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白藜芦醇在酿酒酵母中的组合表达 总被引:1,自引:0,他引:1
将克隆自拟南芥的4cl基因和巨峰葡萄的rs基因,利用降落重叠延伸PCR的方法,成功构建了含有G418抗性筛选标记的酵母表达载体pRS42K-4CL以及含有潮霉素抗性筛选标记的酵母表达载体pRS42H-RS。采用LiAc/SS carrier DNA/PEG法将含有目的基因的2个载体共同转化至酿酒酵母工业菌株EC1118中,通过PCR及酶切鉴定等方法验证重组工程菌。以对香豆酸为底物,将获得的酿酒酵母工程菌于YPD液体培养基中发酵(25℃,150 r/min,96 h),发酵液用乙酸乙酯抽提后采用高效液相色谱(HPLC)法进行检测,其结果显示发酵产物中白藜芦醇的含量为0.78 mg/L。这表明,拟南芥的4cl基因与巨峰葡萄的rs基因在酿酒酵母工程菌中成功得到了表达,并且表达产物利用对香豆酸为前体物质合成了目标产物白藜芦醇。该研究为进一步实现白藜芦醇在酵母中的工业化生产奠定了基础。 相似文献
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为解决碳纤维增强树脂基复合材料(CFRP)筒状件内壁表面化学惰性较高导致与金属涂层结合强度差的问题,采用射频辉光放电对其内表面进行活化处理来提高其表面活性。通过接触角测试和红外光谱分析,探究等离子体处理气压、射频电源功率、处理时间和离子种类对活化效果的影响。结果表明,经射频辉光放电等离子体处理后 CFRP 筒状件内壁表面等离子体活化效果明显,表面能显著提高。其他工艺参数相同情况下,活化效果随气压增大先提升后降低,随射频电源功率和处理时间的增大而提高,以氧等离子体活化效果最佳。其中,在处理气压 0.5 Pa、射频电源功率 500 W、处理时间 60 min、氧等离子体条件下效果最为显著,水和二碘甲烷的接触角分别由 71.29°、49.36°降低到 4.93°、5.39°,表面能从 38.85 mJ·m?2 提升到 74.73 mJ·m?2 。通过红外光谱分析,经等离子体处理后的 CFRP 中 C-H 和 C≡C 等非活性键被打断,带有 C=O 的醛基和羧基活性基团增多,浸润性大幅提高。活化后的 CFRP 基体与金属薄膜的膜基结合力由不足 0.1 MPa 提升至 0.49 MPa。研究通过射频辉光放电对 CFRP 筒状件内壁表面进行活化处理,为制备高结合强度的金属涂层打下基础。 相似文献
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为了提高Zr-4合金在核工业中的服役性能并避免引入杂质元素,以Li2B4O7为电解液在Zr-4合金表面制备微弧氧化陶瓷层,研究了Li2B4O7浓度对微弧氧化陶瓷层的物相组成、微观形貌、膜层厚度、硬度、粗糙度、耐磨损和耐腐蚀性能的影响。结果表明:当ρ(Li2B4O7)=3~15 g/L时,随着Li2B4O7浓度的增加,电解液的电导率持续增加,陶瓷层的粗糙度总体持续增加,只在电解液浓度从6 g/L变化到9 g/L时稍有下降,微弧氧化陶瓷层厚度先在ρ(Li2B4O7)=3~9 g/L范围内持续下降,后在ρ(Li2B4O7)=9~15 g/L范围内上升;陶瓷层的硬度先是在ρ(Li2B... 相似文献
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人工改造并合成subtilosin A的结构基因(rsbo A),并在毕赤酵母中诱导表达重组蛋白。结果表明:经阳性大肠杆菌转化子菌落PCR和测序鉴定,表明重组质粒p PIC9K-sbo构建正确;经阳性酵母转化子的菌落PCR产物电泳检测,可见清晰目的基因条带,证明重组酵母GS115-p PIC9K-sbo构建正确;经枯草芽孢杆菌素蛋白电泳检测,可见明显蛋白条带,表明重组rsbo A基因在毕赤酵母GS115中获得了分泌表达。在抑菌效果检测中,重组酵母工程菌的发酵液对铜绿假单胞菌具有一定的抑菌活性。本研究开创了有望替代抗生素的小分子肽细菌素异源表达新思路,为枯草芽孢杆菌素subtilosin A的工业化生产奠定了基础。 相似文献
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3D数字技术就当前动画技术领域功能最强的软件,应用3D动画数字技术,必须从造型、材料、光线和相机等因素着手,结合旅游景区的实际特点进行制作,从而更好的满足展示旅游景区形象的目的. 相似文献
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通过快速高密度发酵培养,以重组亚胺还原酶大肠杆菌工程菌的菌体生物量及酶活力作为评价标准,利用低成本的发酵培养基,在短时间内获得菌体的最大生物量和最佳酶活力。采用2 L发酵体系,对该工程菌的接种量和诱导条件进行优化。结果表明,该菌株的快速高密度发酵最佳接种量为10%,当生物量OD600值达到12时,发酵体系降温至20℃,加入0.4 mmol/L异丙基-β-D-硫代半乳糖苷,为最佳诱导条件,并以此条件进行20 L快速高密度发酵,诱导12 h酶活力最高,为4.56 U/g。该研究为进一步放大发酵体系以实现亚胺还原酶工业化快速高产量制备的生产奠定基础。 相似文献
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α-L-鼠李糖苷酶对天然产物之间的转化具有重要的作用和应用价值。该研究采用毕赤酵母表达α-L-鼠李糖苷酶AnRhaE,构建pPIC9K-AnRhaE表达载体,电转化至毕赤酵母GS115和KM71H中,经诱导表达,SDS-PAGE电泳显示GS115更有利于生产AnRhaE酶。AnRhaE酶在45~55℃时酶活力高,最适温度为55℃,对pH的耐受范围较广,pH 4.5~pH 8时酶活性稳定,最适pH为5。AnRhaE能水解α-1,2、α-1,6和2个鼠李糖苷连接的底物,包括柚苷二氢查耳酮、柚苷、芦丁、新橙皮苷、橙皮苷和朝藿定C等天然产物,但是AnRhaE对α-1,2糖苷键连接的底物具有较高的活性,而对α-1,6糖苷键连接的底物活性较差,对朝藿定C的活性较好,能将朝藿定C完全水解生成淫羊藿苷,因此AnRhaE酶在天然产物之间的转化具有较好的应用价值和前景。 相似文献