各加入上下游引物1.5μL(10μmol·L-1),再另加PrimeSTAR HS DNA Polymerase 0.5μL,于62.0℃退火,扩增25个循环。在改进后的连接条件下,可获得高纯度、高丰度的扩增产物,利于抗体库的多样性。