鲣鱼肝脏乙酰胆碱酯酶的双水相萃取

乙酰胆碱酯酶(AchE)是生物神经传导中的一种关键性酶,其活性受到有机磷和氨基甲酸酯类农药的特异性抑制,已成为监控农药残留的靶标物质。选取三亚常见海鱼——鲣鱼,利用双水相萃取技术,对其肝脏中的乙酰胆碱酯酶进行萃取并对萃取工艺进行优化,结果表明:以PEG400/K_2HPO_4为双水相,室温下PEG400的质量分数为28%,K_2HPO_4质量分数为25%,pH 10.0时,分配系数为4.263 1。     

响应面法优化黑豆酯酶的双水相萃取工艺

采用双水相萃取技术对黑豆酯酶进行分离纯化,优化黑豆酯酶在聚乙二醇4000/硫酸铵双水相体系中的分配行为。首先,制作PEG4000/(NH4)2SO4双水相相图;然后考察PEG4000质量分数、(NH4)2SO4质量分数、萃取体系p H值3个因素对黑豆酯酶萃取率的影响;最后采用Box-Behnken中心组合试验设计对黑豆酯酶双水相萃取工艺进行优化,确定最佳工艺条件为:PEG4000质量分数为28%、萃取体系p H为7.30、(NH4)2SO4质量分数为17%。此条件下黑豆酯酶萃取率为(93.95±0.24)%,黑豆酯酶酶比活力达到7.893 U/mg。与粗酶液纯度相比,黑豆酯酶双水相萃取工艺提纯倍数为7.363倍。该结果为黑豆酯酶的提纯和进行有机磷农药残留的检测提供科学依据。     

芦丁在异丙醇/无机盐双水相体系中分配行为的研究

采用异丙醇与无机盐构建双水相体系,以芦丁在两相间的相比R、分配系数K、萃取率E为指标,考察了无机盐种类、无机盐质量分数、异丙醇质量分数以及芦丁浓度对其分配行为的影响。实验结果表明:不同种类无机盐所构建双水相体系萃取率高低顺序为:K_2HPO_4Na_2SO_4(NH_4)_2SO_4Na_2CO_3K_2CO_3;以K_2HPO_4和异丙醇构建的双水相体系中,萃取率随盐浓度以及异丙醇浓度的增加呈先升高后降低的趋势,萃取率随芦丁浓度的增加而升高,但高浓度对萃取率的提高贡献有限。以质量分数28%的异丙醇和质量分数28%的K_2HPO_4构建的双水体系配系数为13,萃取率达93.4%。     

双水相体系萃取蓝莓多糖的分配平衡研究

采用超声水提法提取蓝莓多糖,再用双水相法进行纯化。以药液百分数、K_2HPO_4浓度、PEG6000浓度为单因素,以下相多糖的萃取率为指标,应用响应面法优化蓝莓多糖的双水相萃取工艺。结果表明,当药液百分数60%,PEG6000 16%,K_2HPO_4 16.9%,下相蓝莓多糖得率最高,可达95.03%;且多糖纯度明显高于传统的水提醇沉法。所得到模型高度显著(R~2=0.9920),拟合性好,可用于蓝莓多糖的萃取。     

双水相体系萃取分离发酵液中的裂褶菌多糖

以裂褶菌发酵液为原料,采用双水相体系对裂褶菌多糖(SPG)的提取工艺进行优化。通过比较乙醇/Na_2CO_3、乙醇/K_2HPO_4、乙醇/(NH_4)_2SO_4、PEG/(NH_4)_2SO_4 4种组成的双水相体系对SPG的萃取率和分配系数的影响,确定最佳双水相体系;考察有机相和无机相的质量分数及料液比对SPG萃取率及蛋白质清除率的影响,进一步优化了萃取条件;最后采用红外光谱验证了多糖的结构。结果表明:最佳双水相萃取体系为25%乙醇/20%Na_2CO_3,最适料液比(v/w)为1:15时,SPG的萃取率达94.14%±1.59%,蛋白质清除率为93.35%±5.73%;红外光谱可以推断分离的多糖为裂褶菌多糖,含有呋喃环,糖苷键可能为α型。     

PEG/盐双水相体系萃取小麦酯酶的研究

采用PEG/NaH2PO4双水相体系分离提取小麦中的植物酯酶,对构成双水相体系中的PEG分子量、浓度、pH、无机盐类型及浓度对萃取效果的影响进行了分析.确定了双水相组成体系为:23%PEG1000(质量比)和16%NaH2PO4(质量比),pH=4,在此体系中小麦的植物酯酶主要分布在上相,分配系数K=4.33,纯化倍数达到2.85,回收率95%.     

聚乙二醇/硫酸铵双水相体系萃取葡萄糖氧化酶的研究

采用聚乙二醇/硫酸铵[PEG/(NH4)2SO4]双水相体系对葡萄糖氧化酶的萃取进行了研究。以双水相系统的上、下相的酶活、比酶活、相比R、分配系数K和萃取率Y等为参数,探讨了PEG质量分数、不同PEG浓度和不同硫酸铵浓度对葡萄糖氧化酶在PEG/(NH4)2SO4双水相系统中分配行为的影响。实验结果表明:葡萄糖氧化酶在25%的PEG4000和10%硫酸铵的双水相体系中可获得较高的萃取率达81.11%,分配系数为0.134。     

双水相法萃取分离猪胰α-淀粉酶体系的初步研究

采用聚乙二醇(PEG1500)/硫酸铵[(NH4)2SO4]双水相体系对猪胰α-淀粉酶分离条件进行了研究。探讨PEG质量分数、p H值和(NH4)2SO4质量分数对猪胰α-淀粉酶在PEG1500/(NH4)2SO4双水相中的分配系数Ka及萃取率Y的影响,并通过正交试验优化双水相萃取条件。结果表明,在p H值为7.0,PEG1500质量分数为18%,(NH4)2SO4质量分数为12%的双水相体系中,α-淀粉酶的分配系数Ka为8.48,萃取率Y为80.25%,α-淀粉酶活为1 690 U/m L。     

壳聚糖絮凝—盐诱导双水相萃取分离红葡萄籽中原花青素

以原花青素回收率为主要考察指标,通过正交试验确定壳聚糖絮凝纯化的最佳条件;通过研究盐诱导(盐的种类和浓度)双水相体系对红葡萄籽中原花青素萃取效果,建立盐诱导双水相萃取最佳条件。结果表明:在20mL原花青素提取液中,壳聚糖的加入量2 mL、絮凝温度35℃、提取液pH 4时,葡萄籽原花青素回收率为95.62%;盐诱导双水相萃取分离絮凝后原花青素提取液结果表明,加入K_2HPO_4诱导双水相萃取原花青素效果较好,在2 mL絮凝后原花青素提取液中,K_2HPO_4加入量为0.5g时,原花青素萃取率和分配系数分别为87.2%和1.97。     

槐花蛋白萃取与营养评价的研究

采用响应面对双水相体系萃取槐花蛋白进行优化,并对其进行营养评价。考察了PEG4000质量分数、(NH4)2SO4质量分数、pH、萃取温度等因素对槐花蛋白萃取率的影响,采用氨基酸自动分析仪进行营养分析评价。结果表明:最佳萃取条件为PEG4000的质量分数28%、(NH4)2SO4质量分数45%、pH5、萃取温度50℃,槐花蛋白中必需氨基酸比例比较均衡,符合WHO/FAO的推荐标准,有较高的营养价值,极具开发利用价值。     

双水相萃取分离红高粱色素工艺研究

以双水相法萃取分离红高粱色素,选取聚乙二醇(PEG)/(NH_4)_2SO_4组成的双水相体系从高粱粒中萃取红高粱色素,确定双水相的组成成分PEG/(NH_4)_2SO_4对色素的影响。采用单一变量法,分别测定PEG分子量、PEG质量分数、(NH_4)_2SO_4质量分数、水浴温度、粗提取液体积萃取红高粱色素的最佳值,按照方案进行响应面分析,得到萃取高粱色素的最佳条件:PEG2000质量为1.8 g,(NH_4)_2SO_4质量为1 g,水浴温度为30℃,粗提取液体积为1.0 mL,加蒸馏水定量到10 g时,红高粱色素的萃取率最高。     

木瓜蛋白酶在PEG-IDA-Fe~(3+)/(NH_4)_2SO_4双水相体系中亲和分配行为研究

目的:研究木瓜蛋白酶在PEG-IDA-Fe3+/(NH4)2SO4亲和双水相体系中分配行为。方法:采用浊点法,构建双水相相图,考察各成相剂对木瓜蛋白酶活性的影响;研究不同PEG4000和(NH4)2SO4的质量分数、不同PEG-IDA-Fe3+的取代量时,木瓜蛋白酶在两相体系中分配行为的变化;用响应面法优化亲和双水相萃取木瓜蛋白酶的最佳分离条件;同时对木瓜蛋白酶在萃取体系中的结构进行表征。结果:当两相体系中p H6.9,PEG4000质量分数16%,(NH4)2SO4质量分数20%,PEG-IDA-Fe3+为3%时,木瓜蛋白酶的上相酶活性回收率达90.5%,蛋白分配系数达1.85,而其在PEG/(NH4)2SO4中的酶活回收率及蛋白分配系数都低于PEG-IDA-Fe3+/(NH4)2SO4亲和双水相体系。结论:PEG-IDA-Fe3+/(NH4)2SO亲和双水相系统能有效提高木瓜蛋白酶的分配效果,采用Fe3+螯合PEG成相剂的双水相萃取木瓜蛋白酶条件温和,不影响酶的特征结构。     

PEG/(NH_4)_2SO_4双水相体系萃取金银花中绿原酸的工艺优化

采用PEG/(NH_4)_2SO_4双水相体系优化金银花中绿原酸的提取工艺。以绿原酸萃取率为考察指标,在单因素试验基础上,确定PEG种类、PEG质量分数、(NH_4)_2SO_4质量分数和介质p H等关键影响因素,通过Box-Behnken试验筛选出绿原酸的最佳提取工艺条件。结果表明:PEG/(NH_4)_2SO_4双水相提取金银花中绿原酸的最佳工艺为:PEG4000质量分数28.7%、(NH_4)_2SO_4质量分数9.6%、介质pH 7。在此条件下,金银花中绿原酸萃取率为98.41%,该提取工艺环境友好,条件温和,提取率高,可为金银花资源的开发利用提供理论依据。     

无花果蛋白酶在双水相体系中分配行为

双水相萃取(ATPS)是近年来发展起来的新型、廉价酶纯化方法。为了扩展该方法应用领域,对PEG(polyethylene glycol)/(NH4)2SO4 双水相体系萃取无花果叶中无花果蛋白酶的实验条件进行研究,考察PEG 相对分子质量、成相物质量分数、pH 值、温度对无花果蛋白酶在两相体系中分配系数(K 值)的影响。结果表明：当两相体系中PEG 相对分子质量为1000、PEG 质量分数为20%、(NH4)2SO4 质量分数为19%、pH 值为6、温度室温(25℃)时蛋白酶在两相体系中分配系数最高可达3.6。     

苦苣皂甙的PEG/MgSO_4双水相萃取优化及其抗氧化评价

对PEG(聚乙二醇)/Mg SO4双水相萃取苦苣皂甙进行研究,比较双水相萃取的皂甙与其它常用提取方法提取的皂甙的抗氧化性。选取PEG4000浓度、Mg SO4浓度、p H、温度为独立变量,苦苣皂甙回收率为指标,采用Box-benhnken响应面法优化,得到回归模型。结果表明:各变量的影响顺序为PEG4000浓度p H萃取温度Mg SO4浓度;由回归分析得到最佳工艺条件是:PEG4000质量分数21%,Mg SO4质量分数16%,萃取温度51℃,p H 6,此时苦苣皂甙回收率为95.12%。双水相萃取所得皂甙与其它方法所得皂甙的提取率相差不大。苦苣皂甙抗氧化活性强弱与皂甙浓度呈量效关系,且与提取方法有关;双水相萃取所得皂甙抗氧化活性最强。     

聚乙二醇-硫酸铵双水相体系萃取α-葡聚糖酶

采用聚乙二醇-硫酸铵(PEG-(NH4)2SO4)双水相体系对α-葡聚糖酶进行萃取,以两相比、酶活、蛋白浓度、比活力以及萃取率为参数进行比较,探讨了使用不同分子量的PEG、不同的PEG浓度以及不同(NH4)2SO4浓度下对酶分配行为的影响。实验结果表明,α-葡聚糖酶在质量分数13%的PEG4000以及13%的(NH4)2SO4的双水相系统中,可获得较高的比活力2364.97 U/mg以及萃取率99.94%。     

响应面分析法优化麦麸酯酶双水相萃取的条件

研究采用聚乙二醇/硫酸铵双水相体系萃取麦麸酯酶,通过单因素实验考察不同PEG分子量、PEG浓度、无机盐种类、无机盐浓度、pH和离子强度对麦麸酯酶总蛋白分配系数、酶活回收率、纯化倍数的影响,并通过响应面分析法优化了萃取条件。结果表明最佳萃取条件为:PEG1000质量浓度为21%、(NH4)2SO4质量浓度为18%、pH4.4。回归方程预测双水相萃取纯化倍数可达到2.9208,三次验证实验的平均纯化倍数为2.9190,与预测值相对误差为0.06%。     

双水相萃取米糠多糖工艺条件的探究

旨在探究聚乙二醇/硫酸铵双水相体系萃取米糠中多糖成分的最佳条件。以双水相系统的相比、分配系数、收率等为参数,探究了PEG的相对分子质量、PEG的质量分数以及硫酸铵质量分数对米糠多糖在两相系统中的分配行为的影响。结果表明:萃取最佳条件为PEG分子量为6000,硫酸铵质量分数为14.8%,PEG 6000质量分数为14.3%,多糖得率为0.826388。     

双水相体系萃取分离鲍鱼内脏中的β-葡萄糖苷酶

采用聚乙二醇(PEG)/磷酸二氢钠(NaH₂PO₄)双水相萃取技术对鲍鱼内脏中的β-葡萄糖苷酶进行萃取分离。分别考察PEG分子量、PEG、NaH₂PO₄的质量分数、双水相体系的pH、样品加入量及超声波辅助方法对下相总酶活、纯化倍数及萃取率的影响,并通过单因素实验及正交实验进行优化。结果表明:室温下12% PEG4000+15% NaH₂PO₄双水相组成对粗酶液有最佳萃取效果,目标酶富集于下(盐)相,酶活为1.45 U,萃取率为0.991,分配系数为104,纯化倍数为4.4;该体系自然状态下的pH萃取效果最佳,最大处理量为体系总质量的20%,体系所有组分混匀后超声波180 W处理5 min辅助处理,能略微提高萃取效果。     

响应面优化双水相萃取分离酵母源MT工艺

采用聚乙二醇（polyethylene glycol,PEG）-(NH4)2SO4双水相体系,分离铜诱导的诱变酿酒酵母菌所表达的金属硫蛋白。以PEG质量分数、(NH4)2SO4质量分数及pH值为考察因素,萃取率为响应值,结合Design-Expert 8.0.6软件做响应面优化分析,优化到最佳萃取条件：PEG相对分子质量2 000、PEG和(NH4)2SO4质量分数分别为22.5%和17.46%、pH 5.98。获取的金属硫蛋白主要分布在上相,萃取率可达81.69%。此方法操作简单、高效、成本低,是酵母源金属硫蛋白分离提纯的新方法。