牛骨胶原蛋白抗菌肽的制备及其抑菌活性

以牛骨胶原蛋白为原料,采用胃蛋白酶、碱性蛋白酶、中性蛋白酶、胰蛋白酶、动物复合蛋白酶、风味蛋白酶和木瓜蛋白酶对其进行水解,确定最佳的酶解时间和酶用量,并比较酶解效果.酶解液经离心过滤和真空冷冻干燥后,测定其对金黄色葡萄球菌和肠炎沙门氏菌的抑制活性.结果表明:动物复合蛋白酶酶解牛骨胶原蛋白得到的酶解液的水解度最高,其最佳的酶解时间为4h,最适宜的酶添加量(占骨质量的百分比)为1.25%;风味蛋白酶和中性蛋白酶的酶解液对金黄色葡萄球菌具有抑菌效果,其抑菌圈直径分别为6.03mm和7.97mm;动物复合蛋白酶、风味蛋白酶和胰蛋白酶对肠炎沙门氏菌具有抑菌效果,其抑菌圈直径分别为8.67、9.10、9.03mm.     

酶解水牛奶制备抗凝血肽的工艺研究

目的:本文以新鲜水牛奶为原料,研究木瓜蛋白酶、中性蛋白酶及碱性蛋白酶复合酶解、混合酶解水牛奶的作用,比较不同水解方式的作用效果;并采用凝血酶滴定改进法测定水解液抗凝血活性。方法:分别进行三种蛋白酶单因素水解实验,确定各种酶的最适水解条件;在此基础上进行复合酶解与混合酶解实验,测定水解度和抗凝血活性。结果:木瓜蛋白酶的最适水解条件为:水解温度60℃、水解时间2.0 h、p H5.0、料水比1∶2(v/v)、酶用量6000 U/(m L底物);中性蛋白酶的最适条件为:水解温度40℃、水解时间3.0 h、料水比1∶2(v/v)、p H6.0、酶用量6000 U/(m L底物);碱性蛋白酶的最适条件为:水解温度50℃、水解时间4.0 h、料水比1∶2(v/v)、p H8.0、酶用量6000 U/(m L底物)。复合酶解法制备的水解液其抗凝血活性均高于混合酶解,最高抗凝血活性为52.0 ATU/m L。结论:本实验条件下,加酶组合为"中性蛋白酶-木瓜蛋白酶-碱性蛋白酶"的复合酶解制备的水解液具有最高的抗凝血活性,即52.0 ATU/m L。     

响应面法优化驼乳乳清蛋白酶解制备抑菌肽工艺参数

驼乳具有丰富的营养价值和较高的药用价值,其乳清蛋白中含有丰富的保护性蛋白,且含有较高活性的抗菌因子。该研究首先利用单因素试验,以水解度（DH）为评价指标,研究胃蛋白酶、胰蛋白酶、碱性蛋白酶和木瓜蛋白酶4种蛋白酶对驼乳乳清蛋白酶解的影响。确定了胃蛋白酶为水解驼乳乳清蛋白制备抑菌肽的最佳蛋白酶。在单因素试验基础上,以对大肠杆菌（Escherichia coli）抑菌率为评价指标,利用响应面法优化技术对胃蛋白酶制备抑菌肽的工艺进行了优化,获得胃蛋白酶最佳酶解工艺参数：酶解温度为40 ℃、酶解pH为3.00、酶解时间为5.3 h,酶解底物浓度为4%,酶与底物浓度比为1∶100。在此最佳工艺条件下,大肠杆菌抑菌率为83.91%。     

Alcalase 2.4L碱性内切酶和Flavourzyme风味酶酶解大豆分离蛋白及脱苦工艺优化

以大豆分离蛋白为原料,选用Alcalase 2.4L碱性内切酶和Flavourzyme风味蛋白酶对大豆分离蛋白进行酶法水解及脱苦工艺研究。以水解度和苦味分值为考察值,对酶解工艺进行优化,确定最佳条件。结果表明:Alcalase2.4L碱性内切酶最佳酶解条件为加酶量14 000 U/g、酶解温度60℃、酶解pH8.5、底物质量分数5%,酶解时间2h,最终水解度为45.34%,此时水解液苦味值为4。Flavourzyme风味蛋白酶对水解液进行二次水解的最优酶解条件为加酶量300 U/g、酶解温度55℃、酶解pH 7.0、酶解时间3 h,此条件下大豆分离蛋白水解液苦味值最低为1.2。Alcalase2.4L碱性内切酶和Flavourzyme风味蛋白酶水解大豆分离蛋白使水解度得到较大提高的同时也解决了水解液的苦味问题。     

响应面法优化芝麻蛋白酶解工艺及其产物 抑菌活性的研究

目的为了得到芝麻蛋白双酶分步酶解的最佳工艺参数以及酶解产物的抑菌活性。方法采用响应面法优化双酶分步酶解芝麻蛋白的工艺参数,并以抑菌圈直径大小为指标,考察芝麻蛋白酶解产物对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的抑菌活性以及最小抑菌浓度。结果响应面优化得到双酶分步酶解的最适酶解条件为:总酶量6200 U/g,碱性蛋白酶:木瓜蛋白酶=3:1,先加入碱性蛋白酶后反应1.6 h后加入木瓜蛋白酶,总反应时间为4 h。在此条件下,芝麻蛋白水解度实测值为29.673%,与预测值30.622%相近。芝麻蛋白酶解产物对大肠杆菌无抑制作用,但是具有抑制金黄色葡萄球菌的活性,得到其最小抑菌活性浓度为25.29mg/m L。结论响应面分析法优化芝麻蛋白双酶分步酶解工艺是可行的,芝麻蛋白酶解产物具有抑制金黄色葡萄球菌的活性。     

响应面试验优化酶法制备辣木籽多肽工艺及其抑菌活性分析

以辣木籽蛋白粉为原料,首先筛选蛋白水解效果较佳的蛋白酶,其次考察酶添加量(酶底质量百分比)、料液比、酶解温度及酶解时间对蛋白水解度和肽得率的影响,并结合响应面法优化辣木籽多肽制备工艺,最后研究该酶解产物的抑菌活性。实验结果表明,碱性蛋白酶具有较好的蛋白水解度,酶法制备辣木籽多肽的最佳工艺条件为碱性蛋白酶添加量5.50%、pH9.0、料液比1:30(g/mL)、酶解温度62.50℃、酶解时间143 min,在此条件下肽得率实际值为(84.43±2.31)%、蛋白水解度为(20.69±0.46)%。该辣木籽蛋白酶解产物对单增李斯特菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、鼠伤寒沙门氏菌等4种致病菌株均有抑制作用,最小抑菌浓度依次为3.00 mg/mL、0.75 mg/mL、0.38 mg/mL、0.75 mg/mL,对培养至4.5 h后的金黄色葡萄球菌呈现较好抑制效果。     

微生物酶水解林蛙肉蛋白质及产物抗氧化活性初探

研究了微生物碱性蛋白酶对林蛙肉蛋白质的水解作用及其水解液的抗氧化活性,探讨了酶浓度、水解温度、时间、pH值对林蛙肉蛋白质水解度的影响,同时用硫氰酸铁和改进的邻苯三酚法测定分析水解液的抗氧化活性.结果表明,酶解条件酶浓度为3%、温度为45℃、时间为2.5h、pH6.0时可以获得较高水解度,同时水解液对Fe3+和超氧阴离子自由基(O2·)具有较高清除率.     

羊骨多肽酶法制备工艺优化及抗氧化活性研究

以羊骨粉为原料,用碱性蛋白酶进行酶解制备具有抗氧化活性的酶解多肽液。以水解度为指标,优化了羊骨多肽酶法制备工艺条件,并对酶解液的抗氧化能力进行了测定。结果表明,碱性蛋白酶制备羊骨多肽的最佳制备工艺条件为酶解时间5 h,酶解温度45 ℃,加酶量8 200 U/g,酶解pH值10,该条件下羊骨粉的水解度为(28.36±0.02)%。羊骨粉酶解液与对照组(未被碱性蛋白酶酶解的羊骨粉溶液)的抗氧化能力均随着溶液浓度的增加而上升,当酶解液浓度达到2.5 mg/mL时对DPPH自由基、羟自由基、超氧阴离子自由基清除率和还原力均达最大值,分别为(65.42±0.11)%,(82.30±0.27)%,(79.83±0.22)%,0.484±0.007,显著高于对照组(P＜0.05)。说明碱性蛋白酶水解羊骨粉得到的酶解多肽液具有体外抗氧化活性。     

[鱼回]鱼骨胶原多肽的制备工艺研究

鱼骨中胶原蛋白含量丰富,本研究采用碱性蛋白酶和风味蛋白酶对鲴鱼骨进行分步酶解制备骨胶原多肽。通过单因素和正交优化实验,确定碱性蛋白酶水解鲴鱼骨胶原蛋白的最佳工艺条件为：料液比（w／v）4：50,酶解温度45％,加酶量4％,pH值8,酶解时间3h,在此条件下,水解度达到39．49％。风味蛋白酶分步酶解的最佳工艺条件为酶解温度50％,加酶量4％,pH值7．5,酶解时间3h,在此条件下,水解度达到47．2％,水解产物的风味在一定程度上也得到了改善。     

响应面法优化猪血红蛋白抗菌肽的制备工艺

以猪血红蛋白为原料,利用筛选出的蛋白酶水解制备抗菌肽,以酶解液抑菌率和水解度为指标,通过单因素试验对酶解温度、加酶量和酶解时间3个主要工艺参数进行研究,在此基础上,通过响应面优化酶解工艺,建立数学模型.结果表明,胰蛋白酶最适合水解猪血红蛋白制备抗菌肽,其最佳条件为酶解温度49.72℃、加酶量2852.81U/g、酶解时间5.19h,酶解产物抑菌率的理论预测值89.70％,实际测量值90.32％.可见,利用胰蛋白酶水解猪血红蛋白能够得到抑菌活性较高的酶解产物,且该模型能够较好的预测抗菌肽制备最佳工艺条件.     

鳄鱼皮酶解产物功能特性及抗氧化活性

为了解鳄鱼皮酶解产物功能特性和抗氧化活性,采用2种商业蛋白酶(木瓜蛋白酶、碱性蛋白酶)在各自最适反应条件下分别酶解鳄鱼皮,研究水解度(DH)、酶种类及pH值对酶解产物功能特性及抗氧化活性的影响.结果显示:随着酶解时间延长,鳄鱼皮水解度逐渐增加,鳄鱼皮在碱性蛋白酶酶解作用下水解度较高,水解4h时可达12％;木瓜蛋白酶酶解产物与碱性蛋白酶酶解产物的溶解性差异不显著(P＞0.05).相同水解度下,碱性蛋白酶酶解产物的热稳定性在pH4时优于木瓜蛋白酶酶解产物.酶解时间在1h之内,木瓜蛋白酶酶解物亚铁离子螯合力明显增强;随着时间延长,酶解产物亚铁离子螯合能力变化不显著(P＞0.05).酶解3h后碱性蛋白酶酶解产物亚铁离子螯合能力高于木瓜蛋白酶酶解产物,但木瓜蛋白酶酶解产物具有较强的清除DPPH自由基能力.综上表明,碱性蛋白酶水解作用的鳄鱼皮水解度较高,其酶解产物乳化活性和热稳定性优于木瓜蛋白酶酶解产物;鳄鱼皮酶解产物抗氧化能力较强,有较高的开发利用价值.     

预处理对酶解过程中胶原ACE抑制肽释放的影响

本文探究了酸、碱、热、超声、超高压五种预处理方式对胶原蛋白制备ACE抑制肽的影响。胶原蛋白经预处理后采用碱性蛋白酶酶解制备水解液,对水解液的水解度、ACE抑制率和分子量分布情况进行测定,结果显示碱和超声处理组水解液的水解度、ACE抑制率均高于未处理组,表明这两种预处理方式可能利于胶原三螺旋区位点的暴露;DSC和红外分析预处理后的胶原蛋白结构显示,碱处理改变了胶原蛋白构象特点,影响非共价键的平衡,胶原三螺旋区域的位点被充分暴露,但保持了亚基的完整性,超声处理破坏了胶原螺旋区的共价交联,暴露出更多疏水性位点,利于碱性蛋白酶酶解;而酸、热和超高压处理主要影响胶原非螺旋区,无法在酶解过程中促进胶原ACE抑制活性肽段的释放。     

六种商品蛋白酶对鲢鱼蛋白水解效果比较研究

选用中性蛋白酶、碱性蛋白酶、胰蛋白酶、木瓜蛋白酶、动物蛋白水解酶、风味蛋白酶对鲢鱼蛋白进行酶解,以水解度为评价指标筛选出各种蛋白酶的最佳水解工艺条件,通过水解度和水解液综合风味选出水解效果最佳的酶.结果表明:风味蛋白酶、动物蛋白水解酶和木瓜蛋白酶为水解效果较好的酶,其水解度和水解液综合风味评分分别为:风味蛋白酶16.97％和8.4,动物蛋白水解酶23.38％和7.0,木瓜蛋白酶26.34％和5.6;三种酶的最佳水解条件分别为:风味蛋白酶酶用量为0.7％(W ∶ W),温度55℃,pH值8.0,液固比5 ∶ 1(W∶ V),时间4 h;动物蛋白水解酶酶用量为0.7％(W∶ W),温度55℃,pH值8.0,液固比5∶ 1(W ∶ V),时间4 h;木瓜蛋白酶酶用量为0.7％(W ∶ W),温度55℃,pH值7.0,液固比5 ∶ 1(W ∶ V),时间4h.     

羊血浆蛋白抗氧化肽酶法制备与工艺优化

以羊血浆蛋白为原料,采用碱性蛋白酶、中性蛋白酶、胃蛋白酶、胰蛋白酶、风味蛋白酶、木瓜蛋白酶、糜蛋白酶7种蛋白酶进行酶解,以酶解物的总抗氧化能力和水解度为评价指标,确定最佳的蛋白酶;采用单因素试验方法和正交试验方法对温度、pH和酶解时间等因素进行优化;采用Tricine-SDS-PAGE凝胶电泳分析羊血浆蛋白抗氧化肽分子量分布。结果表明,碱性蛋白酶酶解羊血浆蛋白过程中,其酶解物的总抗氧化能力均显著高于其他6种蛋白酶,水解度仅次于风味蛋白酶,显著高于其他5种蛋白酶(p0.05);影响碱性蛋白酶酶解羊血浆蛋白获得抗氧化肽的因素主次顺序为温度酶解时间pH;结论:碱性蛋白酶是制备羊血浆蛋白抗氧化肽的最佳蛋白酶,碱性蛋白酶酶解羊血浆蛋白获得羊血浆蛋白抗氧化肽的最佳工艺条件为酶解6 h,温度55℃,pH11,且其组成复杂,由多种小分子肽组成。     

胶原酶解复合物的制备及其抗冻活性

以水解度为指标,优化了碱性蛋白酶水解猪皮胶原蛋白的条件。在此基础上,制备了不同水解度的酶解复合物,并对其抗冻保护活性进行了研究。结果表明,酶浓度5%(w/v),酶解温度50℃,酶解时间5 h,p H值8.0,胶原质量浓度为15 mg/m L可得到最高水解度,为猪皮胶原蛋白最佳的酶解条件。在此条件下制备水解度分别为4%、6%、8%、10%、13%和16%的酶解复合物,发现水解度为10%的酶解复合物,在使用质量浓度为1.2 mg/m L时对微生物的保护活性最高。该水解度的酶解复合物还能显著抑制冰淇淋的重结晶,并具有较高的热滞活性,为4.64℃,其分子质量主要分布在小于1 000 Da范围内。     

鹅血红蛋白抗氧化活性肽的制备及工艺研究

以新鲜鹅血为原料提取血红蛋白,利用碱性蛋白酶、中性蛋白酶及风味蛋白酶来酶解鹅血红蛋白,采用甲醛滴定法测定鹅血红蛋白水解液的水解度,通过研究水解液对DPPH自由基清除能力来检测水解产物的抗氧化活性,并分析了酶解温度、时间、pH及酶与底物比对鹅血红蛋白水解产物的影响.结果表明,采用中性蛋白酶获得的酶解产物抗氧化活性最高.在中性蛋白酶的作用下,通过单因素及正交实验,优化出产物抗氧化活性较高的酶解工艺条件:温度50℃,酶解时间8h,pH7.0,酶与底物比8000U/g,在最佳酶解条件下,产物对DPPH自由基的清除率为89.6％.     

酶法水解鸭肉蛋白制备鸭肉肽

采用碱性蛋白酶水解鸭肉蛋白制备鸭肉肽,通过响应面分析方法时水解条件进行优化,得到较佳的水解工艺为:酶解温度54.7℃,酶用量2.03%,底物浓度3.78%,pH9.86,时间为120min.在此条件下,碱性蛋白酶的水解度为29.6%,水解液中鸭肉肤含量为43.7%,氨基酸含量为25.79 g/L,其中必需氨基酸为10.53 g/L.     

鮰鱼皮明胶的水解工艺

采用碱性蛋白酶对鮰鱼皮明胶进行水解,先确定水解度的测定方法,并通过单因素试验和正交试验对碱性蛋白酶水解鮰鱼明胶的工艺条件进行优化。结果显示：利用改进的紫外分光光度法测定鮰鱼皮明胶水解液的水解度,此方法操作简单、结果较准确,可快速测定明胶的水解度。碱性蛋白酶水解明胶的最佳工艺条件为加酶量4000U/mL、酶解温度50℃、pH9.5、酶解时间3h,此时明胶的水解度达到35.12%。     

酶水解鲫鱼蛋白质及产物抗氧化活性初探

本实验主要研究了碱性蛋白酶对鲫鱼的水解作用及其水解液的抗氧化活性,探讨了酶浓度、底物浓度、水解温度、时间、pH对鲫鱼蛋白质水解度的影响,同时用DPPH(二苯基苦基苯肼)自由基法和改进的邻苯三酚法测定分析水解液的抗氧化活性。结果表明:酶解条件为E为4%,S为10%,pH8.0,时间为4h,温度为50℃时可以获得较高水解度,同时水解液对DPPH自由基和超氧阴离子自由基(O2·)具有较高清除率。     

Alcalase 2.4L催化牛骨胶原蛋白水解反应及其动力学研究

对碱性蛋白酶Alcalase 2.4L水解牛骨胶原蛋白的工艺以及动力学特征进行了研究.探讨底物浓度、酶量、温度、pH、时间等因素对胶原蛋白水解度的影响,研究确定了碱性蛋白酶Alcalase 2.4L水解牛骨胶原蛋白的最佳水解条件为:在pH8.5,60℃,底物浓度为80g/L,加酶量为40μL/g条件下水解3h,水解度可达13.5%,优于其他蛋白酶.根据所建立的pH-stal酶解体系确定了Km为1.6362mol/L,Vmax为0.3444mol/L·h,为更有效地利用胶原蛋白资源奠定了理论基础.