硒化低聚氨基多糖对RAW264.7细胞的免疫调节作用

本实验旨在研究硒化低聚氨基多糖对小鼠巨噬细胞RAW264.7免疫功能的影响。用噻唑蓝比色法分别考 察硒化低聚氨基多糖、Na2SeO3对巨噬细胞RAW264.7增殖能力的影响,并观察巨噬细胞形态的变化。通过中性红 法、酶联免疫吸附测定法及实时荧光定量反转录聚合酶链式反应法分别检测巨噬细胞的吞噬能力、肿瘤坏死因子 （tumor necrosis factor-α,TNF-α）、白介素（interleukin,IL）-6及IL-10细胞因子的分泌量及其mRNA表达水平。 结果表明：硒质量浓度为100～1 000 μg/L时,硒化低聚氨基多糖对细胞的相对增殖率无显著影响;而Na2SeO3的硒 质量浓度超过200 μg/L即对巨噬细胞RAW264.7产生细胞毒性作用。硒化低聚氨基多糖能增强巨噬细胞吞噬活性, 显著提高RAW264.7细胞TNF-α、IL-6及IL-10分泌量及其mRNA表达水平,且效果比Na2SeO3处理组、低聚氨基多糖 处理组及Na2SeO3＋低聚氨基多糖复合添加组好。实验结果提示硒化低聚氨基多糖对小鼠巨噬细胞RAW264.7具有一 定的免疫调节作用。     

南极磷虾油对硫酸葡聚糖钠盐诱导溃疡性结肠炎小鼠的抗氧化作用机制

目的：探讨南极磷虾油（Antarctic krill oil,AKO）对硫酸葡聚糖钠盐（dextran sulfate sodium,DSS）诱导溃疡性结肠炎（ulcerative colitis,UC）小鼠的抗氧化作用及其机制。方法：BALB/c小鼠随机分成4 组：对照组、DSS组、低剂量AKO组（L-AKO,0.25 g/（kg mb·d））和高剂量AKO组（H-AKO,0.5 g/（kg mb·d））。通过在小鼠饮水中连续一周添加含质量分数3.5%的DSS诱导小鼠以产生UC。处死小鼠后收集其结肠组织,使用苏木精-伊红染色观察组织切片结构变化,并测定结肠组织中的谷胱甘肽过氧化物酶（glutathione peroxidase,GSH-Px）、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）的活力,以及白细胞介素-6（interleukin-6,IL-6）、肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）、内毒素（lipopolysaccharides,LPS）、二胺氧化酶（diamine oxidase,DAO）的水平;利用实时荧光定量聚合酶链式反应（quantitative polymerase chain reaction,qPCR）、蛋白免疫印迹（Western blot）进一步测定小鼠结肠中核因子E2相关因子2（nuclear factor erythroid 2-related factor 2,Nrf2）/Keap1信号通路相关基因及关键蛋白表达水平。结果：H-AKO处理不仅可以改善DSS干预后造成的结肠组织损伤,还可以显著提高其抗氧化酶基因（GSH-Px、SOD）的表达（P＜0.05）,显著降低炎症因子和肠道通透性指标（IL-6、TNF-α、LPS、DAO）的水平（P＜0.05）。qPCR结果表明相较于DSS模型组,H-AKO干预除了能提高结肠组织中Nrf2基因表达,还能提高GSH-Px、SOD和HO-1基因表达。Western blot结果显示,AKO处理使UC小鼠结肠Nrf2蛋白水平增加,Keap1蛋白水平表达降低,提示Nrf2/Keap1信号通路被激活。结论：AKO对UC小鼠的抗氧化保护作用可能是通过调节Nrf2/Keap1信号通路相关基因和蛋白表达,增强体内抗氧化酶水平的表达,从而实现改善机体氧化应激损伤、炎症反应和恢复肠道屏障结构与功能。     

辐照对贮藏过程中大管鞭虾生物胺形成的影响

以海捕大管鞭虾为研究对象,建立了液相色谱(HPLC)测定大管鞭虾中多种生物胺的分析方法。在此基础上测定辐照后大管鞭虾的生物胺含量及在不同条件贮藏过程中生物胺含量的变化,从而确定辐照对大管鞭虾中生物胺形成和变化的影响。研究结果表明:采用内标法可有效分离及准确测定大管鞭虾中的色胺、苯乙胺、腐胺、尸胺、组胺、酪胺、亚精胺、精胺等8种生物胺含量。在0~250 mg/kg范围,所测各种生物胺的线性相关系数在0.9915~0.9988之间,回收率在86.8%~94.9%之间,相对标准偏差小于7.1%。不同贮藏温度下,辐照对大管鞭虾中各类生物胺的产生具有一定的抑制作用,而其对生物胺产生的影响根据生物胺的类别和辐照剂量的不同而存在差异;5 k Gy的辐照强度即可对生物胺产生抑制作用,当辐照剂量≥5 k Gy后,对生物胺的抑制作用未显著增强;在20℃条件下,辐照可有效抑制各类生物胺的产生,然而7 d后,在贮存前对水产品进行20 k Gy大剂量的辐照也无法抑制酪胺和腐胺的大量产生。由此认为,低温与辐照技术相结合的贮藏方式可有效控制有毒生物胺的产生。     

硒化低聚氨基多糖对免疫抑制小鼠免疫器官及肠紧密连接蛋白表达的影响

本实验旨在研究硒化低聚氨基多糖（low-molecular-mass seleno-aminopolysaccharide,LSA）对免疫抑制小鼠组织形态、回肠闭合小环蛋白-1（zonula occludens-1,ZO-1）及闭锁蛋白（Occludin）表达的影响。通过腹腔注射环磷酰胺构建免疫抑制模型,测定脏器指数,采用苏木精-伊红染色观察脾脏与空肠组织病理形态,利用反转录实时荧光定量聚合酶链式反应分析ZO-1、Occludin mRNA的表达水平。结果表明：LSA处理显著缓解了环磷酰胺对小鼠免疫器官的抑制作用（P＜0.05）;与环磷酰胺模型组比较,0.6、0.9 mg/（kg mb·d） LSA组小鼠脾脏结构较清晰,红髓和白髓界限较明显,白髓面积增大,空肠绒毛形态与环磷酰胺模型组相比较为整齐;0.6 mg/（kg mb·d）LSA组的ZO-1、Occludin mRNA表达量显著升高（P＜0.05）。综上,LSA具有一定的免疫调节功能及肠道保护作用。     

硒化低聚氨基多糖稳定性研究

以低聚氨基多糖与亚硒酸钠为原料,合成硒化低聚氨基多糖(Low molecular seleno-aminopolysaccharide,LSA)。通过无机硒与总硒含量的比值考察LSA稳定性,对LSA进行了影响因素[60℃高温试验,25℃、相对湿度(90%±5%)高湿度试验和(4500±500)lx强光照试验]、加速试验(40℃、相对湿度75%)和长期试验(25℃、相对湿度60%,12个月)。结果高湿度条件下10 d LSA吸湿严重发生结块现象,无机硒/总硒有显著性减小。高温及强光照射10 d对其质量也有一定影响,但无机硒/总硒在强光试验中有显著性增加,长时间的光照对LSA的稳定性影响较大。同时,加速试验与长期试验表明产品较为稳定。因此,硒化低聚氨基多糖有一定程度的吸湿性,高光对其稳定性的影响较大,应该在密闭条件下避光保存。     

负载岩藻黄质的果胶@β-环糊精的制备及其体外降脂活性研究

目的 探究果胶交联β-环糊精(pectin crosslinked β-cyclodextri, PT@β-CD)负载岩藻黄质(fucoxanthin, FC)在体外的降脂活性研究。方法 实验室前期制备的PT@β-CD负载FC (FC-PT@β-CD)通过扫描电子显微镜(scanning electron microscopy, SEM)、粒径分析(particle size analysis, PSA)、红外光谱检测(infrared spectroscopy, FT-IR)、热重分析(thermo-gravity, TGA)进行表征, 并研究FC-PT@β-CD在体外对甘胆酸钠和牛磺胆酸钠的吸附以及对胰脂肪酶的抑制。结果 负载实验结果表明PT@β-CD/C的包封率和装载量为86.00±0.71%和9.82±0.12%。SEM结果显示FC-PT@β-CD呈球状, FC-PT@β-CD/A、FC-PT@β-CD/B和FC-PT@β-CD/C的平均粒径分别约为248.4 nm、199.0 nm和157.0 nm, FT-IR结果证明FC成功负载在PT@β-CD, TGA结果表明FC-PT@β-CD/C在259.4℃下明显减重, 热稳定良好且体外释放稳定。FC-PT@β-CD对甘胆酸钠吸附率为25.25%±0.82%, 对牛磺胆酸钠吸附率为56.21%±1.04%。对胰脂肪酶的抑制率随着FC-PT@β-CD浓度增加而增加, 最后趋于平稳, 且为混合型抑制, 半抑制浓度（half maximal inhibitory concentration, IC50）为28.45 mg/mL。结论 FC-PT@β-CD在体外具有良好的降脂作用, 为岩藻黄质在食品中的应用和进一步开发提供了思路。