铜绿假单胞菌外毒素A基因突变体的构建及其在大肠埃希菌中的表达

目的将铜绿假单胞菌外毒素A(Pseudomonas aeruginosa exotoxin A,PEA)基因突变为无毒性的ntPE基因,并在大肠埃希菌中进行表达。方法利用Primer Premier 5.0软件设计PEA基因引物及PEA基因第553位氨基酸缺失的突变引物,以铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa,P.aeruginosa)基因组DNA为模板,PCR扩增PEA基因,插入pGEM-T载体中,构建重组克隆质粒pGEM-PEA,以其为模板,利用突变引物,扩增ntPE基因(无毒性PEA),插入pET-30a载体中,构建原核表达质粒pET-ntPE,转化大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,表达产物经SDS-PAGE及Western blot分析。结果测序结果证明已成功获得突变基因;原核表达质粒经双酶切鉴定证明构建正确;表达的重组蛋白相对分子质量约69 000,主要以包涵体形式存在,表达量占菌体总蛋白的30%,可被小鼠抗PEA单克隆抗体特异性识别,具有较好的抗原性。结论已成功获得无毒性的PEA突变基因,为构建以PEA为蛋白佐剂的融合蛋白疫苗奠定了基础。     

预热器窑高窑速投料操作体会

我公司Φ3郾2m×52m、600t/d五级悬浮预热器窑,以前,在投料初期均采取低窑速、少投料,后逐渐增加窑速、增大喂料量的操作方式,这种操作方式使窑达到正常生产需要时间长,产量低、能耗高,且不稳定的火焰易损伤窑皮,甚至耐火砖。通过采取高窑速投料的操作方式,缩短了回转窑达到稳定状态的时间,降耗、增产,取得了较好的效果。1投料前的准备及要求1)设备现状及要求该窑主电动机工作电压为440V,对应窑速为3郾16r/min,比设计窑速2郾5r/min高0郾66r/min,为进一步提高窑速提供了可能。另外在投料前高温风机应尽量迟开,一般投料前15min左右开启,开得…     

新型手性衍生化试剂MTPEA的合成,拆分及^13C NMR的研究

报道了新型手性衍生化试剂２－甲氧基－２－三氟甲基－２－苯基乙胺的合成及拆分方法，以溴苯和三氯乙酸为主要原料通过３步反应合成了外消旋的ＭＴＰＥＡ，合成总收率为５３．３％，以光学活性酒石酸为拆分剂在甲醇中通过拆分得到光学纯度分别为９５．１％和９５．８％的Ｓ－（＋）－ＭＴＰＥＡ和Ｒ－（－）－ＭＴＰＥＡ，拆分总收率为２４．４％，并进一步研究了ＭＴＰＥＡ分子中碳和氟原子间的偶合作用，归属了分属了各碳原子的化     

水泥净浆流动度与混凝土流动性能相关性研究

正0前言聚羧酸高性能减水剂是继萘系、三聚氰胺系列高性能减水剂后发展起来的第三代高性能混凝土减水剂,由于聚羧酸高性能减水剂在使用中具备掺量低、减水性强、保坍性高等优点,在混凝土工程中迅速发展。但在实际工程实践中,聚羧酸高性能减水剂对不同产地、不同成分的水泥非常敏感。本文通过采用不同厂家生产的P·O42.5级普通硅酸盐水泥与某品牌ART-M1型聚羧酸高性能减水剂进行试验,分析研究掺减水剂的水泥净浆流动度与混凝土     

基于系统调用特征的入侵检测研究

对网络服务程序进行攻击是非法用户入侵系统的主要途径 ,针对关键程序的入侵检测近年来受到重视 .该文提出的CTBIDS检测模型在利用系统调用特征树描述程序行为特征的基础上 ,通过异常有限积累判别程序入侵 ,既能体现异常状况的长期积累 ,也能很好地反映入侵的异常局部性原理 .此外 ,该文通过统计分析方法确定入侵判别参数 ,使得入侵判别更加准确 .测试及试用结果表明CTBIDS能有效检测出针对关键程序的攻击     

嵌合蛋白sTNFRⅡ-IgG Fc纯化与生物学活性研究

目的　建立嵌合蛋白sTNFR IgGFc的纯化工艺 ,并对该蛋白的理化和生物活性进行研究。方法　嵌合蛋白sTNFRⅡ IgGFc经变性、复性后 ,用金属螯合层析进行纯化 ,纯化的蛋白进行配基结合实验和拮抗TNF活性检测。结果　该嵌合蛋白的纯度大于 95 % ,在体外能够二聚化 ,保留了sTNFRⅡ对hTNFα的结合特性 ,同单体sTNFRⅡ相比 ,对hTNFα的拮抗活性明显提高。结论　为进一步研究奠定了基础     

α-呋喃甲醇羧酸酯的合成研究

以α 呋喃甲醇为基本原料,通过（１）吡啶／酰氯、（２）４ 二甲氨基吡啶／酸酐／无水碳酸氢钠、（３）４ 吡咯烷基吡啶／酸酐／无水碳酸氢钠三种方法,分别合成了α 呋喃甲醇的乙酸酯、丙酸酯、丁酸酯、戊酸酯和己酸酯。结果表明：方法２和３中各产物的收率比方法１约高７％～２０％;方法２和３中产物收率和含量相近,收率８６．８％～９４．５％,含量均高于９９％。所合成的５个α 呋喃甲醇酯的香气特征为带有轻微甜香的水果芳香。     

融合蛋白IFN-IgG Fc在乳酸乳杆菌中的表达及其生物学活性研究

用乳酸菌表达有药用价值的生物学活性多肽,是当前国际上的研究热点之,对开发新的功能性食品具有广阔的前景.本文应用PCR方法将人干扰素IFN-α-2b基因与IgG Fc基因连接,并引入一段柔性连接肽,构建了融合蛋白基因IFN-IgG Fc,将融合蛋白基因克隆到原核表达载体pSC111 AE中,转化乳酸乳杆菌ATCC393进行诱导表达及鉴定,并研究了融合蛋白的生物学活性.结果表明,通过Western-Blot方法在表达上清液检测出干扰素融合蛋白,ELISA测定表明两段多肽能够保持各自的构象,基因工程乳酸菌表达的上清液可以诱导WISH细胞产生明显的抗VSV病毒的活性,其活性为1.71×103IU/ml.本文首次构建并在大肠杆菌和乳酸菌表达了IFN-IgG Fc融合蛋白,获得了能产生人干扰素的乳酸菌株,为基因工程乳酸菌及相关药物的开发研究奠定了基础.     

大学生科研创新实践项目的管理探索

近年来,大学生科研创新能力和实践动手能力的培养得到很大的重视,高校都在开展多种多样的大学生创新实践项目。本文从管理和辅导角度探讨如何更好地开展大学生科研与创新实践项目,内容包括创新项目选题,创新能力培养的基本原则,以及创新实践过程的心理辅导,最后介绍了我校在管理和辅导大学生科研创新实践项目过程中的一些心得与体会。