零件厚度对激光相变硬化温度场的影响

以GCr15钢为例,采用有限单元法对激光相变硬化过程进行了数值模拟研究,建立激光相变硬化过程温度场的数学模型,分析了工件厚度及其下表面在自然散热和辅助水冷条件下对激光相变硬化温度场的影响。     

诱导条件下营养因子对粗糙脉孢菌合成漆酶的影响

研究了粗糙脉孢菌合成漆酶的一些重要影响因素，包括诱导剂种类、碳源、氮源。获得了粗糙脉孢菌合成漆酶的较适宜每件：以20g／L葡萄糖为碳源，2g／L硝酸铵为氮源，粗糙脉孢菌静止培养2-3d后，再加入放线菌酮（终浓度2．8μmol／L）诱导培养6—7d后产生的漆酶的最高酶活可达4-5u／mL。     

SNP标记用于猪肉产品DNA溯源

采用基于个体基因组DNA序列的差异而进行个体识别的DNA溯源技术,建立DNA溯源系统对肉产品的质量安全进行控制。在实验群体中(10个品种,233个个体)检测了33个新单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)标记的遗传多样性,通过杂合度计算筛选出6个SNP标记可用于猪肉产品DNA溯源。进一步在屠宰场采样进行溯源模拟实验,结果表明筛选的18个SNP标记(6个新SNP标记结合已有的12个SNP标记)能有效区分100头猪个体,随机抽取的10个个体的组织样品都能通过基因型比对找到对应的个体。本研究可为早日建立猪肉产品的DNA溯源系统提供一定的技术参考。     

利用FPLC技术建立重组碱性蛋白酶的快速纯化方案

在构建了以地衣芽孢杆菌为宿主的产碱性蛋白酶的工程菌BA0 71以后 ,为了给探索重组酶的性质及其稳定性奠定基础 ,利用快速蛋白液相层析 (FPLC)技术 ,建立了快速高效纯化碱性蛋白酶的方案。发酵液通过硫酸氨沉淀、DEAE A 5 0脱色及聚乙二醇浓缩得粗酶 ,再经过CM Sephadex C 5 0、Sephadex G 75柱层析后较好地得到了单一组份的重组碱性蛋白酶 ,酶纯度提高了 76.2倍。SDS PAGE显示重组碱性蛋白酶分子质量为 2 8ku。     

古细菌Pyrococcus furiosus高嗜热α-淀粉酶基因在大肠杆菌中的分泌表达

该文将大肠杆菌表达载体pKK223—3中含tac启动子的片段以BamH I、EcoR I酶切后接入表达载体pET28a中，构建成新的表达载体pE tac，通过PCR扩增获得p.furiosus胞外α-淀粉酶完整结构基因，接入PEtac中，转化大肠杆菌JM109。在IPTG诱导下，转化子周质中能测出明显酶活，证明Pyrococcus furiosus的胞外α-淀粉酶能在自身信号肽引导下分泌到大肠杆菌细胞周质中。重组酶最适pH为4．5，最适温度为95℃，重组酶经121℃保温1h，酶活仍能保持50%以上，性质与由p.furiosus自身分泌的胞外α-淀粉酶相似。     

地衣芽孢杆菌感受态细胞的诱导形成及其高效电转化方法

通过体外处理诱导地衣芽孢杆菌产生感受态性能 ,同时调整参数 ,建立了感受态细胞对质粒 pAPR的高效电转化方法 .当质粒DNA为 1.5 μg/mL、转化时电压为175 0V时 ,可得到 2 6 1个转化子 ,经鉴定均为阳性克隆子 .此为以芽孢杆菌为宿主进行高效电转化及为建立适合工业应用的分泌型表达载体提供参考 .     

根癌农杆菌介导酿酒酵母的遗传转化

根癌农杆菌（Agrobacterium tumefaciens）可以将它的Ti质粒的一段T-DNA序列转化到广泛的宿主细胞并能整合到宿主染色体中.作者利用根癌农杆菌转化系统成功地实现了产甘油假丝酵母（Candida glycerinogenes）乳清苷酸脱羧酶基因（Ura3）对酿酒酵母（Saccharamyces cerevisiae）W303-1A的Ura3缺陷遗传互补转化,转化率约为3.2个转化子/10^5个酵母细胞.通过转化子PCR和表型验证说明了T-DNA已经整合进入酵母染色体,并能够稳定地进行遗传表达.     

粗糙脉孢菌漆酶基因的克隆及在毕赤酵母中的初步表达

采用连续延伸PCR方法克隆到粗糙脉孢菌（Neurospora crassa）漆酶基因，并将其克隆到表达载体pPIC9k，重组质粒经线性化、电激转化Pichia pastoris KM71，部分阳性克隆的PCR结果表明：漆酶基因已整合到巴斯德毕赤酵母染色体上，重组菌经甲醇诱导后3～5d产漆酶量最高，为2-3U／mL。     

基于RPA-CRISPR-Cas12a和聚噻吩显色技术快速检测转基因植物外源基因CP4-EPSPS

目的 利用Cas12a附属切割机制进行精准识别重组酶恒温扩增（recombinase polymerase amplification,RPA）产物中的靶标,结合阳离子水溶性共轭聚噻吩(cationic water-soluble conjugated polythiophene, PMNT)与体系中单链DNA (single stranded DNA, ssDNA)的颜色变化实现快速检测转基因产品中耐除草剂草甘膦CP4-EPSPS抗性基因。方法 采用RPA-CRISPR-Cas12a精准识别系统中ssDNA与PMNT溶液颜色变化检测转基因产品中是否含有CP4-EPSPS基因,并根据颜色变化进行灵敏度及特异性分析。结果 167 bp的RPA引物进行扩增时,扩增体系为20 μL时条带最清晰;ssDNA的碱基数为15,Cas12a酶的浓度为0.28U为最优组合。进行RPA-CRISPR-Cas12a反应后,加入PMNT溶液,裸眼观察是溶液从红色变为黄色,紫外下照射下则颜色为橘红色变为橙黄色,最低检出限为45拷贝。结论 构建了一种基于PMNT颜色变化进行转基因产品的CRISPR-Cas12a的检测方法,30 min内完成整个检测过程,仅需要恒温加热可实现快速灵敏、可视化的检测。     

粗糙脉孢菌突变菌株合成漆酶的发酵条件研究

研究了影响粗糙脉孢菌突变菌株合成漆酶的一些摇瓶发酵条件，包括通气量、培养温度、甲醇浓度、Cu2＋浓度等。结果表明，在500mL三角瓶中装入含150μmol／L Cu^2＋浓度的发酵培养基BMMY 50mL，接种后于30℃，200r／min培养7d，用0．5％甲醇诱导，在第5天时漆酶酶活最高可达3．88u／mL。