农杆菌介导的棉花茎尖遗传转化及转betA植株的产生

以棉花种子无菌苗裸露的茎尖分生组织为受体,采用农杆菌介导法进行转化。感染小苗经共培养后移栽入花盆,用选择剂除草剂筛选。然后对除草剂抗性植株进行分子检测,获得了转基因植株。通过不同菌液浓度、浸染时间、真空渗透处理和表面活性剂Silwet—L77、Tween80等使用的比较实验,优化了转化条件,提高了转化频率,最高转化率达13．23％。该技术体系避开了棉花组织和细胞培养过程,能高效获得转基因植株。采用该体系我们将胆碱脱氢酶基因betA和突变的乙酰乳酸合成酶基因als导入到3个棉花优良品种中,获得了抗除草剂氯磺隆和耐盐性提高的转基因植株及其子代。     

农杆菌介导的油菜脂肪酸调控基因工程研究

采用农杆菌介导法,将反义的油酸脱饱和酶基因（Fad2基因）导入油菜,获得了7株转基因植株。与对照植株比较,有5株转基因油菜产生的种子中脂肪酸含量发生变化,表现为油酸含量升高,亚油酸、亚麻酸含量降低,其中油酸最高含量为68．72％,比对照高20％以上。     

一个新的重组酶系统在转基因植物外源基因删除中的应用

为了解决转基因植物可能带来的生物安全性问题,设计了一个新的位点特异性重组酶系统pLFHFGN,该系统中重组酶FLP基因由热激蛋白Hsp18．2基因的启动子控制,所有外源基因(包括重组酶基因nP、GUS报告基因和NPTI筛选标记基因)都置于两个融合识别位点loxFRT之间。将上述重组酶系统通过根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导转化烟草,获得的再生植株分别通过GUS组织染色和PCR分析等方法进行鉴定。然后在37℃下热激处理转基因植株,利用GUS组织染色检测重组酶系统在转基因植株T1代幼苗中删除外源基因的效率,结果显示,该系统删除效率达到了48．2％-84．9％,说明通过重组酶系统pLFHFGN能够有效地删除转基因植物中的外源基因,这为解决转基因植物潜在的安全性问题提供了一条新的途径。     

Tid基因对水稻的转化及转基因植株的抗虫性

利用基因枪转化法将大豆Kunitz型胰蛋白酶抑制剂(SKTI)基因Ti^d转入北方推广的水稻(Oryza sativa L)品种丰优301和通887，所获得的潮霉素抗性植株通过GUS组织化学分析、PCR检测、Southern blot分子检测，证实Ti^d基因已经转入水稻基因组中，为转基因植株。用转基因水稻植株叶片进行了室内饲喂水稻二化螟(Chilo suppressalis)实验，抗虫性分析结果表明，与对照比较，部分转基因水稻植株明显地增强了对水稻二化螟虫的抗性。对转基因R1代植株进行PCR和PCR Southern分析，表明外源基因在转基因植株后代今稳定遗传。     

基因枪法转化水稻(Oryza sativa L.)获得可育的转抗虫基因水稻再生植株

应用基因枪（particle bombardment)转化技术成功地将豇豆胰蛋白酶抑制剂（cowpea trypsin inhibitor,CpTI)基因分别导入三个水稻粳稻栽培品种（Oryza sativa L.,japonica)中花8、中花10和中作321的幼胚和胚性愈伤组织中,并由此获得了可育的再生植株,抗性植株的筛选频率为6．1％－12．24％。经PCR、Southern blot分子检测和ELISA检测等证实所获得的潮霉素抗体植株为转基因植株。抗虫性分析结果表明,部分转基因水稻植株对玉米螟虫（Ostrinia nubilalis)有较好的抗性。     

Patatin启动子驱动的乙肝表面抗原基因在马铃薯中的表达

按常规分子克隆方法将马铃薯中高表达的ｐａｔａｔｉｎ启动子和乙肝表面抗原基因分别插入双元质粒ｐＢＩ１０１成为植物表达载体ｐＰＨＧ９,由前者驱动后者表达;通过农杆菌转化法将乙肝表面抗原基因导入马铃薯并获得再生植株;用ＥＬＩＳＡ方法检测经ＰＣＲ鉴定的转基因植株中乙肝表面抗原的含量,对照标准曲线得知转基因马铃薯植株中的乙肝表面朱含量高达１００￣１７４ｎｇ／ｍｇ可溶性蛋白。     

应用农杆菌转化水稻的研究

利用农杆菌ＬＢＡ４４０４（ＰＴＯＫ２３３）转化水稻成熟胚愈伤组织，通过筛选获得抗性伤组织并再生出转化植株，转化频率为８．９％，转基因分子生物学鉴定的阳性，外源基因ｇｕｓ在转化植株表达亦提供了转化成功的证据。转基因植株的当代及Ｔ１代植株获得了种子。摸索了应用农杆菌转化水稻的方法，条件。利用干燥处理法抑菌并提高转化植株再生频率。     

转抗菌肽B基因水稻植株的获得与鉴定

构建了一个适合在水稻中表达含有抗菌肽Ｂ基因的转化载体，应用基因枪转化法将其导入水稻未成熟胚，获得了一些转基因水稻植株。根据对选择标记基因和目的基因的分子检测和抗病性测定，证明抗菌肽Ｂ基因已整合入转化水稻基因组并在转基因水稻中表达了抗病性。     

转PSAG12-ipt基因水稻植株的获得及其延衰性的初步研究

运用农杆菌转化法将叶片衰老抑制基因PSAG12-ipt转入南方推广的优质籼型不育系中A、恢复系明恢63、南胜10号,所获得的潮霉素抗性植株通过GUS组织化学分析、PCR检测、Southern blot分子检测证实,PSAG12-ipt已经转入水稻基因组中.对转基因植株进行了延衰性考察,结果表明,与对照组相比,部分转基因水稻植株明显表现出叶片推迟衰老,提高了单株有效穗数、千粒重.对转基因R1代植株进行了PCR和PCR Southern分析,表明外源基因在转基因植株后代中稳定遗传.     

四倍体鱼的种质改良研究

β－ａｃｔｉｎ基因启动子驱动的草鱼生长激素基因ｃＤＮＡ－“全鱼”基因ｐＣＡｇｃＧＨｃ用显微注射方法导入四倍体鱼卵,获得了生长快,个体硕壮的转基因四倍体鱼。２４０日龄时,转基因鱼平均体重为３０２．７ｇ,是对照鱼的３．１倍,平均体长是对照的１．３４倍,燕可从部分转基因雄鱼挤出精液,而对照鱼尚无此现象。对１９尾转基因四倍体雄鱼的精液和尾鳍ＤＮＡ做ＰＣＲ检测,外源基因和的阳性率分别为９４．７％和５２．６％     

OsbHLH1基因在拟南芥中表达及耐低温能力的研究

OsbHLH1基因编码bHLH类转录因子,受低温诱导。我们将含有OsbHLH1基因的植物双元表达载体经抽真空转基因法导入拟南芥。经PCR、Southem和Northem杂交分析证明外源基因已整合到拟南芥基因组中并可以转录表达。通过对转基因植株的耐低温能力分析,证明OsbHLH1基因过量表达能明显提高转基因植株的耐低温能力。     

抗菌核病转基因油菜植株的获得

将携带菜豆几丁质酶基因的植物表达载体ｐＢｃｈ通过农秆菌介导法导入甘兰型油菜Ｈ１６５中。经卡那霉素对Ｔ０、Ｔ１和Ｔ２代植株进行连续的筛选和菌核病（ｓｃｌｅｒｏ－ｔｉｎｉａ ｓｃｌｅｒｏｔｉｎｏｒｉｕｍ）接种试验,共获得２２株抗菌核病的Ｔ２代植株。对其中的２２株进行ＰＣＲＳ检测,从６株扩增得到与菜豆几丁质酶基因大小对应的ＤＮＡ带型,Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交证实其中２株呈现阳性结果,表明外源基因已整合到油菜     

转修饰豇豆胰蛋白酶抑制剂基因(sck)玉米(Zea mays L.)植株的获得及其抗虫性分析

利用基因枪法将修饰的豇豆胰蛋白酶基因（sck）导入玉米优良自交系E28及340的胚性愈伤组织中,经筛选剂PPT3次筛选及再生过程,获得可育的再生植株。经PCR及Southern blot分子检测,证实所获得的再生植株为转基因植株。豇豆胰蛋白酶抑制剂抑制活性检测及抗虫结果显示：外源基因在植物已获表达,部分转基因植株具有较强的抗虫活性。     

苏云金芽孢杆菌cry1Aa核心毒素基因转化烟草及其杀虫活性

将苏云金芽孢杆菌cry1Aa的C端编码区截短,获得编码N端609个氨基酸约1.8kb的核心毒素基因,将其构建到植物表达载体转化烟草,研究直接表达的活性ICP核心毒素被昆虫取食后的杀虫效果.T1代种子发芽的抗生素抗性分离和PCR检测证实cry1Aa核心毒素基因整合到了烟草基因组,Western 杂交检测表明转化烟草能够正常表达大小为75.6kD的核心毒素蛋白.生物测定结果表明,转化烟草对初孵棉铃虫平均有高于60%的致死率,对初孵甜菜夜蛾平均达到70%的致死率,最高致死率均可达到90%以上,并对昆虫的生长发育有明显的抑制作用.     

南荻遗传转化系统的建立及转基因植株的获得

建立了南荻愈伤组织高频诱导与再生系统及其转化愈伤组织的筛选系统 ,并通过本研究所建立的基因枪转化系统 ,将马铃薯蛋白酶抑制基因导入南荻愈伤组织而获得转基因植株     

转Bt＋CpTI双价基因抗虫棉铃虫性的时空表达

以转单价Bt基因抗虫棉品系中心Bt和常规棉苏棉12号对照,研究了转Bt＋CpTi双抗－1抗虫棉对棉铃虫,抗性的时空表达特征,在棉花生长发育进程中,用4－21叶位主茎叶饲喂棉铃虫初孵幼,虫,5天后观察：双抗－1和中心Bt的4－21叶上存活棉铃虫中均无3龄幼虫,苏棉12号中3龄幼虫存占活幼虫的40％以上,双抗－1和中心B棉铃虫的死亡率相近且随叶位升高而下降,分期播 抗虫性测验与各叶位抗虫性测定相似,即双抗－1和中心Bt各播种期的存活棉铃虫中没有3龄虫,苏棉12号各播种期都有3龄虫出现,双抗-1棉铃虫的死亡率与中心Bt相近,且随播种日期推迟棉铃虫死亡率逐渐升高,试验结果表明：双抗－1对棉铃虫的抗性水平与中心Bt相近,且抗性表现为前期高后期低,也对双价抗虫棉的时空表达特征与棉铃虫产生抗性的风险关系进行了讨论。     

拟南芥CRY1基因C末端导入甘蓝型油菜的遗传及表达

通过卡那霉素抗性鉴定,对甘蓝型油菜westar转基因后代T2代株系进行了研究.结合PCR检测及序列比对验证,对拟南芥CRY1基因C末端导入甘蓝型油菜后的遗传表现进行了分析,并利用GUS染色和花色素苷积累量的比较,对CRY1基因C末端在转基因油菜中的表达进行了研究.结果表明:转化的外源目的基因多数以嵌合形式,少数以单拷贝和嵌合的混合形式整合到转基因油菜的基因组中;目的基因能稳定地遗传给后代,株系间遗传传递率为62.5%;T2代的遗传行为少数呈现孟德尔遗传,多数呈现非孟德尔遗传现象;拟南芥CRY1基因能在转基因油菜中表达,但也出现了沉默现象.     

基因枪法转化小麦及转基因植株的获得

应用基因枪法转化了小麦幼胚,成熟胚及胚性愈伤组织,成功地将携带有豇豆胰蛋白酶抑制剂（ＣｐＴＩ）基因以及选择标记潮霉素磷酸转移酶基因的质粒ｐＢＣＡ－Ｈｐｔ导入小麦胚性愈伤组织。通过在选择培养基上严格筛选后获得潮霉素抗体愈伤组织,并进一步分化培养获得完整的小麦再生植株。ＰＣＲ检测结果显示抗性愈伤组织和再生植株细胞内存在有目的基因序列,证实其为转基因材料。