泡菜源屎肠球菌Enterococcus faecium R2的环境胁迫耐受性及安全性评价

屎肠球菌R2是分离于泡菜中的优势产酸菌,可高效利用豆腐黄浆水中的低聚糖产酸制备酸浆,可作为一种新型酸浆纯种发酵剂。该文通过毒力基因检测、万古霉素耐药基因筛查、有害代谢产物实验来评价屎肠球菌R2的安全性,并进一步研究该菌株对外界环境的耐受性,为生产一种新型酸浆纯种发酵剂奠定基础并为其实际生产应用提供科学基础。结果表明,屎肠球菌R2的毒力基因检测和万古霉素耐药基因筛查及有害代谢产物检测结果均为阴性,也不会产生溶血现象;该菌株对外界环境中的酸性、胆盐及高渗透压耐受性较好且具有一定的自聚集性和疏水性。由此可见屎肠球菌R2具有安全性。     

人粪便来源的屎肠球菌潜在降胆固醇能力研究

高胆固醇血症为心脑血管疾病的重要诱因,使用具有降胆固醇活性的乳酸菌调控血清胆固醇水平具有重要意义。研究从健康人群粪便中分离获得1株动物双歧杆菌和5株屎肠球菌,考察了这些菌株的胆固醇脱除能力、胆盐耐受能力、模拟胃肠道条件耐受能力等特性。结果表明,屎肠球菌MCLF03和MCLF04对胆固醇的脱除能力显著高于其他菌株,脱除率分别为(38.9±3.77)%和(61.0±4.75)%。屎肠球菌MCLF04在0.5%胆盐溶液、人工胃液、人工肠液中的耐受性均高于屎肠球菌MCLF03。屎肠球菌MCLF04具有潜在的降胆固醇特性,可用于降胆固醇功能性食品的开发研究。     

豆酱中产细菌素屎肠球菌的筛选及特性分析

从农家传统发酵豆酱中分离出164株疑似乳酸菌,其中有84株球菌。试验筛选到1株产细菌素的屎肠球菌R1并对其理化性质进行研究。该细菌素对金黄色葡萄球菌、单核细胞增生李斯特菌、大肠杆菌等具有较好的抑制作用,对酸和热稳定。经鉴定该细菌素种类为肠球菌素P。菌株R1在p H3.0模拟胃液中3 h存活率达86.35%,在模拟肠液中6 h存活率达87.72%,对人工消化液耐受性良好。药敏试验结果表明,菌株R1对青霉素、氨苄西林、环丙沙星、氯霉素和庆大霉素敏感,对诺氟沙星和红霉素不敏感,未检测出毒力因子,具有潜在安全性。     

动物双歧杆菌乳亚种菌株HCS04-002益生特性的研究

该研究测定动物双歧杆菌乳亚种（Bifidobacterium animails subsp. lactis）菌株HCS04-002对酸、胆盐、人工胃液和人工肠液的耐受性,并采用邻硝基苯-β-D-吡喃半乳糖苷（ONPG）法及甘油三酯试剂盒分别测定菌株的β-半乳糖苷酶活力和甘油三酯降解能力。结果表明,菌株HCS04-002在pH 2.0和pH 3.0环境下处理17 h,存活率达60%以上;在0.3%、0.5%、1.0%、1.5%的胆盐环境处理17 h,存活率达70%以上;经人工胃液和人工肠液消化后,存活率达99%以上;β-半乳糖苷酶活力为0.78 U/mL;甘油三酯降解率为43%。综上,动物双歧杆菌乳亚种菌株HCS04-002具有较好的耐酸、耐胆盐及耐胃肠液能力,进入人体后能够以较高存活率到达肠道发挥作用,并具有一定的缓解乳糖不耐受和降甘油三酯功能。     

具有降胆固醇功能的罗伊氏乳杆菌的筛选及其益生作用

为获得具有较强降胆固醇功能的益生菌株,试验从内蒙古呼伦贝尔满洲里通达牧场制作的奶豆腐中筛选分离菌株,并采用邻苯二甲醛法测定菌株降胆固醇的能力,从中选出降胆固醇能力强的菌株,通过形态学鉴定、生理生化及16S rDNA对菌株进行鉴定,并测定了其耐受酸、胆盐和胃肠液的能力。结果筛选分离出5株具有降胆固醇功能的菌株,其中一株菌对胆固醇降解能力最强,降解率达50.60%,经鉴定此株菌为罗伊氏乳杆菌（Lactobacillus reuteri）,将其命名为HCS02-001（CGMCC No. 19746）;经对酸、胆盐及胃肠液的耐受试验,该株菌在pH 3.0和pH 2.0的环境中培养17 h后存活率分别为86.80%和85.52%;在0.30%、0.50%的胆盐浓度环境中培养17 h后存活率分别为97.42%和95.17%;在人工胃液中作用3 h,存活率为96.74%;在人工肠液中作用4 h,存活率高达98.41%。该研究筛选出了一株具有较好降胆固醇功能的罗伊氏乳杆菌（Lactobacillus reuteri）,其具有较强的耐受酸、胆盐环境和胃肠液的能力,对关于降胆固醇功能方面的产品研究开发具有重要意义。     

屎肠球菌R40产胆盐水解酶发酵动力学及底物特异性分析

该研究以产胆盐水解酶的屎肠球菌（Enterococcus faecium）R40为研究对象,模拟人体胆盐条件,对其发酵动力学进行分析。采用Logistic、Luedeking-Piret、Luedeking方程描述屎肠球菌R40发酵过程中菌体生长、产物生成、底物消耗的内在关系,并比较不同胆盐条件对屎肠球菌R40生长和降胆固醇能力的影响,判断其产生的胆盐水解酶是否存在底物特异性。结果表明,拟合模型的相关系数R2均＞0.9,效果良好,模型预测值与试验测量值的误差均＜10%,说明可以通过建立发酵动力学模型对屎肠球菌R40产酶情况进行预测和描述。胆盐的添加有利于屎肠球菌R40发挥降胆固醇作用,使菌株R40提前4 h进入对数生长期,且提高了菌株R40的生物量。不同胆盐对菌株R40生长的影响存在差异性,甘氨酸脱氧胆盐虽能提高生物量,但未缩短适应期。牛磺酸胆盐和甘氨酸胆盐缩短了菌株R40的适应期,但对生物量并无显著影响,说明菌株R40产的胆盐水解酶具有一定的底物特异性。     

一株产γ-氨基丁酸屎肠球菌的筛选和发酵条件优化及其益生特性分析

为拓宽产γ-氨基丁酸(γ-aminobutyric acid,GABA)微生物资源,以四川泡菜为分离源从中筛选高产GABA乳酸菌菌株,并对高产乳酸菌菌株进行生理生化、分子生物学鉴定,高产GABA发酵条件优化及其益生特性分析。结果表明:采用高效液相色谱对菌株产GABA能力分析发现菌株AB157的GABA产量最高为1.08 g/L。生理生化和16S rRNA鉴定菌株AB157为屎肠球菌(Enterococcus faecium)。通过单因素实验和响应面优化,确定屎肠球菌AB157的最佳培养条件为L-谷氨酸钠底物浓度5.2 g/L、发酵温度31 ℃、初始pH7、发酵时间70 h,在此条件下,屎肠球菌AB157的GABA产量达到1.60 g/L。屎肠球菌AB157的益生分析表明,其在pH2.0和3 g/L的胆盐环境中的存活率分别为39%和59%,胆固醇的脱除量为18.09 μg/mL,说明该菌株具有良好的耐酸和耐胆盐特性以及较强的降胆固醇能力,可作为潜在功能性乳酸菌资源进行后续研究开发。     

副干酪乳杆菌PC-01益生特性和安全性研究

目的：副干酪乳杆菌是一种具有益生作用和广泛应用前景的乳酸菌,其健康作用得到研究者的关注。本研究以分离自西藏拉萨地区当雄县龙仁乡酸牦牛奶的一株副干酪乳杆菌PC-01为研究对象,评估其益生特性和安全性。方法：通过人工胃肠液耐受能力和胆盐耐受能力评价其益生潜力,同时评估其安全性。结果：副干酪乳杆菌PC-01在模拟人工胃肠液中培养11 h的存活率为88.60%;胆盐耐受结果表明其延迟时间为0.34 h,具有在肠道内存活继而发挥抗氧化应激作用的潜力;安全性评价显示该菌株对6种抗生素敏感,对万古霉素、克林霉素耐药;溶血试验阴性;动物实验证实副干酪乳杆菌PC-01无毒副作用。结论：副干酪乳杆菌PC-01具有益生特性及安全性,为其广泛应用提供参考依据。     

罗非鱼源肠道益生菌的分离鉴定及其体外益生特性分析

为了筛选出优良的鱼源益生菌,作者以吉富罗非鱼(Oreochromis niloticus)为实验材料,进行肠道芽孢杆菌和乳酸菌的分离、鉴定,并对分离得到的菌株进行抑菌活性、耐酸性、耐胆盐、人工胃肠液耐受、溶血活性和抗生素敏感性等体外益生特性分析。结果表明,从罗非鱼肠道中共分离得到109株菌,其中包括79株乳酸菌和30株芽孢杆菌,经过一系列的实验最终筛选出3株乳酸乳球菌（Lactococcus lactis）。生物学特性研究表明,3株菌均无溶血活性,对抗生素具有一定的敏感性,对强酸、胆盐和人工胃肠液具有一定的耐受性,对水产病原菌具有不同的抑菌活性。筛选得到的3株菌丰富了鱼源益生菌资源,它们均可作为优良的鱼源益生菌候选菌株。其中,菌株R1对强酸和人工胃肠液耐受性最强,菌株R29耐胆盐能力最强,可进行进一步的益生特性研究,挖掘其作为食品源益生菌的益生效果。     

降胆固醇优良菌株的筛选及其胆盐水解酶特性研究

对已证实具有降胆固醇能力并能产生胆盐水解酶(BSH)的3株乳酸菌进一步筛选,综合模拟人工胃肠液的耐受性、疏水性能力和去结合胆盐能力三个指标,筛选出一株具有优良的降胆固醇综合性能的潜力菌株,并对其产生的BSH的部分特性进行研究。结果表明,屎肠球菌90-1作为降胆固醇潜力菌株其综合性能较好,其所产的BSH最适反应pH为6.0,最适反应温度为37℃,最适底物浓度为7mmol/L,最适三磷酸腺苷二钠(ATP)浓度为2.5mg/mL。     

罗伊氏粘液乳杆菌K07的生物学特性及其基因分析

从新疆昭苏县传统发酵乳酪中分离出2株罗伊氏粘液乳杆菌（编号K07、K08）,对2株菌的生长和产酸性能、耐酸耐胆盐、模拟胃肠道的耐受、产罗伊氏菌素能力和抗氧化活性进行了评估;此外还测定了2株菌的抑菌性能并对K07菌株进行基因分析。结果表明,2株菌均在培养12 h后进入对数生长末期,发酵终点pH值为4.45。K07对酸、胆盐和模拟胃肠道的耐受及抗氧化能力强于K08。pH值2.50处理4 h,K07存活率为73.27%。0.15%胆盐胁迫下K07菌株OD600 nm 上升0.3个单位需5.50 h,模拟胃肠道试验K07的存活率为74.13%。两株菌的无细胞提取物抗氧化活性高于完整细胞,其中K07无细胞提取物对DPPH自由基和羟自由基的清除率为42.39%、15.69%,还原力17.96%。K07产罗伊氏菌素量为183.05 mmol/L显著高于K08,且K07抑菌性能较好,对白色念珠菌和无乳链球菌的抑菌圈直径为22.20 mm、18.26 mm。K07基因组全长1 950 440 bp,预测蛋白质编码基因2 067种,GC含量为38.69%。研究结果显示罗伊氏粘液乳杆菌K07具有良好的益生特性,为后续产业化应用提供理论依据。     

产纤溶酶乳酸菌筛选及安全性评估

以从传统发酵食品中分离出的2株产纤溶酶的粪肠球菌HYD09与HYN06为对象,测定其发酵上清液酶活,对菌株进行安全性评估。选较安全的菌株进行胃肠道生存能力测试;同时对发酵上清液进行蛋白酶处理试验;从发酵液中获得粗酶液,进行活性电泳。结果表明:HYD09和HYN06发酵上清液酶活分别为115.3 U/mL和107.2 U/mL;HYD09和HYN06吲哚试验、硝酸盐还原酶试验、氨基脱羧酶试验、溶血试验均为阴性,对14种抗生素无多重耐药性;HYD09无毒力基因检出,HYN06检出esp毒力基因。证明HYD09菌株是安全的。进一步研究发现,菌株HYD09有一定的耐酸耐胆盐能力;HYD09发酵上清液经胃蛋白酶和胰蛋白酶处理仍具有纤溶活性;且菌株HYD09发酵上清液的粗酶中有2种主要的组分,但具有纤溶活性的组分只有1种。     

植物源益生乳酸菌的筛选及其特性

为筛选具有益生特性的植物源乳酸菌,以传统发酵蔬菜中分离的1 000 株乳酸菌为出发菌株,进行了耐酸性、耐胆盐能力、抑菌性、体外抗氧化能力、药敏性、溶血性和氨基酸脱羧酶活性等特性研究,并对筛选菌株进行了16S rDNA 鉴定。经pH 3.0 MRS培养得乳酸菌82 株,再经pH 2.5 MRS培养得乳酸菌49 株;49 株菌经0.3%胆盐测试,均具有耐胆盐能力;根据镜检形态结合发酵植物源的不同从中挑选19 株乳酸菌进行药敏性、溶血性、抑菌性、氨基酸脱羧酶活性和1,1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基清除实验。结果表明,19 株菌对所选20 种抗生素多数表现敏感,其中4 株菌对20 种抗生素都较敏感;19 株菌对供试致病菌都有不同程度抑制能力且都无溶血性;经氨基酸脱羧酶活性试剂盒结合聚合酶链式反应扩增检测表明,19 株菌无产生物胺的潜在威胁;有5 株菌体外抗氧化能力高于40%。可见19 株菌均具有益生菌的基本特性。经16S rDNA鉴定,7 株为发酵乳杆菌、6 株为植物乳杆菌,嫩江杆菌、戊糖片球菌、利莫西杆菌、戊糖乳杆菌、屎肠球菌、短乳杆菌分别各1 株。     

降胆固醇乳酸菌的筛选及对大鼠血脂的影响

对分离自发酵品及肠道排泄物的乳酸菌进行降胆固醇体外筛选及体内评价。结果显示：所分离得到的菌株中,对MRS-CHOL培养基胆固醇降解率最高的是R-2菌株(26.97±0.51)%和I-2菌株(23.72±0.41)%;R-2和I-2菌株对酸(pH3.0)有一定耐受性,在0.3g/100mL胆盐质量浓度条件下培养6h后,I-2的活菌数为1.1×104CFU/mL,R-2的活菌数为2.2×106CFU/mL。与对照组相比,采用I-2菌株和R-2菌株饲喂高脂大鼠,均可明显抑制大鼠总胆固醇(TC) (P＜0.01) 和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)(P＜0.05)升高;经鉴定,I-2菌株和R-2菌株分别为海氏肠球菌(Enterococcus hirae)和屎肠球菌(Enterococcus faecium)。     

Enterococcus faecium and Enterococcus durans isolated from cheese: Survival in the presence of medications under simulated gastrointestinal conditions and adhesion properties

In this study, we evaluated the survival of Enterococcus faecium and Enterococcus durans, isolated from cheese, in the presence of medications and under simulated in vitro gastrointestinal conditions. The presence of genes encoding virulence factors, the susceptibility to antimicrobial agents, and adhesion properties were also assessed. Enterococcus faecium and E. durans both exhibited resistance to most of the tested medications but showed a large sensitivity to analgesics and antihypertensives; they also showed wide susceptibility to antimicrobial agents. Enterococcus durans SJRP29 had greater resistance to the presence of medications in comparison with the probiotic Lactobacillus acidophilus La-5. The strains, except for E. durans SJRP05, did not harbor virulence genes. Enterococcus durans SJRP14, SJRP17, and SJRP26 were sensitive to all tested antimicrobial agents. Enterococcus faecium was more stable during the simulation of gastrointestinal tract and showed greater viability. At the end of the assay, except for E. durans SJRP17, all strains showed high viability (>7 log cfu/mL). Enterococcus durans SJRP29 stood out from the other strains and was selected for further evaluation; it tolerated up to 3.0% NaCl at 30 and 37°C, besides having good adhesion properties (high values of auto-aggregation, co-aggregation, and hydrophobicity). Additionally, the microorganism did not show bile salt hydrolase activity or mucin degradation. These results encourage carrying out additional tests to evaluate the probiotic features by using in vitro dynamic models and in vivo tests before applying these strains to a food system.     

Bile salt hydrolase activity of Enterococci isolated from food: screening and quantitative determination

One hundred seventeen enterococcal strains isolated from food (47 Enterococcus faecium, 48 Enterococcus faecalis, 16 Enterococcus durans, 2 Enterococcus gallinarum, 3 Enterococcus casseliflavus, and 1 Enterococcus malodoratus) were screened for bile salt hydrolase (BSH) activity on de Man, Rogosa, and Sharpe agar medium containing taurocholic acid and calcium chloride. The highest incidence of BSH-active strains was observed for E. faecalis (81%) followed by E. faecium (50%) and E. durans (44%). Isolates were grouped into four putative activity groups (no, low, medium, and high activity) based on the size of precipitation zones observed in the screening experiment. Our results showed that assumptions on BSH activity based on the size of bile precipitation zones in screening experiments did not correlate with actual activity as quantified by high-pressure liquid chromatography, but the screening assay is useful for assessing the presence or absence of BSH activity.     

Homemade traditional cheeses for the isolation of probiotic Enterococcus faecium strains

One hundred twenty-two strains of Enterococcus faecium isolated from Tafí Cheese, a homemade traditional cheese of the highlands in the province of Tucumán, Argentina, were evaluated for their potential application as starter cultures in the manufacture of this traditional cheese. Eleven of the 122 strains showing limited delays in growth in oxgall were selected for the study of bile salts hydrolase activity (BSH), cholesterol reduction, antimicrobial activity, and virulence determinants. Nine strains were able to remove cholesterol in in vitro assays, a property that was closely related to the bile salt hydrolase activity. Only two strains produced active bacteriocins against Listeria strains although genetic evidence for the bacteriocin structural gene was found in six other enterococci strains. No virulence factors were detected in any of the 11 selected strains of enterococci.