基因工程操作中易犯错误分析及对策

基因工程已经渗透到每个人的生活中，中学生物课中也普遍开展了基因工程实验。然而人们在实验中常常失败，却不知道为什么。已见文章中报道的都是成功案例，对失败避而不谈，所以分析易犯错误就非常重要，它让学生们在实验操作中避免走弯路。我们根据多年实践和指导研究生经验，总结并分析了基因工程实验中九方面易犯错误及应对策略，希望对相关人员有一些借鉴。     

PGPR菌肥在烤烟漂浮育苗中的应用

从烤烟根际分离得到2株细菌菌株A03和B04,平板测定对3种烟草病害烟草角斑病、青枯病和赤星病的病原菌有较强的拮抗作用,其中B04菌株具有解磷能力。将该2菌株扩大培养制成菌肥按1％的比例拌入育苗基质中应用于烤烟漂浮育苗,试验不间菌肥处理对烟苗的影响。结果显示：播种后27d,A03菌肥处理种子发芽率比对照显著提高53．1％;播种后39d,A03和B04菌肥处理种子发芽率分别比对照提高5．5％和1．8％。菌株A03和B04菌肥处理成苗素质显著高于对照,菌株A03菌肥处理烟苗茎高、茎粗、茎干重、根鲜重和根长分别比对照提高51．1％、19．8％、84．4％、50．3％和53．7％,叶色深绿;菌株B04菌肥处理烟清茎高、茎粗、茎干重、根鲜重和根长分别比对照提高24．2％、0．8％、71．9％、32．0％和34．7％。菌肥处理移栽成活率均为100％,对各种病害有较强的抗性,表明荫株A03和B04对烤烟具有较强的促生作用,是烤烟根际促生菌（PGPR）,用于烤烟漂浮育苗可明显提高种子发芽率、成苗素质和对烟草病害的抗性。     

生物素亚适量辨析

根据谷氮酸发酵培养液中生物素初浓度对谷氮酸发酵生产的影响,生物素是菌体生长的限制性基质等方面,认为“生物素亚适量”是菌体大量合成谷氨酸所需要的生物素浓度比菌体生长的需要量低,即为菌体生长需要的亚适量。     

不同类型植烟土壤微生物动态变化分析

为探讨皖南烟区4种主要植烟土壤(河滩地沙壤土、冲积沙壤土、水稻黏性土壤、冲积粉沙土河滩地)的土壤微生物特性及其在植烟生长时期的变化规律,对不同土壤的微生物在烤烟生长的4个时期进行了测定和分析。结果表明:4种土壤的微生物数量在烤烟生长各时期间均表现出差异性,且不同土壤间微生物数量在同一时期也不同,以旺长期差异最为显著。多种土壤微生物之间呈显著相关关系,对根际不同土壤微生物之间进行多元回归分析,发现多种微生物都受到其他微生物影响制约,彼此之间存在着协同发展。不同土壤类型在植烟生长时期的微生物变化规律也许可作为分析烤烟品质特色的一个新指标。      

平菇液体菌种摇瓶和发酵罐生长动力学模型的比较

作者选用玉米粉豆粕粉蔗糖液体培养基,分别采用摇瓶和40 L全自动机械搅拌通风发酵罐培养平菇天达300液体菌种,两种培养方式的茵丝体生长动力学模型均符合Logistic方程.摇瓶培养周期为8 d,最大比生长速率是0.050 h-2,茵丝体质量浓度是1.5001 g/dL,发酵罐培养周期是84 h,最大比生长速率是0.110 h-1,菌丝体质量浓度是1.4750 g/dL.应用发酵罐培养平菇天达300液体菌种更为高效.然而,摇瓶培养的液体菌种菌丝球直径小,单位体积培养液中菌丝球数量是发酵罐的1.4倍,可能与发酵罐培养过程中培养液的粘度下降速度快于摇瓶有关.     

不同陈化时期的烟叶酶活性变化及其同工酶酶谱分析

以3个烤烟品种为试验材料,对不同陈化时期烟叶中多酚氧化酶、过氧化物酶活性进行了分析,同时利用电泳技术研究了不同陈化时期烟叶中多酚氧化酶和过氧化物酶同工酶酶谱的变化。结果表明随着陈化时间的延长,多酚氧化酶、过氧化物酶活性呈现先升高后降低的趋势;多酚氧化酶和过氧化物酶同工酶酶谱在陈化过程中发生了较为显著的变化,表现为陈化3个月以前酶带较少,酶带的亮度较弱,陈化6个月时酶带最多,亮度最强,6个月以后酶带数量开始减少,亮度也有所下降。通过酶谱分析,也进一步验证了不同陈化时期烟叶中多酚氧化酶和过氧化物酶活性变化规律。     

雷氏木霉纤维素酶的结构

雷氏木霉(Trichoderma reesei)是目前研究最多的纤维素分解微生物。在其天然的纤维素分解酶复合体系中,已鉴定至少存在两种外切纤维二糖水解酶(exocellobio-hydrolase,CBH)(EC3.2.1.91),一些内切β—1,4—葡聚糖酶(endo—β—1,4—gluca—nase,EG)(EC3.2.1.4),和β—葡萄糖苷酶(β—gluco—sidase)(EC3.2.1.21)。最近通过基因工程技术,单克隆抗体和蛋白质理化分析等,人们对雷氏木霉的纤维素酶的结构及性质有了更进一步的认识。本文介绍的是关于雷氏木霉的纤维素酶的结构的一些最新研究进展。     

不同植烟土壤微生物数量调查研究

试验研究了皖南烟区4种不同植烟土壤类型(河滩地砂壤土、冲积砂壤土、水稻黏性土壤、冲积粉砂土)在烟叶生长期内的微生物种类、数量变化情况。结果表明,在根际及非根际土壤中,4种类型土壤中所含微生物种类都是以细菌、放线菌、真菌为主,占微生物总量的95%以上。在烟叶整个生育期,根际土壤中微生物总量大于非根际土壤。不同生态环境下,根际及非根际土壤中各类微生物数量及多样性指数各不相同,多种微生物数量与土壤养分含量呈正相关关系。     

应用植酸酶提高玉米酒精出酒率的研究

探讨了在玉米原料酒精发酵醪中添加植酸酶对酒精发酵的影响。在玉米原料酒精发酵醪中添加15u／g原料的微生物植酸酶，发酵成熟醪中酒精分和磷含量可达10．10％(v／v)和518．84μM，分别比对照提高5．54％和8．31％；原料出酒率可达39．81％，比对照提高6．96％。