枸杞多糖的分离纯化及结构研究

枸杞子经提取,醇沉,得到枸杞水溶性多糖粗品(LBP)。最佳乙醇沉淀添加量为50 m L浓缩液中添加80 m L体积分数95%乙醇;最佳乙醇醇沉时间为12 h;Sevag法除蛋白次数为6次,脱除率为83.45%。枸杞粗多糖经DEAE-52纤维素(OH-)色谱柱、Sephedex G-50柱层析纯化后,得到LBP1和LBP2。采用紫外光谱扫描和Sephedex G-100柱层析鉴定LBP1和LBP2均为分子质量相对均一的组分。高效液相色谱检测LBP1和LBP2的相对分子质量分别为367和358。苯酚-硫酸法测得:LBP1和LBP2的中性糖含量分别为82.20%和74.50%;咔唑-硫酸法测得LBP1和LBP2的半乳糖醛酸含量为7.50%和14.30%。气相色谱测得LBP1的单糖组成摩尔比为半乳糖∶甘露糖∶葡萄糖=1.79∶1.00∶3.08;LBP2的单糖组成的摩尔比为半乳糖∶甘露糖∶葡萄糖=1.32∶1.00∶7.38。红外光谱测定结果显示,LBP1和LBP2均由吡喃糖构成。β消去反应检测得LBP1和LBP2与氨基酸是通过O-糖苷键相连。刚果红实验证明LBP1和LBP2均不存在三股螺旋结构。粒度实验表明,溶液酸碱度会影响枸杞多糖的粒度分布。     

枸杞果实水溶性多糖的水提优化工艺及抗氧化性研究

用冷浸法提取枸杞果实中的多糖,石油醚∶丙酮(1∶1,v/v)、回流脱脂、脱色,Savage法除去蛋白,正交实验确定最佳条件,采用DEAE柱分离再用蒸馏水在SephadexG-200柱纯化得到多糖纯品。抗氧化实验验证了多糖具有抗氧化活性,且抗氧化活性随着浓度的增加而增大。     

大叶麻竹笋多糖分离纯化工艺

以水提醇沉法提取到的大叶麻竹笋粗多糖为原料,对其进行脱蛋白、透析脱色、DEAE-52纤维素柱层析分级、Sephadex-50葡聚糖凝胶柱分级处理,探究大叶麻竹笋多糖的分离纯化工艺。研究结果表明,木瓜蛋白酶结合Sevag法是最佳脱蛋白条件;进行DEAE-52纤维素柱分级,以纯水、0.05 mol/L和0.1 mol/L NaCl溶液洗脱获得了3 种主要的大叶麻竹笋多糖组分BSP1、BSP2、BSP3;再进行Sephadex-50葡聚糖凝胶分级,分别纯化得到了BSP1A、BSP2A、BSP3B 3 种多糖组分,这3 种多糖组分基本不含蛋白质和核酸,且纯度均达到了95.3%以上。     

茶多糖的分离纯化及其抗凝血活性

为了研究茶多糖不同组分对抗凝血活性的影响,通过水提醇沉的方法对茶多糖进行提取,经聚酰胺柱脱色、脱蛋白,采用离子交换柱DEAE Sepharose CL-6B对多糖进行分离纯化,用高效凝胶渗透色谱测定其分子量,并对多糖组分抗凝血活性进行了研究。结果表明:聚酰胺法脱色、脱蛋白效果较好,脱色率、蛋白去除率和多糖保留率分别为75.1%、91.2%和79.2%;经纯化后得到4个组分,分别为TPS-1、TPS-2、TPS-3和TPS-4;HPGPC法测定TPS-1、TPS-2和TPS-3分子量分别为20760、24230和250643,为均一多糖,TPS-4含两个组分,其分子量分别为689 113和4 150,为非均一多糖。体外抗凝血实验显示TPS-4能延长活化部分凝血活酶时间(APTT)和凝血酶时间(TT),说明是通过内源性途径来影响凝血的。     

新型中国被毛孢胞内多糖HSIPS2链构象及抗氧化活性研究

以发酵得到的中国被毛孢菌丝体为原料进行热水浸提,经过醇沉、脱蛋白、脱色素以及DEAE-Sepharose Fast Flow离子交换柱色谱和Sephacryl S-100凝胶柱色谱得到均一性多糖组分(HSIPS2),并对该组分进行链构象及抗氧化活性分析。结果表明:HSIPS2的单糖组成及摩尔比例为葡萄糖∶半乳糖∶甘露糖∶核糖=48.52∶6.58∶5.17∶1.0,其绝对分子量为1.46×10~4 g/mol,纯度为99.82%;该多糖在0.1 mol/L的Na NO3溶液中呈柔顺链构象,流体力学半径R_h=2.3 nm,M_L=334.05 nm~(-1),q=0.70 nm,d=0.69 nm;同时,HSIPS2清除羟自由基的IC_(50)为0.749 mg/m L,氧自由基吸收能力(ORAC值)为872.80μmol TE/g,说明HSIPS2具有较高的抗氧化能力。     

桑葚多糖提取、纯化分离及其降糖作用的研究

目的:探讨桑葚多糖纯化工艺及降糖作用。方法:AB-8树脂纯化,乙醇醇沉,5%的三氯醋酸的正丁醇+氯仿正丁醇(5∶1)去蛋白,所得多糖经DEAE-纤维素柱分离,所得多糖进行降糖效果测定。结果:实验表明,树脂纯化、乙醇醇沉,5%的三氯醋酸的正丁醇+氯仿正丁醇(5∶1)去蛋白纯化效果较好,DEAE-纤维素柱分离中性多糖P-1,酸性多糖P-2、P-3,且降糖效果明显。结论:该纯化工艺和药理实验为桑葚的综合利用提供了新途径。     

分心木酸性多糖SJP-2的理化性质及其抗氧化活性研究

以分心木为原料进行热水浸提,经过醇沉、脱色素、脱蛋白以及DEAE-Sepharose Fast Flow离子交换柱色谱和Sephadex-G50凝胶柱色谱分离纯化得到一种酸性多糖组分(SJP-2),再对该组分进行理化性质及抗氧化活性分析。结果表明:SJP-2不含蛋白,是一个低分散度,分子量较为均一的多糖,分子量为3.239×10~3g/mol;HPLC分析得知SJP-2为一种酸性多糖,其单糖组成及摩尔比例为阿拉伯糖∶半乳糖∶葡萄糖∶半乳糖醛酸=1∶2.62∶4.45∶18.53;抗氧化活性测得SJP-2清除DPPH自由基、羟自由基以及ABTS自由基的IC_(50)分别为0.094、0.945、0.591 mg/m L,还原能力在1.0 mg/m L时达到1.158,ORAC值为(1217.99±31.22)μmol TE/g,说明SJP-2具有较高的体外抗氧化能力。     

地皮菜多糖的分离纯化及结构组成分析

以地皮菜为原料,采用水提醇沉法获得地皮菜多糖(Nostoc Commune polysaccharides,NCP),经Sevage法脱蛋白、DEAE-Sepharose CL-6B柱色谱法分离纯化、透析、冻干等制备地皮菜精制多糖。利用紫外和红外光谱对其进行纯度及结构分析,采用1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮柱前衍生HPLC法测定其单糖组成及含量。结果表明:地皮菜多糖经DEAE-Sepharose CL-6B柱色谱分离可得到5种多糖组分,其主要组分NCP-3具有典型的多糖吸收峰。HPLC分析表明NCP-3主要由甘露糖、葡萄糖醛酸、葡萄糖、阿拉伯糖构成,其摩尔比为2.17∶7.14∶2.56∶1。     

枸杞多糖的超滤分级及理化性质的研究

探究了超滤法分离对枸杞多糖理化性质的影响。采用截留分子量不同的超滤膜分离枸杞多糖,检测各个组分的分子量范围、多糖组成、多糖形貌和热力学性质,探究超滤分级对枸杞多糖理化性质的影响。超滤方法可以实现枸杞多糖的分级分离,得到分子量大小分别为2.03×106(LBP-8),3.62×106(LBP3-1),3.10×104(LBP1-4)的多糖组分,主要有岩藻糖、鼠李糖、阿拉伯糖、木糖、葡萄糖、甘露糖和半乳糖组成,都不含有核糖,LBP1-4不含有鼠李糖,LBP-8不含鼠李糖和葡萄糖。其总糖含量、半乳糖醛酸含量、中性糖含量、蛋白质含量,多糖形貌和热力学性质均显示差异性。     

黑螵蛸多糖的制备及活性测定

目的对黑螵蛸多糖进行分离纯化,并初步测定其活性。方法采用水提-醇沉法制备黑螵蛸粗多糖,经DEAE Sephadex A-25离子交换柱色谱和Sephadex G-75凝胶柱色谱纯化得到均一的黑螵蛸多糖组分HPP-1。采用凝胶渗透色谱,紫外光谱等技术对HPP-1进行分析,另外探究多糖的抗氧化活性、抗菌活性和胆碱酯酶抑制活性。结果黑螵蛸多糖HPP-1的相对分子质量(Mr)为13 048,不含蛋白质、核酸和色素,DPPH自由基和羟基自由基清除IC_(50)值分别为10.35±0.12,100.33±0.06μg/ml;多糖对枯草芽孢杆菌有抑制活性,最小抑菌浓度为18.8μg/ml;抑制乙酰胆碱酯酶和丁酰胆碱酯酶的IC_(50)值分别为6.52±0.03,18.26±0.26μg/ml。结论黑螵蛸多糖具有较好的抗氧化活性、抗菌活性和胆碱酯酶抑制活性,可作为潜在的抗氧化剂、抑菌剂和胆碱酯酶抑制剂进行深入研究和开发。     

苍山大蒜低聚糖纯化技术及分子质量测定

文中研究了苍山大蒜中低聚糖(GOS,garlic oligosaccharide)的分离纯化技术,并测定其分子质量。分别研究了聚酰胺柱色谱法对蛋白质的脱除效果;离子交换色谱法,有机溶剂沉淀法和葡聚糖凝胶色谱法对GOS的纯化效果。结果表明:聚酰胺色谱柱对大蒜粗糖中蛋白质有良好的脱除效果,糖回收率为98.9%,蛋白质脱除率为66.8%;DEAE-纤维素(OH~-)色谱柱可将大蒜低聚糖分为3个组分;乙醇分级沉淀可将大蒜低聚糖分为8个组分;Sephadex G-25纯化后的GOS的HPLC测定结果表明,其纯度为99.1%,Mw/Mn=1.31,数均分子质量为1770u。     

菱叶红景天多糖的提取、纯化鉴定及理化特性研究

以有效的热溶水提法，从菱叶红景天植物中得到粗多糖RHP。RHP经乙醇分级得三个级分RHP-I，RHP-II，RHP-III，取RHPIII脱蛋白，脱色，DEAD-纤维素柱层析，Saphadex G-200柱层析分离纯化，色谱鉴定及初步理化特性分析，得一纯度较高的均一多糖RHPS。PC分析其单糖组成有L-阿拉伯糖、L-鼠李糖、D-葡萄糖和另一个待确定的组分组成。     

薤白多糖的分离纯化及组成分析

采用DEAE-纤维素离子交换柱层析和SephadexG-150凝胶柱层析,对薤白粗多糖(PAM)进行了分离纯化;利用醋酸纤维素薄膜电泳和凝胶过滤法鉴定精制薤白多糖纯度;硅胶薄层层析分析精制多糖的单糖组成。结果表明:DEAE-纤维素柱分别用水、0.1mol.L-1NaCl、0.5mol.L-1Na0H洗脱分得三种级分,即水洗级分(PAM-I)、盐洗级分(PAM-II)和碱洗级分(PAM-III);这三种级分再经过SephadexG-150柱进一步分离纯化,得三个主要级分PAM-Ib、PAM-IIa及PAM-III’;经醋酸纤维素薄膜电泳和凝胶过滤法鉴定,它们为均一的多糖;硅胶薄层层析分析显示,PAM-Ib主要由半乳糖和葡萄糖组成,PAM-IIa主要由半乳糖、葡萄糖、果糖、木糖和鼠李糖组成,PAM-III’主要由半乳糖、葡萄糖和木糖组成。     

三角帆蚌多糖制备及基本理化性质

为充分利用三角帆蚌资源、开发利用其中的多糖类物质,运用热水浸提、乙醇沉淀、Sevag法脱蛋白质、乙醇再沉淀的方法提取获得了三角帆蚌多糖(HCPS),提取率为3.5%左右。运用DEAE-纤维素-52色谱和葡聚糖G-100色谱对三角帆蚌粗多糖进行分离纯化,得到3个纯化组分(HCPS-1、HCPS-2和HCPS-3),3个组分HCPS-1、HCPS-2和HCPS-3的得率分别是26.9%、30.2%和3.9%。运用化学的、物理的方法测量分析了三角帆蚌粗多糖及其纯化组分的部分理化性质,包括总糖质量分数、蛋白质质量分数、硫酸基质量分数、相对粘度、单糖组成、相对分子质量以及红外光谱(FTIR)。HCPS-3具有较高的蛋白质质量分数、较高的硫酸基质量分数和复杂的单糖组成,这些与HCPS-1、HCPS-2明显不同。     

香菇子实体多糖分离纯化的研究

将香菇子实体干粉经热水浸提、乙醇沉淀,得到香菇多糖粗品。香菇多糖粗品经Sevage法去除游离蛋白,H2O2脱色,用DEAE-纤维素柱层析,经蒸馏水、0.05mol/LNaCl、0.1mol/LNaCl、0.2mol/LNaCl、0.3mol/LNaCl和0.4mol/LNaCl洗脱,得到6个香菇多糖级分A～F;然后用SephadexG-200柱进一步纯化香菇多糖B级分,得香菇多糖亚级分B-1和B-2;再研究其中的B-1。采用SephdexG-200柱层析和聚丙烯酰胺凝胶电泳法,证实该多糖组分为均一多糖。     

海洋枝顶孢霉BH0531发酵液杀线虫组分的分离及活性测定

实验采用生物活性跟踪法,通过超滤、Sephadex凝胶层析、离子交换树脂、硅胶板薄层层析,以及特异性鉴别染色等方法对海洋枝顶孢霉BH0531发酵液的杀线虫活性组分进行分级分离和初步的性质分析。结果表明,Sephadex凝胶柱层析（G-25,G-10）可有效分离获得杀线虫活性组分,3 d的线虫校正死亡率达98.33%;以正丁醇:水:无水乙醇=1∶1∶1(V/V)为展开剂的薄层层析,可将活性组分有效分离,Rf = 0.31,斑点洗脱物的线虫校正死亡率达到94.00%;定性染色结果显示,茚三酮反应阳性,证实有α-氨基存在,茚三酮吡啶呈红色,显现出寡肽性质;双甲酮染色呈亮黄色,表明具有酮糖性质。结果表明,BH0531杀线虫活性代谢物应为含有酮糖基团的短肽类化合物。     

双孢菇菇柄多糖柱层析纯化及单糖组成

以双孢菇菇柄为试材,首先对经超声提取得到的菇柄多糖进行柱层析分离纯化,然后对柱层析得到的多糖组分别采用紫外光谱和柱层析进行纯度分析,并进行红外光谱分析和单糖组成分析。结果表明,脱蛋白双孢菇菇柄多糖经DEAE Sephadex A-25柱层析纯化共得到4个组分,收集其中两个较多的组分(蒸馏水和0.1 mol/L NaCl洗脱组分),经紫外光谱扫描无核酸和蛋白质,经Sephadex G-200柱层析鉴定均为单一峰。所得两种多糖组分经FT-IR红外光谱分析,均含有多糖特征吸收峰,且均为吡喃糖环β-异构体的多糖。菇柄蒸馏水洗脱多糖组分由葡萄糖、半乳糖、甘露糖、木糖、阿拉伯糖组成,0.1 mol/L NaCl洗脱组分是由葡萄糖、半乳糖、甘露糖、木糖、阿拉伯糖、鼠李糖、氨基葡萄糖、氨基半乳糖组成。     

新疆昆仑雪菊多糖的分离纯化及其结构的初步鉴定

以新疆昆仑雪菊为原料,采用超声波辅助法提取雪菊多糖（KSCP）,经脱蛋白、脱色、透析、DEAE-52层析柱和SephadexG-100凝胶层析柱纯化后,获得两个多糖组分（KSCP1和KSCP2）;将分离纯化后的多糖组分经紫外光谱分析法、冻融分析法、SephadexG-100凝胶柱层析法对其纯度进行鉴定;采用凝胶渗透色谱法和气质联用法（GC-MS）对KSCP分子质量范围和单糖组成进行分析。结果表明,KSCP1和KSCP2均为单一组分;KSCP1是由葡萄糖、阿拉伯糖、半乳糖、木糖4种单糖组成,其摩尔比为10.53∶5.02∶4.96∶1,分子质量范围为8 200～8 700 u;KSCP2主要由葡萄糖、阿拉伯糖、半乳糖3种单糖组成,其摩尔比为1∶2.78∶5.07,分子质量范围为6 100～6 500 u。     

热稳定酸性β - 葡萄糖苷酶的分离纯化及其酶学性质

耐酸性黑曲霉菌株Aspergillus niger L.的菌丝体破碎液依次经过乙醇沉淀、离子交换层析和凝胶过滤等步骤处理,获得电泳纯的β-葡萄糖苷酶,SDS-PAGE显示其分子质量为125.7kD。β-葡萄糖苷酶水解对硝基苯-β-D-吡喃葡萄糖苷的最适pH值为3.0～4.0,最适温度为70℃,表观米氏常数(Km)值为2.35mmol/L,表观kcat/Km值为2.99×104L/(mol ·s);水解京尼平苷、水杨苷的表观kcat/Km值分别是1.26×104、1.37×104L/(mol ·s);水解活性受Mn2+的显著激活和Fe2+、Zn2+、Cu2+等离子的微弱抑制。该酶活性在pH2.0～8.3保持稳定;酶在65℃时保温60min,残余酶活达到了85%,是一种热稳定酸性β-葡萄糖苷酶。     

猴头菌菌丝多糖的分离纯化及其性质研究

对液体发酵生产的猴头菌丝,利用"水提醇沉"的方法进行多糖的初步提取;粗多糖除去蛋白质杂质之后,进行DEAE-纤维素和Sephadex G-100凝胶分步柱层析纯化,获得的多糖组分经过纯度检验之后,进行多糖性质的研究。结果显示:猴头菌丝多糖主要含有D-木糖和D-果糖,并且,多糖分子容易发生酯化反应而表现出抗病毒作用。