硒化低聚氨基多糖对RAW264.7细胞的免疫调节作用

本实验旨在研究硒化低聚氨基多糖对小鼠巨噬细胞RAW264.7免疫功能的影响。用噻唑蓝比色法分别考 察硒化低聚氨基多糖、Na2SeO3对巨噬细胞RAW264.7增殖能力的影响,并观察巨噬细胞形态的变化。通过中性红 法、酶联免疫吸附测定法及实时荧光定量反转录聚合酶链式反应法分别检测巨噬细胞的吞噬能力、肿瘤坏死因子 （tumor necrosis factor-α,TNF-α）、白介素（interleukin,IL）-6及IL-10细胞因子的分泌量及其mRNA表达水平。 结果表明：硒质量浓度为100～1 000 μg/L时,硒化低聚氨基多糖对细胞的相对增殖率无显著影响;而Na2SeO3的硒 质量浓度超过200 μg/L即对巨噬细胞RAW264.7产生细胞毒性作用。硒化低聚氨基多糖能增强巨噬细胞吞噬活性, 显著提高RAW264.7细胞TNF-α、IL-6及IL-10分泌量及其mRNA表达水平,且效果比Na2SeO3处理组、低聚氨基多糖 处理组及Na2SeO3＋低聚氨基多糖复合添加组好。实验结果提示硒化低聚氨基多糖对小鼠巨噬细胞RAW264.7具有一 定的免疫调节作用。     

单环刺螠内脏多糖结构的分析及其对脂质过氧化物的清除作用

为开发单环刺螠内脏中活性多糖成分,利用两步酶解法提取单环刺螠多糖,对其单糖组成、分子质量和连接方式等理化性质和结构特征进行研究,并通过体外清除脂质过氧化物实验对其活性进行初步评价。结果表明：采用木瓜蛋白酶和胰蛋白酶两步酶解后,单环刺螠内脏多糖得率为6.2%。单环刺螠内脏多糖（viscera polysaccharide,VP）分子质量约为4.1×103 u,从单糖组成可以看出,VP为组成复杂的类糖胺聚糖,主要含有葡萄糖（Glc）,其次还含有氨基葡萄糖（GlcN）、甘露糖（Man）、半乳糖（Gal）和岩藻糖（Fuc）,还含有少量的木糖（Xyl）、鼠李糖（Rha）、葡萄糖醛酸（GlcUA）和氨基半乳糖（GalN）。其单糖组成物质的量比为n（Man）∶n（GlcN）∶n（Rha）∶n（GlcUA）∶n（GalN）∶n（Glc）∶n（Gal）∶n（Xyl）∶n（Fuc）＝1∶1.38∶0.87∶0.53∶0.52∶5.37∶1.38∶1.05∶2.40。VP还含有少量的硫酸基,含量为8.9%。葡萄糖作为VP中最主要的单糖,其连接方式主要为Glcp(1→、→4)-Glcp(1→、→4,6)-Glcp(1→和→3,6)-Glcp(1→。甘露糖主要含有Manp(1→、→2)-Manp(1→和→6)-Manp(1→连接方式。半乳糖含有Galp(1→和→4)-Galp(1→连接方式。而岩藻糖主要含有→4)-Fucp(1→,另外还有Fucp(1→、→3)-Fucp(1→和→3,4)-Fucp(1→连接方式。类糖胺聚糖具有丰富的生物活性,对VP进行初步体外抗氧化活性研究表明,其具有显著的脂质过氧化物清除活性,半数清除质量浓度为2.47 mg/mL。     

ICP-MS测定两种一枝黄花中12种微量元素

为确定两种一枝黄花中微量元素的差异,建立了微波消解-ICP-MS法,测定加拿大一枝黄花与一枝黄花中Ca、Mg、P、Fe、Mn、Ni、Cu、Zn、Se、Cr、Hg和Pb12种微量元素。方法的加标回收率为95.2%～107.1%,相对标准偏差在2.5%～8.9%之间,检出限在0.002～0.057μg.L-1之间,该方法具有良好的准确度和精密度。分析结果表明,加拿大一枝黄花与一枝黄花均含有Ca、Mg、P、Mn和Fe元素,前者中Ca、Cr、Mn、Zn、Pb、Ni含量较高,而后者中的Mg、P、Fe、Cu、Se含量较高。     

厚壳贻贝多糖的提取工艺优化及体外生物活性研究

以抗氧化和抗肿瘤活性为指导优化提取工艺,分别采用热水提取,两步联合酶解法（木瓜蛋白酶和胰蛋白酶）从厚壳贻贝中提取和分离纯化具有生物活性的贻贝多糖,对其进行基本理化性质分析和DEAE-Cellulose 52 柱层析分离纯化并进行体外抗氧化、抗肿瘤生物活性研究。通过对热水提取法,单一酶提法和联合酶提取法得到的贻贝多糖粗品进行理化性质分析和活性筛选,发现联合酶解提取得到的贻贝粗多糖在得率、纯度和生物活性上均优于其他方法提取得到的粗多糖,其提取粗多糖的得率为23.69%。联合酶提粗多糖体外抗氧化研究表明其对DPPH自由基、超氧阴离子自由基和脂质过氧化物清除的半最大效应浓度（concentration for 50% of maximal effect,EC50）分别为3.75、5.01 mg/mL和2.41 mg/mL;对体外前列腺癌DU-145细胞48 h,IC50为2.93 mg/mL。通过分离纯化后对各组分的得率和组成分析表明：联合酶提可提高贻贝多糖类糖胺聚糖（MT3）的含量,并达到13.5%,单糖组成主要为Man、GlcN、GlcUA、Gal和Fuc,分子质量约为18 kD。和其他组分相比,MT3 组分表现出良好的体外抗肿瘤活性,对体外前列腺癌DU-145细胞48 h,IC50 为2.71 mg/mL。通过活性追踪和工艺优化结果表明,热水提取后酶解工艺不仅可以降解蛋白提高多糖的纯度,而且还可以显著提高贻贝多糖中类糖胺聚糖的含量,而贻贝类糖胺聚糖是贻贝多糖的主要活性组分,具有良好的抗肿瘤活性。     

赤魟鱼肉蛋白酶解产物的制备及抗氧化活性研究

目的:研究赤魟鱼肉酶解产物的制备工艺及抗氧化活性.方法:以DPPH清除率为指标,通过单因素和正交试验确定木瓜蛋白酶的最佳酶解条件;用葡聚糖凝胶G-25(Sephadex G-25)分离、提纯并检测各组分的抗氧化活性.结果:木瓜蛋白酶酶解赤虹鱼肉蛋白制备抗氧化肽的最佳酶解条件是:温度55℃、pH 7.0、酶解时间5h、加酶量0.6%;酶解产物的抗氧化活性大于酶解前粗蛋白的抗氧化活性;酶解产物经Sephadex G-25纯化后,得到组分F1、F2、F3,其中组分F2的抗氧化活性最高,当其质量浓度为5 mg/mL时DPPH清除率、还原力、羟自由基清除率分别为31.54%、0.274和17.91%;组分F2的相对分子质量小于307.结论:酶解并经Sephadex G-25纯化制备的赤魟鱼肉多肽具有较强的抗氧化能力.     

酶解制备金乌贼抗氧化产物的工艺优化及营养评价

目的:研究金乌贼蛋白抗氧化酶解产物(antioxidant enzymatic hydrolysate,AEH)的制备和脱苦工艺,并对其氨基酸组成和营养价值进行评价.方法:分别以·OH清除率和苦味值为指标,利用正交试验设计对木瓜蛋白酶制备AEH的水解条件及活性炭脱苦工艺进行优化;利用氨基酸自动分析仪测定AEH的氨基酸组...     

微波辅助提取孔鳐抗氧化和血管生成抑制活性软骨多糖的研究

目的:对微波辅助碱液提取孔鳐软骨多糖的方法及其抗氧化和血管生成抑制活性进行研究.方法:采用微波辅助碱液提取与木瓜蛋白酶水解相结合的加工工艺,以正交试验法优化提取工艺参数.通过还原力、DPPH·和·OH清除实验对多糖抗氧化能力进行测定.采用鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)模型对其血管生成抑制活性进行评价.结果:微波辅助碱液提取最佳工艺参数是:微波功率650W、提取温度60℃、碱质量分数15％、液料比35:1、提取时间7min.木瓜蛋白酶脱蛋白精制孔鳐软骨多糖的最佳条件是:酶解温度50℃,pH 7.0,酶解时间2h,酶量1.0％.在此条件下精制的多糖为白色粉末,得率13.77％,纯度88.75％.在相同浓度下精制孔鳐软骨多糖抗氧化能力均大于粗提多糖.精制多糖的血管生成抑制活性与硫酸软骨素(CS)相当,并且呈剂量依赖关系.结论:微波辅助碱液提取和木瓜蛋白酶脱蛋白所得精制多糖具有很好的抗氧化和血管生成抑制活性.     

硒化低聚氨基多糖对免疫抑制小鼠免疫器官及肠紧密连接蛋白表达的影响

本实验旨在研究硒化低聚氨基多糖（low-molecular-mass seleno-aminopolysaccharide,LSA）对免疫抑制小鼠组织形态、回肠闭合小环蛋白-1（zonula occludens-1,ZO-1）及闭锁蛋白（Occludin）表达的影响。通过腹腔注射环磷酰胺构建免疫抑制模型,测定脏器指数,采用苏木精-伊红染色观察脾脏与空肠组织病理形态,利用反转录实时荧光定量聚合酶链式反应分析ZO-1、Occludin mRNA的表达水平。结果表明：LSA处理显著缓解了环磷酰胺对小鼠免疫器官的抑制作用（P＜0.05）;与环磷酰胺模型组比较,0.6、0.9 mg/（kg mb·d） LSA组小鼠脾脏结构较清晰,红髓和白髓界限较明显,白髓面积增大,空肠绒毛形态与环磷酰胺模型组相比较为整齐;0.6 mg/（kg mb·d）LSA组的ZO-1、Occludin mRNA表达量显著升高（P＜0.05）。综上,LSA具有一定的免疫调节功能及肠道保护作用。     

硒化低聚氨基多糖稳定性研究

以低聚氨基多糖与亚硒酸钠为原料,合成硒化低聚氨基多糖(Low molecular seleno-aminopolysaccharide,LSA)。通过无机硒与总硒含量的比值考察LSA稳定性,对LSA进行了影响因素[60℃高温试验,25℃、相对湿度(90%±5%)高湿度试验和(4500±500)lx强光照试验]、加速试验(40℃、相对湿度75%)和长期试验(25℃、相对湿度60%,12个月)。结果高湿度条件下10 d LSA吸湿严重发生结块现象,无机硒/总硒有显著性减小。高温及强光照射10 d对其质量也有一定影响,但无机硒/总硒在强光试验中有显著性增加,长时间的光照对LSA的稳定性影响较大。同时,加速试验与长期试验表明产品较为稳定。因此,硒化低聚氨基多糖有一定程度的吸湿性,高光对其稳定性的影响较大,应该在密闭条件下避光保存。