响应面法优化超压肠杆菌利用黄水生产微生物絮凝剂

以黄水为培养基，利用单因素及响应面试验研究黄水的稀释度、外加碳氮源、无机盐、接种量、pH值等因素对超压肠杆菌（Enterobacter nimipressuralis）产微生物絮凝剂的影响。结果表明，最佳黄水培养基组成为：初始pH值7.0，接种量6%，黄水体积分数17%，葡萄糖添加量7.5 g/L、尿素添加量1.5 g/L、KCl添加量3.0 g/L。在此优化条件下，絮凝剂的絮凝率可达到84.35%。     

一株产胞外多糖的大豆内生菌SE01的分离鉴定及生物学特性

微生物胞外多糖（Exopolysaccharide,EPS）是一种重要的生物资源，近年来内生菌的EPS备受关注。为探索更多产EPS的菌种资源，进一步挖掘大豆内生菌资源，本研究从大豆种子中筛选出EPS产量最高的菌株SE01，并对其进行形态学和分子学鉴定、生物学特性（温度、pH、转速、蔗糖耐受性、NaCl耐受性）以及生理生化研究。实验结果显示，在发酵48 h后，菌株SE01的EPS产量最高为0.63 g/L；菌株SE01菌落为圆形，呈乳白色，边缘光滑，表面有光泽且粘稠；在显微镜下观察革兰氏染色后的菌体呈粉红色的短杆状，为革兰氏阴性菌；生理生化实验和16S rDNA鉴定结果显示，菌株SE01为阴沟肠杆菌（Enterobacter cloacae），并命名为Enterobacter cloacae SE01;Enterobacter cloacae SE01最适生长条件为温度30℃、pH5、转速120 r/min，该菌株对蔗糖耐受高，但对NaCl耐受性较低，增大NaCl浓度能抑制其生长。本研究结果为大豆内生菌源EPS的开发和应用提供数据支持。     

3种肠杆菌科细菌的耐药性变迁

目的研究大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、阴沟肠杆菌的耐药性变迁。方法对2007～2009年临床分离的大肠埃希菌(645株)、肺炎克雷伯菌(260株)和阴沟肠杆菌(150株),采用纸片扩散法进行体外药敏测定,并依据美国临床实验室标准化协会(Clinical and Laboratory Standards Institute,CLSI)规定的标准,分析3种肠杆菌科细菌的耐药性变迁。结果大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、阴沟肠杆菌对氨苄西林的耐药率均较高;对头孢他啶的耐药率低于头孢噻肟;与2007年比较,2008年和2009年对头孢吡肟的耐药率明显增长;未发现对亚胺培南耐药菌株的产生。结论细菌耐药性不断增强已成为临床治疗面临的重要难题,应从耐药监测、医院感染控制、合理使用抗生素等多方面努力,减少细菌耐药性的产生。     

产生物膜菌株的分离鉴定及其产膜特性分析

目的:在含异噻唑啉酮类杀菌剂的腐败变质样品中分离筛选能够产细菌生物膜的菌株,并对其产膜特性进行初步研究。方法:采用平板划线法分离纯化菌株;采用微孔板结晶紫染色法筛选产生物膜菌株;通过生理生化特征和16S rDNA分子进化分析鉴定菌株种属;运用激光共聚焦电子显微镜观察分离得到的菌株在玻璃片表面形成生物膜情况,包括胞外多糖及生物膜内部活、死细菌分布;最后再次采用微孔板结晶紫染色法研究培养时间、pH值和不同碳源对该菌产生物膜的影响。结果:分离筛选出一株产生物膜菌株BF-17,并且该菌株被鉴定为阴沟肠杆菌(Enterobacter cloacae);BF-17分别在96 h和pH为5时产生物膜量最高;静置培养4 d后,BF-17在玻璃片表面能产生典型的生物膜形态和结构;同时该菌株利用α-乳糖和D-果糖产生物膜能力最高,而利用柠檬酸产生物膜能力最低。结论:菌株BF-17产生物膜能力稳定,可以作为生物膜深入研究的材料;同时,BF-17的产膜能力易受外界环境条件的影响。     

蓝光对阪崎肠杆菌的杀菌及机制研究

本文以食源性致病菌阪崎肠杆菌为对象,研究了医学领域抗细菌感染蓝光的杀菌作用,并首次对其杀菌机制进行了探究。结果表明,当蓝光剂量大于30 J/cm~2时,对阪崎肠杆菌具有显著杀菌作用,照射剂量达240 J/cm~2时,杀菌率超过8 log 10 CFU。亚致死剂量(0～30 J/cm~2)蓝光照射下,单线态氧(~1O_2)探针SOSG开始出现绿色荧光信号,显示细胞内1O2涌现并造成细胞外壁微小孔洞;活性氧物质(ROS)也迅速产生并逐渐增大至5 a.u.;随后脂质氧化标志物丙二醛(MDA)逐渐增加,显示细胞内产生脂质氧化。上述胞内物质变化导致细胞外膜受损,30 J/cm~2蓝光下细胞外膜渗透性增加了48.96%;此外脂肪酰基谱测定揭示,不饱和脂肪酸C18:2,C16:1和C18:1含量减少并逐渐消失,很可能是细胞外膜损伤的重要原因之一。本研究确证了蓝光下细菌胞内~1O_2、ROS及脂质氧化物的动态变化,更重要是的,揭示了细胞外膜损伤是蓝光杀菌的重要方式之一,因为细菌脂质尤其是不饱和脂肪酸是蓝光杀菌重要靶标,本研究将有助于蓝光杀菌机制的深入探究。     

阪崎克罗诺杆菌标准物质研制

目的采用冷冻干燥技术制备均匀性和稳定性符合要求的阪崎克罗诺杆菌标准物质,用于实验室内部质量控制。方法对使用菌株阪崎克罗诺杆菌(45403)的生化特征、16SrRNA序列、质谱特征进行确认。采用冷冻干燥技术制备含量为103 CFU/样品的菌球。参照CNAS-GL29《标准物质/标准样品定值的一般原则和统计方法》,对20件样品进行均匀性检验,采用单因素方差分析对结果进行统计分析。将样品分别于-20、2、37℃条件下保藏,对其储藏稳定性和运输稳定性进行评价。组织5家实验室进行协同标定。使用20件婴儿配方乳粉作为基质对阪崎克罗诺杆菌标准物质的使用效果进行确认。结果阪崎克罗诺杆菌(45403)生化鉴定结果、16SrRNA序列的NCBIGenebank比对结果、质谱鉴定结果均为阪崎克罗诺杆菌(Cronobacter sakazakii)。采用单因素方差分析进行均匀性检验, F=1.067, P=0.442,符合标准物质的要求。于-20℃保藏170 d,于25、37℃保藏14d后,样品仍然稳定。经5家实验室协同标定,样品含量均为103 CFU/样品。20件婴儿配方乳粉作为基质加入阪崎克罗诺杆菌标准物质进行检验,均可以检出。结论阪崎克罗诺杆菌(CMCC45403)的生化特征、16SrRNA序列分析、蛋白飞行质谱特征均符合克罗诺杆菌属的典型特征。均匀性、储藏稳定性、运输稳定性及适用性的验证实验结果均符合标准物质的要求。     

阴沟肠杆菌定量标准物质的研制

采用真空冷冻干燥法和滤膜法定值技术,研制了球状的阴沟肠杆菌定量标准物质。经保护剂配方及冻干程序参数优化后,阴沟肠杆菌的平均存活率达51%,形状均匀一致、外观光滑无塌陷,能完全复水速溶。通过结晶紫中性胆盐琼脂培养基平板计数法考察均匀性和稳定性,证明该标准物质均匀性良好,-80 ℃至少可稳定保存6个月。该标准物质由6家实验室采用滤膜法联合定值,经不确定度评定,标称值为（2.0±0.1）log10 (cfu/瓶),相对扩展不确定度为10%(k=2)。标准物质中阴沟肠杆菌活菌数含量水平为10² cfu/瓶,可以直接溶解使用,无需稀释,使用方便,同时减少了测量不确定度来源。     

分段调控pH值对阴沟肠杆菌 WL1318发酵棉秆水解糖液产氢的影响

为有效调控阴沟肠杆菌（Enterobacter cloacae）WL1318发酵棉秆水解糖液产氢的过程,研究了分段调控pH值对该菌株发酵棉秆水解糖液产氢过程中发酵液pH值、生物氢合成、棉秆水解糖液中葡萄糖和木糖利用、菌株生长的影响。结果表明,分段调控pH值避免了发酵液pH值的急剧下降。分段调控pH值处理的产氢潜力P均高于未调控处理的,48 h时调控pH值能使发酵72 h的日均产氢量较未调控处理的提高约1.5倍;24 h调控pH值和48 h调控pH值处理的累积产氢量相较未调控处理的分别提高约15%和30%。分段调控pH值对阴沟肠杆菌WL1318发酵棉秆水解糖液产氢过程中的菌体生长有较大影响,使其在调控时间点后达到活菌数峰值,且菌体生长OD600 nm值在调控时间点后均高于未调控处理的。     

恒温荧光核酸检测仪检测2种食源性致病菌的方法验证

目的以传统国标培养法作为参考比对方法,考察恒温荧光核酸检测仪(constant temperature fluorescent nucleic acid detector)检测食品(自然食品和加标食品)中食源性致病菌如阪崎肠杆菌和单核细胞增生李斯特氏菌的一致性。方法通过对食品中阪崎肠杆菌和单核细胞增生李斯特氏菌国标培养法和恒温荧光核酸检测仪方法检测结果的比对,考量后者方法的灵敏度、特异性、假阳性率、假阴性率和准确度。结果恒温荧光核酸检测仪检测食品中阪崎肠杆菌和单核细胞增生李斯特氏菌的灵敏度和特异性都是100%,假阴性率为0;假阳性率为0。结论恒温荧光核酸检测仪方法特异性强、准确度高、无一例漏检。     

原儿茶醛对阪崎克罗诺肠杆菌的抑制作用及机理

本文通过检测原儿茶醛（PC）对阪崎克罗诺肠杆菌的最小抑菌浓度及对生长曲线的影响,分析其抑菌效果;利用场发射扫描电镜,观测PC对阪崎克罗诺肠杆菌细胞形态的影响;利用多种荧光探针检测PC对细菌细胞膜完整性、胞内pH、胞内ATP浓度、膜电位的作用,探明其可能的抑菌机理。结果表明：PC对阪崎肠杆菌的最小抑菌浓度为0.625~1.25 mg/mL,PC使细菌生长速率和最大菌体浓度显著减小。扫描电镜结果表明PC使菌体干瘪皱缩,丧失原本的棒状杆菌形态。同时,浓度为2MIC和4MIC的PC使细胞膜完整性分别降低49.0%和50.7%,使胞内pH由6.87降低为5.67和4.47,使胞内ATP浓度由1.824 μmol/L降低为0.01 μmol/L以下,并且使细菌细胞膜出现去极化。综上所述,PC对阪崎克罗诺肠杆菌有良好的抑制效果,其可能的抑菌机理是影响细胞膜的通透性,原儿茶醛有潜力作为天然抑菌剂在婴幼儿食品或其他食品中使用。