甜菜碱保护细胞免受AAPH损伤的研究

为了评价甜菜碱的抗氧化活性,本文研究了甜菜碱对受AAPH诱导产生的自由基损伤的红细胞和肝细胞的影响。结果显示当甜菜碱的浓度达到200 mmol/L时,AAPH诱导的红细胞氧化溶血率降低了54.19%,MDA降低了4.32 nmol/mg;电镜下阳性损伤组红细胞胞膜皱缩明显、棘突较多、呈星状改变,而保护组胞膜只是略有皱缩,恢复至阴性组正常细胞形态;同时经甜菜碱处理,阳性损伤组红细胞胞内ROS含量降低了57.16 IU/mg,SOD、CAT、GPx酶活分别降低了9.84 m U/mg、13.91 m U/mg和43.59 m U/mg,并与阴性对照组无显著性差异;在正常肝细胞中,50 mmol/L甜菜碱使AAPH损伤的细胞内MDA下降了0.21 nmol/mg,SOD、CAT酶活则分别下降了173.21 U/mg和53.9U/mg,与阴性组正常组肝细胞无显著性差异。综上分析,甜菜碱能很好的保护细胞免受AAPH产生的自由基的损伤,说明甜菜碱具有良好的抗氧化作用。     

高粱糠不同存在形态酚类物质的AB-8大孔树脂纯化及对红细胞氧化溶血的保护作用

本文对提取得到的高粱糠不同存在形态酚类物质进行AB-8大孔树脂纯化,之后进行高效液相色谱分析及抗AAPH氧化溶血效果的测定。经AB-8大孔树脂纯化后,总酚含量依次为游离酚、束缚型酯型酚、束缚型苷型酚、可溶性苷型酚、可溶性酯型酚。而HPLC的分析结果显示,所检测到的18种酚类化合物的总量顺序依次是:束缚型酯型酚游离酚束缚型苷型酚可溶性酯型酚可溶性苷型酚。200μg/m L的游离型、束缚型和可溶型酯型酚可使AAPH溶血率降至约10%,接近阴性对照组,而可溶性苷型酚仍为28.84%。五类酚类物质的预处理使得AAPH损伤的人血红细胞内的MDA含量减少,GSH/GSSG升高,使红细胞恢复到正常状态;SOD、GSH-Px和CAT酶活力较弱的红细胞也受到了保护。综上,经AB-8大孔树脂纯化后的高粱糠不同存在形态酚类物质可以保护人血红细胞免受AAPH的损伤,其细胞内抗氧化活性与总酚含量和酚类化合物的组成有联系。     

甜菜碱提高LO2细胞中抗氧化酶的表达水平

该研究探究了甜菜碱(BET)对人正常肝细胞LO2细胞中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)、过氧化氢酶(CAT)mRNA水平的影响及机制。使用实时荧光定量、蛋白质免疫印迹和酶联免疫吸附法检测细胞内抗氧化酶的mRNA水平,以及Nrf2-Keap1-ARE通路的相关指标。经不同浓度的BET处理12 h后,LO2细胞中SOD、GPx和CAT的mRNA水平显著提高,最高分别提高了1.08、0.51、0.88倍(p<0.05);经250μmol/L BET处理后,LO2细胞核中可与ARE区域结合的Nrf2蛋白水平和细胞内总的NRF2蛋白水平分别显著提高了1.21、0.80倍(p<0.05);经Nrf2蛋白抑制剂鸦胆子苦醇处理后,BET对三种抗氧化酶mRNA水平的提高作用完全丧失;进一步地分析表明,BET并未显著提高Nrf2蛋白的mRNA和磷酸化水平,但将Keap1的mRNA和蛋白质水分别降低了38.21%和49.15%(p<0.05)。这些结果表明,BET可通过降低Keap1的水平激活Nrf2-Keap1-ARE通路,进而提高抗氧化酶的mRNA水平。     

源于地龙蛋白的抗氧化肽鉴定与构效关系

为探究外源蛋白酶预酶解处理对地龙蛋白胃肠消化程度和胃肠消化后抗氧化活性的影响。该研究利用五种蛋白酶制备了不同的地龙蛋白酶解物,然后通过体外胃肠模拟消化探究这些酶解物的水解度、分子量分布和体外抗氧化活性的变化。五种蛋白酶酶解物中,碱性蛋白酶酶解物的水解度最高,为40.8%,其对DPPH、ABTS自由基的清除能力分别为27.36、175.46 μmol TE/g,ORAC值为0.70 μmol TE/mg。碱性蛋白酶酶解物经胃肠消化后的水解度、DPPH自由基清除率、ORAC值相比于地龙蛋白直接胃肠消化所得产物（EWP）分别提高了94.06%、72.21%及120.00%。GHEWP中鉴定出10 823条分子量<3 ku的肽,通过bioware.ucd.ie进行活性阈值评分筛选出活性评分最高的11个肽进行合成,验证活性,其中ATSGFFVY、HCFVLY、HLASGWY、HRYSDF、HYANMY的综合抗氧化能力较好,量子化学计算结果表明：ATSGFFVY、HCFVLY、HRYSDF、HYANMY的活性位点可能分别位于Tyr-8、Tyr-6、Tyr-3、Tyr-2上;HLASGWY的活性位点可能位于Trp-6上。该研究表明碱性蛋白酶预酶解可提高地龙蛋白的消化程度,增强其胃肠消化产物的抗氧化活性。     

预酶解对玛咖蛋白胃肠消化及免疫调节活性的影响

为探究不同蛋白酶预酶解对玛咖蛋白胃肠消化程度及消化产物免疫调节活性的影响,该研究选用中性蛋白酶、碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶、菠萝蛋白酶以及复合蛋白酶分别对玛咖蛋白进行预酶解,再经模拟胃肠消化得到五组消化产物。利用TNBS法、福林酚法等测定消化产物的得率、水解度、可溶性肽含量及游离氨基酸含量,再以小鼠巨噬细胞RAW 264.7为模型探究消化产物的免疫调节活性。结果表明,经五种蛋白酶的预酶解,玛咖蛋白消化产物的水解度、可溶性肽含量和游离氨基酸含量分别提高了35%、5%~16%及37%~92%,且消化产物促进巨噬细胞分泌TNF-α的作用无明显降低。经菠萝蛋白酶预酶解得到的消化产物的免疫调节活性最高,该消化产物含有15 154条分子量小于3 000 u的肽段;在经活性评分及分子对接预测的与TLR2和TLR4受体存在相互作用最强的10个肽段中,NPYPFFGFSI的免疫调节活性最高;HOMO分析结果表明该肽的活性位点位于酪氨酸上。上述结果表明预酶解可在不影响玛咖蛋白免疫调节活性的条件下提高玛咖蛋白的可消化性。     

甜菜碱对db/db小鼠糖尿病肾病损伤的作用

为探究甜菜碱对db/db小鼠糖尿病肾病损伤的保护作用,将7月龄db/db小鼠随机分为模型组(生理盐水),阳性对照组(脂必妥),甜菜碱低剂量组(200 mg/kg)、中剂量组(400 mg/kg)、高剂量组(800 mg/kg)。所有小鼠均饲以高脂饲料,以诱发糖尿病肾病(DN)模型。以甜菜碱连续灌胃6周后,进行肾组织病理学观察,并检测小鼠体重,血清中血尿素氮(BUN)、血糖(GLU),总胆固醇(TC),甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL)、转化生长因子-β1(TGF-β1)与肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的水平。结果显示,甜菜碱处理组与模型组相比,肾小球基底膜无明显增厚,细胞外基质、糖原物质沉积及纤维含量减少,蛋白管型和炎性细胞浸润基本消失,肾小管结构逐渐恢复正常,体重和BUN、GLU、TC、TG、LDL、TNF-α、TGF-β1水平均显著降低(P0.05),最高分别降低11.5 g、3.0 mM、5.3 mM、3.1 mM、0.42 mM、0.64 mM、21 ng/L、30 ng/L。表明甜菜碱对db/db小鼠具有降糖、降脂、改善肾功能的生理作用,能延缓或抑制糖尿病肾病微血管炎症过程。     

野葛根酸性多糖的结构鉴定及免疫活性

本文采用离子交换层析结合凝胶渗透色谱技术从野葛根的热水浸提液中分离纯化得到一种新型酸性多糖,鉴定了该多糖的结构特征,并初步探究了其免疫调节活性。结果显示,该酸性多糖是一种分子量约为12300 u且具有一定支链结构的葡聚糖,不具有三螺旋空间结构,其糖苷键类型为α-(1→4)和α-(1→4,6)。以小鼠巨噬细胞RAW264.7为实验对象,研究发现该酸性多糖能有效地刺激细胞分泌细胞因子NO、TNF-α和IL-6,进而体现出较强的免疫调节活性。     

荸荠皮多糖的理化性质及抗氧化活性

为探究荠皮多糖在食品领域的应用潜力,利用X射线衍射光谱分析、热重分析、Zeta电位分析、乌氏粘度测定法、红外光谱法等方法研究纯化的荸荠皮多糖WVP-1和WVP-2的结晶性、稳定性、粘度等理化特性,并结合细胞抗氧化实验和AAPH诱导的红细胞溶血实验评估两种多糖的抗氧化活性。结果表明,WVP-1和WVP-2的结晶区域较少,主要以无定型态存在,玻璃化温度分别为61.30和69.50 ℃,热分解温度分别为290.50和308.50 ℃,Zeta电位分别为9.60和-18.50 mV,特性粘度分别为5.33×10-3和3.80×10-2 mL/mg,果胶类多糖WVP-2的酯化度为15.00%。此外,在62.5~1000 μg/mL浓度范围内,WVP-1和WVP-2能有效抑制AAPH诱发HepG2细胞内活性氧水平升高,也能有效保护红细胞免受AAPH攻击发生氧化溶血。综上所述,WVP-2比WVP-1具有更好的稳定性、粘度和和抗氧化活性,并且WVP-2属于低酯果胶,可作为食品添加剂和功能活性成分应用于食品领域。     

东革阿里多糖对红细胞氧化溶血的保护作用

采用超声结合水提的方法提取东革阿里的多糖,通过L9(34)正交试验确定最佳提取条件。利用柱层析纯化得到一种含糖醛酸的新型多糖组分Ali-1;通过分子量检测和单糖组成分析对Ali-1进行基本结构表征;采用氧自由基吸收能力(ORAC)和人血红细胞溶血模型测定多糖的抗氧化活性,并同时测定红细胞内活性氧物质(ROS)、丙二醛(MDA)水平和过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)抗氧化酶活力的变化。结果表明:东革阿里多糖最佳提取条件为料液比1:40、浸提温度95℃、超声波破碎功率300 W、浸提时间2 h,最适条件下东革阿里的粗多糖得率为10.09%;Ali-1的平均分子量为14.3 ku,主要由木糖、阿拉伯糖、葡萄糖醛酸和半乳糖醛酸组成,其摩尔比为:4.43:1.10:1:1.14;Ali-1的QRAC值为302.48±2.71μmol Trolox/g,且Ali-1的预处理使得AAPH损伤的人血红细胞内的ROS和MDA水平降低,使红细胞恢复到正常状态;虽SOD、GSH-Px和CAT平均酶活力降低,但结果表明较弱的红细胞也受到了保护。综上所述,经分离纯化后的东革阿里多糖组分Ali-1可以保护人血红细胞免受AAPH的损伤,具有较好的抗氧化活性。