拮抗大肠杆菌的海洋微生物的筛选与鉴定

该研究采用涂布平板法、对峙培养法及琼脂扩散法从北冰洋沉积物样品中分离、筛选出对大肠杆菌（Escherichia coli）具有良好拮抗作用的一株菌株,通过对其菌株形态进行观察、分析其生理生化试验结果以及进行分子生物学技术检测,进行分类鉴定,并进行了抑菌谱研究。结果表明,从北冰洋沉积物样品中共分离纯化出97株菌株,其中21株菌株对大肠杆菌有一定的拮抗作用,且1株菌株拮抗效果最好,编号为105号,平均抑菌圈直径为（19.3±1.0） mm。该菌株被鉴定为萎缩芽孢杆菌（Bacillus atrophaeus）,抗菌谱较为广泛,对大肠杆菌、铜绿假单胞菌、鼠伤寒沙门氏菌、肺炎克雷伯氏菌都具有抑制作用。     

北冰洋来源白色念珠菌拮抗菌株的分离与鉴定

采用涂布平板法、对峙培养法及琼脂扩散法从北冰洋沉积物样品中分离、筛选对白色念珠菌（Canidia albicans）具有良好拮抗作用的菌株,通过形态观察、生理生化试验及分子生物学技术对其进行鉴定,并对其抑菌谱进行研究。结果表明,从北冰洋沉积物样品中共分离纯化出314株菌株,其中,4株菌株对白色念珠菌具有明显拮抗作用,且菌株56#拮抗效果最好,抑菌圈直径为（32.14±0.72） mm。菌株56#被鉴定为枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）,其对大肠杆菌、副溶血性弧菌、铜绿假单胞菌、鼠伤寒沙门氏菌、肺炎克雷伯氏菌、屎肠球菌、金黄色葡萄球菌和鲍曼不动杆菌都有一定的抑制作用,是一株广谱抗菌的海洋微生物。     

抗黄曲霉的海洋微生物的筛选与鉴定

从南大西洋沉积物样品中分离、筛选出对黄曲霉具有良好拮抗作用的菌株并进行鉴定。用涂布平板法分离出205株菌株,通过初筛得到6株对白色念珠菌有明显拮抗作用的菌株;用琼脂扩散法复筛,最终得到1株拮抗效果最好的菌株,为2.6.2-1号菌株,其抑菌圈直径为29.05±2.72mm。通过形态学特征、生理生化特征和16S rDNA测序鉴定,证明该菌株为芽孢杆菌(Bacillus)。抑菌谱研究结果表明,2.6.2-1号菌株对大肠杆菌、铜绿假单胞菌、鼠伤寒沙门氏杆菌、肺炎克雷伯氏菌及鲍曼不动杆菌都有一定的抑制作用,是一株广谱抗菌的海洋微生物。     

致病性尖孢镰刀拮抗菌的筛选与鉴定

该研究从清香型白酒大曲中筛选出一株对致病性尖孢镰刀菌（Fusarium oxysporum）拮抗效果最好的拮抗菌株,采用形态观 察、生理生化试验和16S rRNA序列分析对其进行鉴定,并绘制该菌株生长曲线、考察其培养液中的蛋白类及脂肽类物质的抑菌效 果。 结果表明,从清香型白酒大曲中筛选出一株对致病性尖孢镰刀菌拮抗效果最好的拮抗菌株,编号为P9,其抑菌圈直径达到20 mm 左右。 经鉴定,拮抗菌P9为贝莱斯芽孢杆菌（Bacillus velezensis）;生长曲线结果表明,拮抗菌P9在第9小时生长速率达到最大;抑菌物 质提取实验表明,拮抗菌P9能分泌具有抑菌作用的蛋白类物质及脂肽类物质。     

烟草镰刀菌根腐病（Fusarium spp.）拮抗菌L210的鉴定及生防潜力评价

为筛选烟草镰刀菌根腐病（Fusarium spp.）的高效拮抗菌株,通过平板对峙、盆栽和大田复筛试验,从平顶山烟区烟株根际土壤中分离筛选拮抗菌;利用形态观察、生理生化测试和16S rDNA序列分析对拮抗菌进行鉴定,并对拮抗菌抗镰刀菌根腐病的机理进行研究。结果表明：从10份土壤样品中共分离土壤微生物菌株512株,其中以L210菌株对镰刀菌根腐病抑制效果最好,平板对峙抑菌直径71.4 mm,抑菌率为68.2%;盆栽和大田防病试验的发病率分别为0、6%,病情指数分别为0、1.5,防治效果分别为100%和77.9%。初步鉴定L210菌株为液化沙雷氏菌（Serratia liquefaciens）,其抑菌机理为溶解尖孢镰刀菌的菌丝,使其失去侵染能力,进而抑制病原菌的生长。菌株发酵液中含有几丁质酶和纤维素酶,可溶解病原菌的细胞壁,还可显著诱导提高烟苗中多酚氧化酶（PPO）、过氧化物酶（POD）和苯丙氨酸解氨酶（PAL）等防御酶的活性。因此,菌株L210在烟草镰刀菌根腐病的生物防治中具有较大的应用潜力。     

烟草青枯病拮抗菌的筛选及发酵条件试验

为了筛选对烟草青枯病有拮抗作用的生防菌株,有效防治该病害,从青枯病发病较重田块的健康烟草根系周围土壤中取样,采用点接法筛选出6株对烟草青枯病有较强拮抗作用的菌株,其抑菌圈直径均8 mm,其中菌株XC4抑菌活性较强且拮抗效果稳定。通过单因素试验进行了发酵条件的初步研究,结果表明,当发酵时间48 h,发酵温度30℃,p H值7,接种量2%,转速190 r/min,碳源为牛肉膏,氮源为胰蛋白胨时,菌株XC4发酵效果最好。发酵条件经初步优化,菌株XC4对青枯病菌的拮抗效果由原来的抑菌圈直径12.5 mm增至21.5 mm,比优化前提高了72%。     

青方腐乳中益生乳酸杆菌的筛选鉴定及益生特性研究

该研究从青方腐乳样品中分离具有潜在益生功效的乳酸杆菌,通过形态学观察及分子生物学技术对其进行鉴定。对筛选菌株进行人工胃液、胆盐的耐受性及其细胞表面特性测定,并对复筛菌株进行清除亚硝酸钠、降胆固醇、乳糖消耗、抑菌和抗氧化等益生特性试验。结果表明,从青方腐乳样品中共分离筛选得到24株菌（编号为S1～S24）,通过人工胃液、胆盐的耐受性及其细胞表面特性测定复筛得到8株菌,分别为菌株S6、S10、S11、S13、S17、S21、S23、S24,其中菌株S6被鉴定为植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）;其降亚硝酸钠、胆固醇及乳糖的能力分别为86.84%、61.22%、29.13%;羟基、DPPH自由基清除率、Fe2+螯合率分别为79.15%、56.29%、58.14%。综上,菌株S6对所有试验病原菌的拮抗能力最强,可作为潜在的益生菌。     

人参根腐病拮抗菌的筛选、鉴定及其抑菌活性

目的：从人参根际土壤中筛选出拮抗人参根腐病的菌株,初步研究其抑菌作用。方法：采用平板稀释法从人参根际土壤中分离获得菌株,以人参根腐病菌为靶标菌采用平板对峙法筛选出拮抗菌;通过形态学特征、生理生化特征及16S rDNA序列分析对筛选出的拮抗菌进行鉴定;检测拮抗菌无菌发酵液对根腐病菌菌丝生长、孢子萌发的影响,同时测定拮抗菌的抑菌谱。结果：分离获得一株对人参根腐病原菌拮抗作用较强的菌株HB-3,经鉴定菌株HB-3为解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens）。菌株无菌发酵液对人参根腐病菌菌丝生长和孢子萌发均有显著抑制作用;菌株HB-3的抑菌谱较广,对根腐病菌、疫霉病菌、锈腐病菌、菌核病菌、灰霉病菌均有一定的抑菌活性。结论：筛选得到一株解淀粉芽孢杆菌HB-3,能显著抑制人参根腐病菌的生长,对人参根腐病有较强的生物防治效果。     

洛阳地区烟草根际土壤中多粘类芽孢杆菌的分离与鉴定

为从烟草根际土壤中筛选得到对烟草土传病原真菌具有拮抗作用的细菌菌株,用稀释平板法分离土壤样品获得根际细菌菌株,再用平板对峙培养法测定细菌菌株的拮抗作用,通过形态特征观察、生理生化测定及16S rDNA序列分析来鉴定拮抗细菌的种类。结果表明,从30份根际土壤样品中共分离、纯化得到180个细菌单菌落,其中49株细菌对供试病原真菌具有一定的抑制作用。菌株TS681、TS682和TS683对3种病原真菌均具有较好的拮抗作用,对瓜果腐霉的抑菌率均大于51.43%,对寄生疫霉的抑菌率均大于68.75%,对尖孢镰刀菌的抑菌率均大于60.00%。结合菌株的形态特征、生理生化特征与16S rDNA序列的分析结果,将菌株TS681、TS682和TS683鉴定为多粘类芽孢杆菌(Paenibacillus polymyxa)。     

产几丁质酶菌拮抗烟草黑胫病菌研究

从烟草根际土中分离筛选到两株产几丁质酶能力较高、对烟草黑胫病菌有稳定拮抗作用的菌株ZY-9-1和ZY-19-2。将两菌株发酵液用于烟草黑胫病菌的拮抗试验和初步大田防治试验并研究其对烟叶品质的影响,结果表明:在培养基平板上,量菌株发酵液对烟草黑胫病菌的生长有较好的抑制作用;菌株ZY-9-1和菌株ZY-19-2发酵液应用于大田后,对烟草黑胫病有一定的防治效果,防效分别达到56%和50%;试验样品经过常规化学分析和感官评吸,结果表明菌株发酵液对烟叶品质无不良影响。     

真空包装冷鲜牛肉中生物保护菌的分离鉴定与生物学特性

从真空包装冷鲜牛肉中分离筛选得到7 株具有生物保护潜力的乳酸菌，通过细菌形态学观察、生理生化鉴定和16S rDNA分子生物学鉴定确定为清酒乳杆菌（Lactobacillus sakei）。所有分离菌株均在25～35 ℃生长良好，其中菌株RS-16和RS-25的生长及产酸能力较强，除RS-33和RS-41外，其他菌株均未检测出耐药性或毒力基因。使用琼脂扩散法对7 株分离菌的抑菌性进行测定，结果表明，分离菌株对所有指示菌均表现出拮抗效果，且菌株RS-16和RS-25对鼠伤寒沙门氏菌的拮抗效果显著优于其他菌株；对保护菌的抑菌产物分析表明其抑菌性来源于有机酸。本研究从真空包装冷鲜牛肉中分离鉴定并筛选得到2 株具有生物保护潜力的清酒乳杆菌，丰富了生物保护菌的种质资源。     

烟草野火病拮抗生防菌的筛选、鉴定与应用

为筛选出烟草野火病拮抗生防菌,开发防治烟草野火病的新型生物农药,降低烟叶农药残留,提高烟叶的安全性,从烟田采集的健康烟草叶片经平板划线法分离和纯化后得到287个细菌分离物,从中筛选到14个对烟草细菌性野火病有抑制作用的拮抗生防菌,测得其中具有较强抑制作用的菌株抑菌带宽度为9.3 mm,经16S rDNA序列鉴定,该菌属于枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis。烟草叶片经该拮抗菌液诱导后接种,叶片内主要防御酶苯丙氨酸解氨酶(PAL)、过氧化物酶(POD)、多酚氧化酶(PPO)活性均显著增强。防效测定表明:施用生防剂后接种野火病菌的处理,拮抗菌株防治效果达97.54%,对照农用链霉素防治效果为41.44%。先接种野火病菌后施生防剂的处理,拮抗菌株防治效果达51.40%,对照农用链霉素防治效果为50.69%。说明该拮抗菌株的预防效果高于当前生产上使用的农用链霉素,且其预防效果优于治疗效果。     

Antibiosis of some lactic acid bacteria including Lactobacillus acidophilus toward Listeria monocytogenes

Eleven strains of lactic acid bacteria were tested by the 'spot' on the 'lawn' method for their antagonistic activity against four strains of Listeria monocytogenes. Four out of the five strains of lactic acid bacteria most antagonistic toward the pathogen were those cultures known to produce bacteriocins. Four other strains of lactic acid bacteria were not antagonistic against Listeria by this method. Seventeen inhibition zones of the pathogen were obtained at 25 degrees C as compared to 10 at 32 degrees C. Lactobacillus acidophilus strains NU-A and 88, growing in the presence of L. monocytogenes in milk prevented the latter from attaining populations it would have in pure culture (P less than 0.01). 10(1.4)-10(3.5) lower numbers were noted. L. acidophilus in most cases exhibited a bacteriostatic effect toward the pathogen except for strain 88 which appeared to have a bactericidal effect (P less than 0.01) against Listeria strain OH. The lactobacilli reduced the pH of the milk to 4.7 over a 24 h period, showing that acid played a role in the observed antibiosis.     

葡萄灰霉病生防菌株的筛选及其拮抗机理初探

以新疆哈密瓜、蟠桃及红枣中分离出的59株内生细菌为出发菌株,采用离体实验和活体实验,从中筛选出11株对葡萄灰霉菌具有较好抑制作用的菌株;经低温作用、农药耐受性及致病菌广谱性等复筛实验,从红枣中获得1株性能优良的目标菌株T2,该菌在0 ℃条件下对葡萄灰霉菌的抑菌率可达58.43%,农药耐受性达68.2%～98.4%,对致病菌具有广谱抗性,其中桃褐腐病菌和草莓灰霉菌的病原菌菌落直径均小于30 mm,葡萄炭疽菌病原菌菌落直径小于50 mm。经过形态、生理生化和16S rDNA同源性分析,确定菌株T2为解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens）,该菌主要依靠菌体本身和重寄生作用对葡萄灰霉菌发挥拮抗作用。     

冬枣采后病害拮抗菌的筛选和鉴定

从采集的土样中分离筛选11 株对冬枣细交链格孢病菌、多隔镰孢霉和美澳核果褐腐串珠霉具有较好抑制作用的拮抗菌。通过平板对峙生长法测抑菌半径。结果表明：其中B26 的抑菌效果最显著,对细交链格孢的平均抑菌圈半径为15.8mm,抑制率达78.8%,对冬枣多隔镰孢霉和美澳核果褐腐串珠霉的平均抑菌圈半径分别为14.3mm 和12.8mm,抑制率分别达71.3% 和63.8%。通过在PDA 生长的形态学观察、生理生化实验以及PCR产物测序结果综合分析,初步鉴定B26 为枯草芽孢杆菌。     

Antagonistic effect of coryneform bacteria from red smear cheese against Listeria species

A total of 187 coryneform bacteria were isolated from red smear and screened for inhibitory effects against 16 strains of Listeria species. Culture filtrates from Brevibacterium linens (16 strains), Arthrobacter nicotianae (4 strains) and Arthrobacter nucleogenes (3 strains) showed clear zones of inhibition. The antagonistic effect was seen against 26 to 87% of 91 Listeria strains tested. A. nicotianae and A. nucleogenes were more effective against Listeria innocua and Listeria ivanovii than against Listeria monocytogenes. No species specifically was observed for B. linens, but there was a difference regarding the inhibitory activity of individual culture filtrates. When culture filtrates of the test strains were added to Listeria broth cultures, the maximum growth level was not attained. Inhibition in broth cultures was dependent on the concentration of culture filtrates. Culture filtrates from the late stationary phase had a stronger inhibitory effect on the growth of L. monocytogenes. The nature of the inhibitory effects remained unclear. Attempts to characterize the nature of the antagonism showed that the culture filtrates lost their inhibitory activity upon heating, and the molecular size of the inhibitory substances were greater than 12-14 kDa.     

烟草黑胫病拮抗内生细菌的分离、鉴定及防效测定

采用常规分离方法从健康烟株的根、茎、叶中分离得到内生细菌269株,从中筛选出7株对烟草黑胫病病原菌具有明显拮抗作用的菌株,它们的抑菌半径达到6 mm以上。菌株05-4004、05-2501培养液滤液中存在具有明显抑菌作用的活性成分。致病性试验中,发现菌株701-1在人工接种条件下有致病能力或潜在致病性,选择余下6株拮抗细菌进行了温室盆栽试验,以05-4004、05-2002两株烟草内生细菌对烟草黑胫病的防效最好,分别为46.6%、45.2%。促生试验中,NB培养液和清水对照的种子发芽率分别为84.3%、82.7%,而经过05-2002和05-4004除菌滤液浸种后,发芽率分别提高到93.5%和93.7%。经过05-4004、05-2002灌根处理后,株高、叶长、叶宽、有效叶片数、叶面积明显增加。证明菌株05-2002、05-4004同时还具有一定的促生作用。以细菌16S rDNA同源性为基础的系统发育分析表明05-4004和Bacillus pumilus(EU366363)、Bacillus safensis(AY030327)处于同一分支,相似性为100%,05-4004鉴定为芽孢杆菌属。     

刺梨白粉病拮抗菌的筛选及其抑菌机制初探

为筛选出对刺梨白粉病具有良好抑制作用的拮抗菌,从健康刺梨及其根系土壤进行微生物分离,以刺梨白粉病病原菌(Sphaerotheca pannosa)为靶标菌株,采用叶盘法对拮抗菌进行筛选,通过形态学、生理生化特征以及16S rRNA对筛选的拮抗菌进行鉴定,测定其OD值绘制生长曲线,并探究拮抗菌对病原菌孢子萌发和菌丝的影响及其产酶情况。结果表明:共分离得到48株细菌,其中JK-6和JK-32具有显著抑制作用,经鉴定为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)和空气芽孢杆菌(Bacillus aerius),对刺梨白粉病的防治效果达到了60%和57%;拮抗菌作用下致使病原菌的孢子在萌发过程中发生异常膨大现象,菌丝表面变得粗糙、膨大、缠绕和融断;产酶情况表明两株拮抗菌均可产生蛋白酶、纤维素酶以及果胶酶。为刺梨白粉病的生物防治提供了理论基础,具有进一步研究价值。     

苹果腐败霉菌的拮抗酵母菌筛选鉴定及拮抗机理初探

从苹果果皮中筛选出对引起苹果采后病害的扩展青霉(Penicillium expansum)、互隔交链格孢霉(Alternaria alternata)和黑曲霉(Aspergillus niger)具有拮抗作用的酵母菌,并初步研究其拮抗机理。结果表明:筛选得到两株可以同时拮抗三种腐败霉菌的拮抗酵母菌Y4和Y9,根据酵母菌菌落性状、生理生化特征并结合分子生物学的分析结果,鉴定为Candida railenensis和Aureobasidium pullulans,其中A.pullulans为类酵母真菌。C.railenensis的最佳拮抗浓度为109 CFU/mL,对P.expansum、A.alternata和A.niger的菌丝生长、孢子萌发和芽管生长均有显著(p<0.05)的抑制作用。扫描电镜观察到C.railenensis能够包围和吸附腐败霉菌孢子,与它们竞争营养与空间,此外还能够吸附P.expansum菌丝体与其直接作用。C.railenensis的主要抑病机理是营养与空间竞争,并且其生防效果的发挥是多种方式共同作用的综合结果。