荔枝果肉苯丙氨酸解氨酶特性的研究

研究了荔枝果肉中苯丙氨酸解氨酶(L-phenylalanine ammonia-lyase,PAL)的酶学特性。荔枝PAL动力学曲线并不遵循米氏方程,其最适底物浓度为2 mmol/L。在硼砂-硼酸缓冲液中,荔枝PAL的最适反应p H为8.7。PAL不耐酸碱,尤其不耐酸。荔枝PAL的最适反应温度为45℃,高于75℃则易于钝化,具有较强的耐热性。L-酪氨酸和L-半胱氨酸对荔枝PAL均有明显的抑制作用;金属离子中,Fe2+和Fe3+对荔枝PAL活性具有明显的促进作用,而Ca2+、Cu2+、Co2+、Ag+离子则对其活性有明显的抑制作用。     

冬枣果实过氧化物酶酶学特性分析

以冬枣(Zizyphus jujuba Mill.)果实为材料,研究了枣果实过氧化物酶(Peroxidase,POD)的酶学特性,并探讨了不同抑制剂和激活剂对POD活性的影响,为冬枣的加工与贮藏等过程中防止酶促褐变提供参考和理论依据。结果表明:冬枣枣皮POD活性是枣肉POD活性的10倍,枣果实POD的最适反应温度为40℃,最佳反应底物(愈创木酚)浓度为0.0002mol/L,最大反应速度为Vmax=2.86U/min,米氏常数Km=0.2516mol/L。在0～2.0mmol/L浓度范围内,抑制剂对POD抑制作用为:抗坏血酸>L-半胱氨酸>柠檬酸>EDTA。在0～20.0mmol/L浓度范围内,激活剂对POD激活作用为:FeCl3>CuCl2>吐温-20。     

杏鲍菇多酚氧化酶的酶学特性研究

以杏鲍菇中多酚氧化酶(PPO)为研究对象,采用分光光度法在420nm处对其酶学特性进行研究.结果表明,杏鲍菇PPO的最适底物为邻苯二酚;最适pH为6.0;最适温度为35℃;90℃处理2min,可使酶完全失活;PPO催化的酶促褐变反应动力学符合米氏方程,动力学参数为Km=0.0207mol/L,Vmax=41.32U/min;7种金属离子对PPO酶活性的影响效果各不相同,Al3+、Mn2+对PPO酶活性有一定的抑制作用,Mg2+、Zn2+、Ca2+和Cu2+对PPO酶活性的抑制作用不明显,Fe3+对PPO酶活性有激活作用;抗坏血酸、柠檬酸、L-半胱氨酸和亚硫酸钠对PPO酶活性的抑制作用均随浓度的增大而加强,抑制能力由强到弱依次为:抗坏血酸＞亚硫酸氢钠＞L-半胱氨酸＞柠檬酸.     

芋头多酚氧化酶的酶学性质研究

以邻苯二酚为底物,采用分光光度法研究了芋头多酚氧化酶(PPO)的酶学特性。结果表明:芋头PPO的最适温度pH为7.5,最适温度为40℃;90℃高温处理2 min,可使酶完全失活;PPO催化的酶促褐变反应符合米氏动力学方程,相应动力学参数Km=0.0221mol/L,Vmax=46.08 U/min;4种抑制剂对PPO活性均有不同程度的抑制作用,抑制效果由强到弱顺序为:抗坏血酸>亚硫酸氢钠>L-半胱氨酸>柠檬酸;金属离子Sn2+对PPO活性具有较强的抑制作用,A13+、Cu2+、Mg2+、Ca2+和Co2+对PPO活性有一定的抑制作用,Zn2+对PPO活性具有激活作用,Fe3+、Fe2+和Mn2+对PPO活性几乎没有影响。     

山楂多酚氧化酶的酶学特性研究

研究山楂多酚氧化酶(PPO)的酶学特性。采用分光光度法测定PPO的酶活性,考察底物特异性、p H值、温度、热稳定性、底物浓度、金属离子以及抑制剂对PPO酶活性的影响。实验结果表明,山楂PPO的最适底物为邻苯二酚;最适p H值为6.5;最适温度为40℃;90℃热处理1.0 min或85℃处理1.5 min PPO酶活基本完全丧失;山楂PPO最适底物浓度为0.10 mol/L,PPO酶促褐变反应动力学符合米氏方程,相应的动力学参数Km=55.83 mmol/L,Vmax=98.04 U/min;Al3+对PPO酶活的抑制作用较强,Mn2+、Ca2+和Zn2+次之,Cu2+和Mg2+对PPO酶活抑制作用不明显,Fe3+对PPO酶活有一定的促进作用;四种抑制剂对山楂PPO酶活均有一定的抑制作用,且抑制效果与抑制剂浓度呈量效关系,相同浓度下抑制效果由强到弱顺序为:抗坏血酸L-半胱氨酸亚硫酸氢钠柠檬酸,抗坏血酸的抑制效果最为显著。     

山药苯丙氨酸解氨酶特性的研究

本文研究了山药苯丙氨酸解氨酶(PAL)的动力学特性。结果表明,PAL最适底物浓度为1mmol/L,底物浓度过高或过低都对酶活力不利。PAL在硼酸-氢氧化钠缓冲液中适宜的pH范围为7.6～9.2,最适pH有2个:pH8.0和pH8.8。PAL不耐酸碱,尤其不耐碱。PAL适宜的温度范围为35～55℃,最适反应温度为45℃,超过70℃则容易钝化。L-酪氨酸和L-半胱氨酸对PAL活性都有抑制作用,抑制程度随抑制剂浓度增加而增强。L-酪氨酸的抑制作用较强,是PAL的竞争型抑制剂。L-胱氨酸对PAL的活性无影响。     

黄孢原毛平革菌低温产酶条件优化及酶学性质研究

以酶活力为评价指标,对白腐真菌产酶条件进行优化,并对其部分酶作用特性进行了研究.结果表明:该菌10℃条件下产LiP、MnP和Lac的最佳碳源是葡萄糖;最佳氮源是牛肉膏;最佳培养时间为72h～108h.LiP、MnP和Lac的最适反应pH值范围均为4.4～4.8,最适底物浓度为0.8 mmol/L～1.2mmol/L;金属离子Cu2+、Ca2+ 对LiP、MnP和Lac有激活作用,Fe2+ 对3种酶活有一定的抑制作用;而Na+ 则完全抑制LiP的活性,Zn2+、Mg2+对3种酶活影响不大.     

胡萝卜中过氧化物酶和苯丙氨酸解氨酶特性及抑制条件的研究

经硫酸铵分级沉淀、Sephadex G-100凝胶过滤层析纯化,得到部分纯化的胡萝卜过氧化物酶(POD)和苯丙氨酸解氨酶(PAL).这两种酶的纯化倍数分别为7.44倍和5.87倍,回收率分别为32.51％和5.06％.酶学性质和动力学性质研究表明,胡萝卜POD和PAL的最适pH分别为5.0和8.4;在不同pH值下POD和PAL的活力及其耐受性变化趋势相似.POD的适宜温度为30℃,当温度40～50℃时,PAL酶活力达到最高点.PAL酶液体积为1.6 mL时,反应速度最快;而POD酶液体积分别为1.0mL和1.6mL时,反应速度出现峰值.当POD和PAL底物浓度分别为44.8×10-6 mol/L和0.02 mol/L时,反应速度达到最大值.Na+、10 mmol/L Ca2+、0.1 mmol/L NL4+、Mg2+可以同时显著地(P＜o.05)抑制胡萝卜POD和PAL酶的活力.胡萝卜POD与愈创木酚的亲合力强,PAL与L-苯丙氨酸的亲合力较小.     

茎用芥菜芥子苷酶的特性研究

以黑芥子苷为底物,用葡萄糖测定试剂盒法对茎用芥菜芥子苷酶的特性进行了研究。结果表明,茎用芥菜芥子苷酶的Km为5.22mmol/L,Vmax为0.036mmol/(L·min),其最适反应温度为50℃,最适pH为8.0。抗坏血酸具有激活芥子苷酶的作用,在抗坏血酸浓度为10mmol/L时,酶活力最大。NaCl对该酶有抑制作用,10%NaCl可完全抑制该酶的活性。Al3+、Ca2+、Mg2+、Fe3+对芥子苷酶的影响作用因离子类型不同而异。     

八角莲多酚氧化酶的酶学性质

以邻苯二酚为底物,研究八角莲多酚氧化酶（polyphenol oxidase,PPO）粗提液的酶学特性。结果表明,底物邻苯二酚最适浓度为1.0 mol/L,八角莲PPO的最适pH值为7.0,最适温度为30 ℃,90 ℃高温处理10 min,八角莲PPO酶活力仅剩11.92%。PPO催化的酶促褐变反应符合米氏动力学方程,相应动力学参数Km和vmax分别为0.230 7 mol/L和769.23 U/min。抗坏血酸、甘氨酸、乙二胺四乙酸、柠檬酸对酶活性具有抑制作用,十二烷基硫酸钠表现出激活作用,亚硫酸氢钠对酶活性的抑制作用强于硫代硫酸钠,Al3+和Cu2+对酶活性具有一定的激活作用,Ca2+对酶活性有一定的抑制作用,Mg2+、Fe2+和Fe3+对酶活性影响不显著。     

山药过氧化物酶的特性及抑制研究

以愈创木酚为底物,470nm处测定山药过氧化物酶(POD)的活性,研究了温度、pH、底物浓度、酶浓度、抑制剂和激活剂对其活性的影响。结果表明,山药过氧化物酶的最适反应温度为60℃,最适反应pH为6.0,Km=0.08231mol/L,Vmax=541.518U/(g·min);五种抑制剂对POD的抑制作用由强到弱依次为:VC>L-Cys>NaHSO3>柠檬酸>EDTA,两种激活剂对POD活性的激活作用由强到弱依次为:CuSO4>FeCl3。     

牦牛肉组织蛋白酶L酶学特性的研究

以牦牛背最长肌为原料,从中提取组织蛋白酶L并对其酶学性质进行研究。结果表明,该酶水解专一性荧光底物Z-Phe-Arg-AMC的最适反应pH和温度分别为5.5和40℃,在pH5.0～6.0、40～50℃条件下酶活稳定性最高。最适酶促反应时间和底物浓度分别为30min和25μmol/L。金属离子Ca2+、Cu2+、Mn2+、K+、Fe3+、Fe2+、Zn2+均能抑制酶活。EDTA和EGTA对酶有一定的抑制作用,L-Cys和β-ME对酶起激活作用。     

霍山石斛苯丙氨酸解氨酶的分离纯化及基本性质的研究

对霍山石斛(Detrdrobium huoshanense C.Z.Tang et S.J.Cheng)中的苯丙氨酸解氨酶(phenylalanine ammonia lyase,PAL EC.4.3.1.5)进行了部分分离纯化和性质研究,取组织培养试管苗经过冰浴研磨、硫酸铵分级沉淀、DE-52阴离子交换层析,分离纯化苯丙氨酸解氨酶.经过测定,苯丙氨酸解氨酶的纯化倍数为2.33,蛋白质得率0.41%,酶得率1%.霍山石斛苯丙氨酸解氨酶在硼酸缓冲液中最适PH为8.4,PAL最适反应温度为45℃.霍山石斛苯丙氨酸解氨酶的最适底物浓度为2mmol/L,有两个Km值,即Km1为0.4425×10-2mol/L,Km2为0.847×10-4mol/L.     

芦笋过氧化物酶和苯丙氨酸解氨酶特性及抑制条件的研究

采用分光光度法对芦笋组织中与老化相关的过氧化物酶(POD)和苯丙氨酸解氨酶(PAL)的酶学特性进行了研究。结果表明,芦笋POD和PAL的最适pH分别为4.0和8.8,且在pH值6的柠檬酸缓冲液中酶活力均明显下降;最适温度分别为55℃和60℃,且在20℃以下和60℃以上活性显著降低;1mmol/L Ca~(2+)显著(P<0.05)抑制芦笋POD和PAL酶的活力;POD和PAL最适底物浓度分别为70μL/100mL和0.02mol/L,Km分别为2.694×10~(-4)mol/L和0.1381mmol/L。     

金银花过氧化物酶的三相分离纯化及酶学性质

采用三相分离法提取纯化金银花中过氧化物酶,结果表明最优纯化条件为pH?5.60、硫酸铵质量浓度39.49?g/100?mL、提取液与叔丁醇体积比1∶1.38,在该条件下纯化倍数为5.849,回收率为87.64%。金银花过氧化物酶比活力为1 021.6 U/mg,色素清除率为92%;酶学性质研究表明:金银花过氧化物酶最适温度为30℃,热稳定范围为10~40℃;最适pH值为5,pH值稳定范围为4~7。在金银花过氧化物酶催化的双底物酶促反应中,当H_2O_2浓度一定时,酶对愈创木酚的Km值为8.12?mmol/L,vmax值为1.71?mmol/(min·L)。当愈创木酚浓度一定时,H_2O_2的Km值为0.822?mmol/L,vmax值为1.38?mmol/(min·L)。金银花过氧化物酶与底物的亲和力由强到弱依次是邻苯三酚、邻苯二酚、联甲氧基苯胺、愈创木酚。Ca~(2+)、Cu~(2+)、Zn~(2+)对金银花过氧化物酶有激活作用,Mg~(2+)、Mn~(2+)、柠檬酸、抗坏血酸、L-半胱氨酸、亚硫酸钠、偏重亚硫酸钠、十二烷基磺酸钠对金银花过氧化物酶有不同程度的抑制作用。     

“鸡皮糙”山药过氧化物酶的酶学特性

对"鸡皮糙"山药中过氧化物酶(POD)酶学特性进行了较为系统的研究。结果表明,"鸡皮糙"山药过氧化物酶的最适pH为4.0,最适温度为35℃,在60℃以下有良好的稳定性;该酶与不同底物结合能力的强弱依次为:绿原酸>愈创木酚>焦性没食子酸>邻苯二酚>没食子酸;Ca2+、Fe2+、Ba2+、Mg2+对该酶有激活作用,K+、Mn2+、Na+对该酶有抑制作用;抗坏血酸、L-半胱氨酸、植酸、草酸、柠檬酸、EDTA-2Na、NaHSO3等褐变抑制剂对酶活力均有不同程度的抑制作用,其中抗坏血酸和L-半胱氨酸抑制效果最好。     

金属离子对巨大口蘑褐变相关酶活力的影响

巨大口蘑是一种珍稀食用菌,具有抗褐变特性,了解其褐变相关酶的特性,对探明其抗褐变机理具有重要意义。采用不同金属离子(Zn2+、Mg2+、Cd2+、Cu2+、Fe2+、Fe3+、Mn2+)的梯度溶液浸泡法处理蘑菇切片,并测定了不同金属离子对其褐变相关酶活力影响。结果表明:Cu2+、Zn2+、Mg2+对其多酚氧化酶(PPO)具有显著低促高抑作用,Fe3+为激活作用,Fe2+和Cd2+起抑制效果。0.4~2 mmol/L的Zn2+、Mg2+和Cd2+对其酪氨酸酶(TYE)有显著激活作用,Cu2+具有低促高抑作用;Fe3+、Fe2+和Mn2+对TYE活力影响不显著。Cd2+、Cu2+、Fe3+、Mn2+和Zn2+对其苯丙氨酸解氨酶(PAL)有显著激活效果,Fe2+对PAL有抑制作用;Mg2+对PAL无显著影响。     

毛酸浆多酚氧化酶的酶学特性研究

以毛酸浆中多酚氧化酶(PPO)为研究对象,采用分光光度法在420nm处对其酶学特性进行研究。结果表明,毛酸浆PPO的底物邻苯二酚的最适质量分数为0.04%;最适pH为7.0;最适温度为35℃;100℃处理2min,可使酶完全失活;PPO催化的酶促褐变反应动力学符合米氏方程,动力学参数为Km=0.025mol/L,Vmax=125U/min;抗坏血酸、柠檬酸、L-半胱氨酸和亚硫酸钠对PPO酶活性的抑制作用均随浓度的增大而加强,抑制能力由强到弱依次为:抗坏血酸柠檬酸L-半胱氨酸EDTA亚硫酸氢钠。     

麦芽中脂肪酶活性检测及酶学性质的研究

以乙酸对硝基苯酚酯(p-NPA)为底物,采用对硝基苯酚法测定了麦芽中脂肪酶的活性,并对其酶学性质进行了研究.实验结果表明,麦芽中脂肪酶的最适反应pH为8.5,与5mmol/L的p-NPA的最适反应体积比为1∶7,金属离子Mg2+对麦芽脂肪酶活性有显著的抑制作用,Fe3+、K+则有一定激活作用;该酶热稳定性较强,40℃水浴保温120min,其酶活性几乎保持不变,70℃保温120min后接近失活.麦芽脂肪酶对p-NPA的酶动力学常数Km为0.13mmol/L,Vm值为0.016mg/min.     

曹州木瓜过氧化物酶酶学特性研究

以曹州木瓜果实为试验材料,采用分光光度法对曹州木瓜过氧化物酶(POD)的酶学特性进行研究,为控制木瓜加工贮藏过程中的酶促褐变提供理论依据。试验结果表明:曹州木瓜POD的最适pH 5.8,最适反应温度45℃,90℃处理75 s或者100℃处理30 s后POD活性完全丧失。其过氧化物酶催化的酶促褐变反应动力学符合米氏方程,动力学参数Km=18.17 mmol/L,Vmax=1 666.67 U。抑制剂对POD的抑制作用从大到小依次为VC亚硫酸氢钠柠檬酸EDTA-2Na。Na+,K+,Mg2+,Mn2+和Ca2+对POD具有激活作用,Zn2+,Ba2+和Cu2+在低浓度时对POD有激活作用,高浓度时有抑制作用。