高粱糠不同存在形态酚类物质的AB-8大孔树脂纯化及对红细胞氧化溶血的保护作用

本文对提取得到的高粱糠不同存在形态酚类物质进行AB-8大孔树脂纯化,之后进行高效液相色谱分析及抗AAPH氧化溶血效果的测定。经AB-8大孔树脂纯化后,总酚含量依次为游离酚、束缚型酯型酚、束缚型苷型酚、可溶性苷型酚、可溶性酯型酚。而HPLC的分析结果显示,所检测到的18种酚类化合物的总量顺序依次是:束缚型酯型酚游离酚束缚型苷型酚可溶性酯型酚可溶性苷型酚。200μg/m L的游离型、束缚型和可溶型酯型酚可使AAPH溶血率降至约10%,接近阴性对照组,而可溶性苷型酚仍为28.84%。五类酚类物质的预处理使得AAPH损伤的人血红细胞内的MDA含量减少,GSH/GSSG升高,使红细胞恢复到正常状态;SOD、GSH-Px和CAT酶活力较弱的红细胞也受到了保护。综上,经AB-8大孔树脂纯化后的高粱糠不同存在形态酚类物质可以保护人血红细胞免受AAPH的损伤,其细胞内抗氧化活性与总酚含量和酚类化合物的组成有联系。     

重组过氧化物酶A4-Prx酶学特性及其降解DDGS中ZEN的研究

初步研究了一种重组过氧化物酶Acinetobacter sp.SM04(A4-Prx)的酶学特性,并先对pH、温度和H2O2浓度对过氧化物酶A4-Prx活性的影响进行单因素优化,然后采用正交实验设计对A4-Prx降解玉米酒糟中玉米赤霉烯酮的反应条件进行了优化。结果表明,重组过氧化物酶A4-Prx不含有血红素,其过氧化物酶活性的最适pH、温度和H2O2浓度分别为pH8.5、75℃、25mmol/L;A4-Prx降解DDGS中ZEN的最佳反应条件为:H2O2浓度40mmol/L,料液比1:2(g/mL),温度70℃,时间9h,且在该条件下ZEN降解率为99.2%±0.2%。     

过氧化物酶A4-Prx在毕赤酵母中的优化表达

以来源于不动杆菌Acinetobacter sp.SM04的过氧化物酶A4-Prx的毕赤酵母工程表达菌株GS115/pPIC9K-A4-Prx为研究对象,优化其表达培养条件以提高该菌株对于目的蛋白A4-Prx的表达量。本论文首先研究了培养基成分与诱导条件对表达量的影响,结果表明培养基的pH、甘氨酸浓度和诱导温度对外源蛋白的产量均有显著影响。采用Box-Behnken设计,利用Design Expert软件进行二次回归分析得到了目的蛋白的最优表达条件为:诱导培养基pH 7.0、甘氨酸浓度为0.11%及诱导温度30℃。在此优化条件下重组蛋白的理论表达量达129.87 mg/L,约为未优化下的2倍,实验验证实际表达量达128.94 mg/L,且重组表达的过氧化物酶A4-Prx对酒糟蛋白饲料(DDGS)和食品中的玉米赤霉烯酮毒素(Zearalenone,ZEA)具有高效降解能力。本研究为过氧化物酶的工业化高密度发酵奠定了基础,推动生物降解ZEA研究的进展。     

玉米赤霉烯酮生物脱毒及关键酶作用机理的研究进展

玉米赤霉烯酮(Zearalenone,ZEN,ZEA)是由镰刀菌属产生的一类具有类雌激素生物活性的霉菌毒素,广泛存在于玉米、小麦等谷物及其制品中。本文综述了各类微生物降解ZEN的研究现状,重点比较其脱毒效率及产物毒性,尤以不动杆菌(Acinetobacter sp.SM04)、粉红粘帚菌(Gliocladium roseum IFO 7063)、毛孢子菌(Trichosporon mycotoxinivorans)和假单胞菌(Pseudomonas sp.ZE-1)研究较为全面,进一步总结了ZEN降解的关键酶及其作用机制,为微生物降解玉米赤霉烯酮的研究提供依据,也为大环内酯化合物和芳香族化合物的降解开拓更广泛的途径。     

泡盛曲霉发酵麦麸过程中酚类物质含量的变化与三种酶活性的相关性

本研究以小麦麦麸为原料,分别采用3株泡盛曲霉(分别为GIM3.266,GIM3.4,GIM3.5)进行连续8天的固态发酵,每天分别提取发酵过程中小麦麦麸中不同存在形态酚类物质并测定其含量,同时,每天测定3株泡盛曲霉在发酵过程中木聚糖酶、纤维素酶以及阿魏酸酯酶的活性变化。结果表明,与未经发酵的麦麸相比,经泡盛曲霉发酵后的麦麸游离型酚类物质的含量显著增加,总酚含量可高达11561.30μg/g麸皮,比发酵前的麸皮总酚提高了169%;另外,酶活力的结果表明:纤维素酶活力在发酵前三天显著增大,其活力最高可达156.70 U,木聚糖酶活力随总酚释放量的增加而增加,最高可达34123.00 U,阿魏酸酯酶活力在发酵中后期达到顶峰,最高可达2642.60 U。总体而言,麦麸发酵过程中酚类物质的释放量与木聚糖酶和阿魏酸酯酶的酶活力呈正相关,说明发酵后麦麸中酚类物质提取量的显著增加与这两种酶密切相关,这两种酶活力高的泡盛曲霉菌株,更有利于释放麦麸中的酚类物质。     

荔枝果渣可溶性膳食纤维去结合酚前后结构和功能性质的比较

该研究以荔枝果渣中的可溶性膳食纤维（Soluble Dietary Fiber,SDF）为原料,探讨碱水解法去除其中的结合酚后SDF结构和功能性质的变化。结果表明荔枝果渣可溶性膳食纤维中结合酚含量为4.53 mg GAE/g。扫描电镜结果表明去除结合酚后的SDF结构变得较为松散;傅里叶红外光谱的结果表明SDF的主要成分为果胶和半纤维素,去除结合酚后的SDF未发生官能团上的转化。单糖组成和流变特性分析结果表明SDF和去除结合酚后的SDF单糖组成相同,且都为假塑性非牛顿流体;但相同剪切速率下,去除结合酚后的SDF表观黏度大为降低,这与其更加松散的结构有关。相同浓度下,去除结合酚后SDF的DPPH自由基清除能力降低了15.06%~29.02%,ABTS阳离子自由基清除能力降低了42.06%~78.98%。此外,去除结合酚后SDF对3种益生菌的体外增殖作用也显著降低。上述结果证实,结合酚与荔枝果渣可溶性膳食纤维的生物活性息息相关,为荔枝果渣的开发利用提供理论基础。     

酶解丝素蛋白制备ACE抑制肽的研究

本研究首次探讨利用Alcalase酶解丝素蛋白制备高活性ACE抑制肽.以水解度为主要评价指标,研究了温度、浓度、pH、加酶量以及反应时间对酶解反应的影响.分析了不同水解度下的酶解产物与ACE体外抑制活性、肽得率和蛋白回收率的关系.确定了制备ACE抑制肽的最佳酶解反应DH值为17.12％,此时所得丝素蛋白肽的肽得率为50...     

Alcalase 2.4L催化牛骨胶原蛋白水解反应及其动力学研究

对碱性蛋白酶Alcalase 2.4L水解牛骨胶原蛋白的工艺以及动力学特征进行了研究.探讨底物浓度、酶量、温度、pH、时间等因素对胶原蛋白水解度的影响,研究确定了碱性蛋白酶Alcalase 2.4L水解牛骨胶原蛋白的最佳水解条件为:在pH8.5,60℃,底物浓度为80g/L,加酶量为40μL/g条件下水解3h,水解度可达13.5%,优于其他蛋白酶.根据所建立的pH-stal酶解体系确定了Km为1.6362mol/L,Vmax为0.3444mol/L·h,为更有效地利用胶原蛋白资源奠定了理论基础.     

亚临界萃取琥珀精油工艺优化及活性分析

以琥珀为原料,采用亚临界流体萃取法提取琥珀精油。基于琥珀精油的得率,探究亚临界流体萃取琥珀精油的最佳工艺,通过GC-MS技术分析琥珀精油中的主要成分和相对含量,并进行体外抗氧化分析和酪氨酸酶抑制试验。结果表明,液料比2.1:1（mL:g）、萃取温度58 ℃、萃取时间51 min为最佳工艺条件,此工艺条件下精油的提取率为1.61%;GC-MS分析显示,从琥珀精油中分离出40个峰,共鉴定出30种化合物,其中单萜类化合物含量最高,主要包括对伞花烃（29.39%）、左旋龙脑（18.02%）、葑醇（8.46%）、左旋樟脑（7.12%）、桉叶油醇（6.40%）等物质,是琥珀精油独特香气的主要成分;琥珀精油清除DPPH自由基和ABTS+ 自由基的IC50 值分别为12.66 mg/mL和2.91 mg/mL,呈现较强的抗氧化活性;琥珀精油对酪氨酸酶的抑制属于非竞争性抑制,IC50值为1.13 mg/mL,其美白活性高于同等浓度的熊果苷。     

酿酒酵母S.cerevisiae YQ-7的高密度发酵

研究了酿酒酵母S.cerevisiae YQ-7发酵的最佳培养基组成;通过单因素试验优化碳源和氮源的添加量,响应面法优化培养基中的碳氮比,得出最佳发酵培养基配方:蔗糖76.31g/L,酵母浸膏33.75g/L,酸水解酪蛋白16.00g/L,硫酸铵0.5g/L,硫酸镁1.0g/L,磷酸二氢钾2.6g/L,甘氨酸2g/L。同时,对补糖策略进行了研究,确定补糖工艺为自发酵16h开始补糖,补糖量70%~80%,每隔12h补糖一次,50h终止发酵,生物量为49.47g/L。