鸡蛋抗体的研究进展及其抗SARS病毒的可行性分析

鸡蛋抗体，即鸡卵黄中的免疫球蛋白，简称IgY。由于其具有不与人类补体结合，不与蛋白A结合以及不与类风湿因子结合等的免疫学特性，目前已被运用于疾病诊断检测和防治中。因此，利用IgY研制“非典”病毒特异性抗体，以用于预防“非典”病毒引起的呼吸道感染和治疗肺部感染及清除肠道中的病毒、防止排泄物引起的二次感染的设想有可能实现。本文就对鸡蛋抗体的研究进展及其抗SARS病毒的可行性作一分析、综述。     

我国科学家发现人感染H7N9致病新机制

<正>据军事医学科学院通报,该院微生物流行病研究所周育森研究员团队联合其他团队进行科研攻关,发现人感染H7N9禽流感病毒一种新的致病机制:H7N9病毒可导致人体一类免疫蛋白分子——补体系统的过度激活,从而引发急性肺损伤。他们根据这一发现,采用新的治疗策略,即通过一种针对过敏毒素C5a的抗体药物来调节补体的分子表达水平,     

抗志贺氏菌IgY的提纯及建立间接ELISA检测志贺氏菌

采用水稀释法提纯抗志贺氏菌IgY,检测10mg/mL纯化抗志贺氏菌IgY的效价为1∶320,并以此IgY为基础建立间接ELISA检测志贺氏菌,测定志贺氏菌纯培养液的检出限为105～106cfu/mL。对蜡样芽孢杆菌等10株不同菌株的检测结果表明,该方法对志贺氏菌有明显的检测特异性,对所测定的其它菌株无交叉反应。     

酶联免疫吸附法快速检测畜禽产品中西马特罗药物残留

为建立高效的西马特罗(Cimaterol, CIM)检测方法,试验用以重氮化法合成的西马特罗完全抗原免疫新西兰大白兔,提取兔脾细胞总RNA,反转录合成cDNA第一链,设计兼并引物,扩增兔源抗体重链可变区(VH)和轻链可变区(VL),通过45 bp的连接肽(Linker)连接成VH-Linker-VL并大量扩增;利用噬菌体表面展示技术将单链抗体(ScFv)片段与噬菌体展示载体pCANTAB-5e连接,电转化至大肠杆菌TG1感受态细胞,得到兔源噬菌体ScFv抗体库。通过聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)判断是否偶联成功,用紫外扫描(UV)及基质辅助激光解析串联飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)测定人工抗原的偶联比。将富集的抗体库侵染对数期大肠杆菌进行抗体库滴度测定合成抗体库的质量进行鉴定,对抗体库进行三轮淘选,取最优的CIM-ScFv进行氨基酸序列分析。结果表明：CIM-BSA及CIM-OVA偶联比分别为8:1及10:1,CIM-BSA免疫原免疫新西兰大白兔,间接ELISA测得免疫血清校价为1:32000,免疫血清半数抑制浓度为9.77 ng/mL, 曲线的拟合度为0.997。抗西马特罗兔源噬菌体ScFv免疫库的插入率为92%,库容为1×10_¹⁰ pfu,多样性为83.3%,经过4轮淘选,获得一株与CIM有结合活性的噬菌体ScFv菌。以上结果表明西马特罗完全抗原的合成效果良好,可用于建立西马特罗检测方法,兔源噬菌体抗体库为快速获得CIM单链抗体奠定基础,为西马特罗快速检测提供新思路。     

新冠病毒疫苗与单克隆中和抗体各期临床试验设计及评价概述

2019冠状病毒病（COVID-19）仍在全球蔓延,给公共卫生和全球经济带来了巨大负担。疫苗在控制病毒传播和降低死亡率方面发挥着重要作用。此外,单克隆病毒中和抗体亦可降低病毒载量,改善症状,防止病情加重导致住院。目前约有数百项有关COVID-19疫苗及单克隆中和抗体的临床试验正在进行中,疫苗侧重于疾病的预防,而中和抗体侧重于疾病的治疗。两者临床试验的开展遵循不同的技术指导原则进行,在研究目的、试验设计、试验实施、观察要点及结果评价中存在着较大差异,本文概述两者异同点,为新药研发及临床研究人员参考。     

重组鲈鱼生长激素的分离纯化及抗体制备

用IPTG诱导鲈鱼生长激素基因工程菌E.coli.RV308,使重组鲈鱼生长激素得以表达并分泌到周质空间,利用渗透休克法从菌液中提取间质蛋白,经DEAE-SepharoseCL-6B、矣丙烯酰胺凝胶电泳及SephadexG-75纯化后得到单一电泳纯的重组鲈鱼生长激素,并将此激素作为抗原制备抗体,可应用于鱼类血液中生长激素含量的测定。     

嵌合抗CD20抗体Fab‘片段三维结构的同源模建

分别以抗CD20Fab‘轻链和Fd段的氨基酸一级序列为探针,在PDB数据库中搜寻与其同源性高的蛋白储备参考蛋白,利用Insight II/MSI的同源蛋白质结构模建系统（homology)在SGI计算机图形工作站上模建轻链和Fd段的三维空间结构后,搭建成抗CD20嵌合抗体片段Fab‘的空间构象,并对模建蛋白进行分子力学和分子动力学优化。对优化后的模建蛋白的合理性验证显示,模建蛋白的三维结构是合理而可信的。     

重组鲍鱼肌肉脯氨酰内肽酶的性质研究

为研究皱纹盘鲍（Haliotis discus hannai）中脯氨酰内肽酶（Prolyl endopeptidase,Hdh-PEP)的酶学特性与结构特性,利用基因工程技术重组并在大肠杆菌中高效表达了皱纹盘鲍PEP。原核表达的Hdh-PEP分子量为85 kDa,在pH2～6、温度20～60 ℃条件下,Hdh-PEP的表面疏水性明显升高。氨基酸序列同源性分析结果表明,Hdh-PEP催化结构域中有三个高度保守的氨基酸序列:Seq 1:K-D-G-T-K/R-I-P、Seq 2:Y-G-Y-G-G-F和Seq 3:I-R-G-G-E-Y/F。酶动力学研究表明,Hdh-PEP的米氏常数K_m为5.32 μmol/L,催化常数k_cat值为15.7 s?1。PEP的特异性抑制剂SUAM-14746和ZPP对Hdh-PEP酶活力具有强抑制作用,丝氨酸蛋白酶抑制（PMSF）对Hdh-PEP酶活力也有较大程度的抑制作用。本实验制备了高特异性抗Hdh-PEP多克隆抗体,可检测鲍鱼肌肉中天然PEP的存在情况。Hdh-PEP的体外高效表达和特异性多克隆抗体制备为后续深入研究Hdh-PEP的性质提供了重要参考。     

抗玉米赤霉烯酮单克隆杂交瘤细胞系的建立及单抗生产

为快速检测食品中的玉米赤霉烯酮 (Zearalenone以下简称ZEN) ,建立了抗ZEN的单克隆杂交瘤细胞株。用ZEN BSA偶联物免疫 8～ 10周龄雌性BalB c小鼠后 ,取脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞Sp2 0融合 ,经过 4～ 5次亚克隆建立了稳定分泌抗ZEN抗体的杂交瘤细胞株 ,分别命名为Z2A4、Z8D6。将上述 2种杂交瘤细胞分别注入BalB c小鼠腹腔 ,获得含抗ZEN单克隆抗体的腹水。将腹水用饱和硫酸铵盐析法纯化 ,得到Z2A4、Z8D6单克隆抗体。经鉴定 ,其亚类为IgG1,抗体腹水效价Z2A4和Z8D6分别为 1∶1 6× 10 6和 1∶3 2× 10 6;分子量均为 15 0 0 4 0 (15 0kD) ;参考工作浓度分别为1∶4 0 0 0 0和 1∶10 0 0 0 0 ;纯化后抗体IgG含量分别为 34和 39mg ml ;抗体与其它霉菌毒素无交叉反应(交叉反应率 <1% ) ,具有较高特异性 ;抗体亲和力常数Z2A4和Z8D6分别为 5 5 2× 10 8和 4 6 8×10 9mol L。     

抗哮喘免疫乳研究初报

哺乳动物的乳汁是机体免疫协调作用分泌产物之一，新生动物可以通过乳中的抗体获得被动免疫抵抗病原微生物的感染。因此，我们也可以应用乳中的特异抗体预防和治疗某些疾病。本课题组用气管炎疫苗免疫妊娠后期奶牛抗哮喘的免疫乳，并用ELISA法测定了特定抗体的含量。