食品中单核细胞增生性李斯特菌的快速分离鉴定

单核细胞增生性李斯特菌(Listeria monocytogenes,简称单增李斯特菌)是一种重要的食源性致病菌,能引起人畜共患李斯杆菌病。本文采用两种不同的增菌分离方法从散装牛奶和猪肉中共分离得到8株单增李斯特菌。通过革兰氏染色、生化鉴定、PCR扩增hlyA基因、16SrDNA测序、血清分型等一系列实验对可疑菌株进行分析鉴定。综合实验结果和其他单增李斯特菌分离标准,探讨开发了一种快速分离鉴定单增李斯特菌的方法,该方法可在4～5d内完成单增李斯特菌的分离检测过程。     

食品中亚致死损伤单增李斯特菌的研究进展

单核细胞增生李斯特菌（Listeria monocytogenes）是一类人畜共患的食源性致病菌。食品加工过程中所产生的亚致死损伤单增李斯特菌是不容忽视的,在适宜的环境下,损伤菌会恢复至正常状态继续生长,对消费者的健康造成威胁,因此亚致死损伤菌的存在是食品安全的一大隐患。探究亚致死损伤菌的检测、修复是目前研究的热点之一,本文将综合相关研究对近年来食品中亚致死损伤单增李斯特菌的检测、修复方法以及发展趋势进行综述。     

实时RT-PCR检测存活于乳中的单核细胞增多性李斯特菌

单增李斯特菌是一种可在低温下生长、能引起人畜共患病的食源性致病菌.为克服传统PCR检测的假阳性问题,有效的检测单增李斯特活菌,本研究提取单增李斯特菌的总RNA并进行反转录,以单增李斯特菌的必要毒力基因hlyA为靶基因,设计特异性引物和TaqMan探针进行实时PCR检测,研究了检测的特异性和灵敏度,考查了对人工污染牛乳进行检测的应用性.结果表明,所用引物和探针能较好的扩增目的基因,而对其他食源性致病菌无交叉反应.单增李斯特菌经1h增菌,可检出3×102CFU/ml.而经3h增菌,活菌检测限可达30CFU/ml.人工污染牛乳样品经6h增菌,检测限为17CFU/ml.此方法可应用于乳中单增李斯特菌的快速检测和污染状况调查.     

LAMP法检测单核细胞增生性李斯特菌的研究

单核细胞增生性李斯特氏菌(Listeria monocytogenes)简称单增李斯特菌,属李斯特菌属,是食源性致病菌中的一种,它能够引起人畜共患病,在食源性细菌中毒中占主要地位。为了鉴定该菌,以单增李斯特菌的内化素基因(inlA)为靶基因,通过LAMP法对该基因扩增,并优化其反应条件。过夜培养的单增李斯特菌的菌液,取1 mL提取细菌基因组DNA,提取完成后测得其DNA含量为227 ng/μL,然后依次将其进行10倍梯度稀释,并以此作为LAMP实验模板,最终实验结果表明,LAMP检测单增李斯特菌纯菌培养物的检测限为2.27 fg/μL。     

食品中单核细胞增多李斯特菌的快速检测

单核细胞增多李斯特菌是一种能引起人畜共患病和食源性疾病的致病菌。本文简述了单增李斯特菌的特性和毒力因子,介绍了从分子生物学和免疫学发展起来的核酸探针杂交、PCR、ELISA、免疫传感器等快速检测方法。这些快速检测方法与传统检测方法相比不仅缩短了检测时间,提高了检测效率,还提高了检测方法的灵敏度和特异性,对于单增李斯特菌的检测具有良好的应用前景。     

多重荧光定量PCR法检测海产品中副溶血性弧菌、沙门菌和单增李斯特菌

目的建立检测海产品中副溶血性弧菌、沙门菌和单增李斯特菌的多重荧光定量PCR体系。方法针对副溶血性弧菌tlh基因,沙门菌Ompc基因和单增李斯特菌hly基因设计引物和Taq Man探针,建立多重荧光定量PCR体系,进行特异性与敏感性研究;利用该体系检测海产品中的副溶血性弧菌、沙门菌和单增李斯特菌。结果副溶血性弧菌、沙门菌和单增李斯特菌可得到特异性扩增,而共存于海产品中的其他细菌均未见扩增曲线。敏感性试验显示,该体系对副溶血性弧菌、沙门菌和单增李斯特菌的最低检测限分别为72、40、80 cfu/ml。对舟山采集的150份样品进行检测,检出32份副溶血性弧菌、11份沙门菌、5份单增李斯特菌,与国标法检测结果一致。结论本研究建立的基于Taq Man探针的多重荧光定量PCR检测方法可以特异、灵敏、简单快速地实现对海产品中副溶血性弧菌、沙门菌和单增李斯特菌的检测。     

Mini-VIDAS法和国标法检测单增李斯特菌的效果比较

目的比较两类方法检测单增李斯特菌的特异性、灵敏度和抗干扰性,并研究添加成分和样品基质对检测效果的影响。方法选取单增李斯特菌(CICC 21633/ATCC 19111)、斯氏李斯特菌(CICC 21671)、伊氏李斯特菌(CICC 21663/ATCC19119)和英诺克李斯特菌(CICC 10417/ATCC 33090)为试验对象,采用国标法和mini-VIDAS法为试验方法。结果两种检测方法的特异性较好,均能区分李斯特菌属和非李斯特菌属。国标法和mini-VIDAS法的灵敏度分别为104~105 cfu/m L和105 cfu/m L;同时,国标法的抗干扰性稍强,1/104混合干扰菌液可检出目标菌。添加次氯酸钠后两种方法对目标菌的检出都受到影响。添加成分对单增李斯特菌生长的抑制作用符合乙醇苯甲酸钠十三香料凉拌菜料次氯酸钠。当基质中单增李斯特菌污染水平较低并且背景微生物数量高时,目标菌的检测结果受基质严重干扰。不同增菌液对单增李斯特菌的增菌效果为Fraser肉汤LB2FB2。结论 mini-VIDAS法和国标法对单增李斯特菌的检测性能基本相当。采用国标法时需考虑微生物污染背景、添加成分等样品基质特性,以提高目标菌的检出率。mini-VIDAS法可作为初筛的良好工具。     

单增李斯特氏菌快速检测方法的建立

建立单增李斯特氏菌的快速检测方法.针对单增李斯特氏菌virR基因序列设计特异性引物及探针,建立等温扩增法,并利用免疫金标试纸条对结果进行检测.用10株单增李斯特氏菌、6株李斯特菌属菌株及其他食源性致病菌24株进行特异性试验;通过定量DNA、纯菌液计数进行灵敏度验证.结果表明建立方法具有较好的特异性;增菌液检测灵敏度为102 cfu/test,DNA检测灵敏度为10°pg/test.建立的单增李斯特氏菌的快速检测方法特异性较好、灵敏度高,适合于单增李斯特氏菌快速筛选检测.     

食品中单增李斯特菌快速检测技术研究进展

单核细胞增生性李斯特氏菌(简称单增李斯特菌)是一种广泛存在于自然界中可导致人畜共患病的病原菌, 同时也是一种常见的食源性致病菌。目前, 食品中单增李斯特菌的检测主要采用国标法, 传统检验方法虽然可操作性高, 但检验流程耗时过长。随着生活水平不断提高, 人们在饮食中摄入受单增李斯特菌污染的食品的风险增大, 如遇到食品安全突发事件, 传统检测不能及时得到检测结果, 无法保障人们的饮食安全。本文概述了基于分子生物学和免疫学发展起来的快速检测方法, 包括PCR法、实时荧光定量PCR法、环介导等温扩增法、酶联免疫吸附法、免疫层析试纸条, 其中环介导等温扩增法已经应用于食品致病菌的检测。通过分析对比以上快速检测方法, 为探索更灵敏高效且适用于基层食品检验的检测方法提供参考。     

改良LAMP检测鸡肉中单增李斯特氏菌的研究

本研究建立一种改良环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)技术检测鸡肉中单增李斯特氏菌(Listeria monocytogenes,L. monocytogenes)的方法。针对单增李斯特氏菌的溶血素基因(hlyA)设计LAMP引物,对单增李斯特氏菌进行特异性检测,通过荧光曲线和肉眼观察荧光颜色来判定检测结果。试验结果表明:改良LAMP方法检测单增李斯特氏菌具有良好的特异性,7株单增李斯特氏菌呈阳性结果,24株非单增李斯特氏菌呈阴性结果。与聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)方法相比,改良LAMP方法具有灵敏度高(5.4×100 fg/μL)、检出限低(3.9×100 CFU/g)的特点,均是PCR结果的100倍。对66份鸡肉样品进行检测,得到改良LAMP方法的敏感性为100%,特异性为98.41%,符合率为98.48%。综上所述,改良LAMP方法能够快速、准确的检测单增李斯特氏菌,具有很好的应用前景。     

食品中单增李斯特菌的检测新技术

单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes,LM)是一种人畜共患食源性致病菌,可使人畜患脑膜炎、心肌炎、败血症、死婴、早产等疾病,危害较大;有效控制食品中的LM,是食品安全的重要课题之一。对以免疫学、分子生物学为基础建立的一些方法,如酶联免疫吸收分析法(ELISA)、酶联荧光分析法(ELFA)、DNA探针、PCR、DNA微矩阵法,作一简单叙述,为深入研究提供参考。最后指出预防手段非常重要,从源头上杜绝LM污染是关键。     

Spontaneous release of temperate phage by relysogenized lactose-positive transductants of Streptococcus lactis C2

Transduction for lactose-fermenting ability between the lactose-positive lysogen Streptococcus lactis LM0221 and plasmid-cured, prophage-cured, lactose-negative S. lactis LM2301 resulted in the appearance of lactose-positive transductants surrounded by a zone of clearing in the lactose-negative cell lawn. By using plaque assay procedures, the zones were shown to contain bacteriophage particles, and both spontaneous release and UV induction of prophage from these transductants were demonstrated. The DNA hybridization confirmed that LM2301 did not contain the prophage in its chromosome and that the zone-producing transductant KZ1 was relysogenized by the temperate bacteriophage. Further, a 4.35 Kb EcoRI digestion fragment appeared to contain the DNA sequences for integration into the chromosome and may provide a means for stabilizing cloned DNA by effecting chromosomal insertion in LM2301 derivatives. The selection of zone-producing lactose-positive transductants of LM2301 provided a means for detecting strains relysogenized by the temperate phage induced from LM0221.     

亚甲基蓝对单增李斯特菌菌膜的光动力杀伤作用

探讨单增李斯特菌（Listeria monocytogenes,LM）生物菌膜的生长特性及亚甲基蓝对LM生物菌膜光动力杀伤作用。通过结晶紫染色法判断与观察LM生物菌膜的形成并用酶标仪在595 nm波长处对其不同生长阶段的生物量进行测定,同时通过细菌平板菌落计数法研究亚甲基蓝对LM生物菌膜的光动力杀伤作用。结果表明：结晶紫染色法可用于定性判断与观察LM生物菌膜,且随着培养时间的延长,LM生物菌膜生物量不断增加,形成的网状结构越来越致密。当光敏剂质量浓度为10 μg/mL的亚甲基蓝在光功密度为200 mW/cm2 的可见光照射30 min时,即可使LM生物菌膜的失活率达到99.99%以上,其菌落数降低了4.08（lg（CFU/mL））。亚甲基蓝对LM生物菌膜的光动力灭活作用非常显著,其杀伤效果主要取决于光敏剂质量浓度和光照时间。     

抗食源性病原菌细菌素的筛选及特性研究

目的 筛选一种抗食源性病原菌的细菌素,并对其稳定性进行研究.方法 以食源性病原菌Bacillus cereus ATCC 14579、Listeria monocytogenes LM201、Listeria monocytogenes LM605为指示菌,采用琼脂扩散法筛选细菌素产生菌,通过离子交换树脂法和高效液相色...     

免疫学技术在食品安全快速检测中的应用研究进展

随着人们对于食品安全问题的关注程度不断增加,食品安全快速检测方法得到了广泛应用。目前常用的食品安全快速检测技术包括免疫学技术、酶抑制技术、传感器技术、生物芯片技术等。免疫学检测技术具有灵敏度高、特异性强、方便、快速和经济等优点,在食品安全快速检测中发挥了重要的作用。免疫学技术在食品安全领域广泛应用的主要有免疫吸附法和免疫层析法两大体系,其中免疫吸附法以酶联免疫吸附检测法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)最常用,而免疫层析法则以胶体金免疫层析技术(colloidal gold immunochromatographic assay,GICA)为代表。本文介绍了免疫学技术在食品安全快速检测中应用的原理及特点,并对酶联免疫吸附检测技术和胶体金免疫层析技术近几年来在食品安全快速检测中的应用进展进行了综述。     

Rapid detection of Listeria monocytogenes using fluorescence immunochromatographic assay combined with immunomagnetic separation technique

To ensure the safety and quality of food ingredients, especially meat and dairy products, a high‐throughput, rapid and sensitive method to detect Listeria monocytogenes (LM) is always on a high demand. In this work, a specific induction method to enrich and detect LM based on fluorescence immunochromatographic assay (FICA) combined with immunomagnetic separation (IMS) techniques has been developed. The immunomagnetic‐beads (IM) beads were obtained through functionalised magnetic microspheres and the conjugated reaction between the carboxyl on beads surface and amino groups of antibody. The prepared IM‐beads could be used for rapidly enriching pathogenic bacteria with fewer steps, resulting in a high specificity for four pathogenic serotypes and about a 40‐fold improvement of detection limit compared with FICA only. In addition, this method was successfully applied in LM detection in sausage, pork and milk samples with a potential for further application in rapid on‐site detection of pathogenic bacteria.     

3种鲎试验在乳品内毒素活性定量检测中的应用评价

目的 比较3种内毒素活性定量检测方法在乳品中的应用情况。方法 采用2种传统东方鲎(Tachypleus amebocyte lysate, TAL)试验(动态浊度法/动态显色法)和1种便携式内毒素检测仪(portable test system, PTS)对牛奶、酸奶和奶粉产品内毒素活性进行检测, 评估3种方法在乳品内毒素活性检测中的应用情况。结果 3种方法用于乳品内毒素活性检测的加标回收率为50%~200%, 符合药典要求。对比动态浊度法, 动态显色法检测乳品内毒素活性的加标回收率范围更加接近100%。PTS方法的内毒素活性检测值分别与2种传统TAL试验的检测值有较好的线性关系。结论 3种方法均适用于乳品内毒素活性的检测, 但动态显色法更加适合乳品内毒素的检测。     

食品中单增李斯特菌PCR-NALF检测方法

建立了一种快速检测单增李斯特菌的聚合酶链式反应-核酸层析(PCR-NALF)方法,该方法通过一对标记生物素和地高辛的引物,对提取自样品中的DNA进行扩增,然后用包被亲和素和抗地高辛抗体的层析试纸条对扩增产物进行检测,并通过肉眼可见的红色条带进行结果判读,从而替代电泳实现便捷检测。在特异性试验中,其他李斯特菌和常见致病菌均呈现阴性反应,与电泳结果一致。与传统微生物检测法(GB/T 4789.30-2008)相比无显著性差异(χ~2=0,P>0.05)。     

瑞替普酶溶栓活性测定方法的比较研究

目的评估测定瑞替普酶溶栓生物活性的4种方法。方法分别使用凝块溶解法、平板溶圈法、发色底物法及气泡法4种方法，测定同一批瑞替普酶样品的生物活性。结果4种测活方法的误差分别为10％，3％，3％和6％，表明测定瑞替普酶体外生物活性的4种方法均有可比性。结论平板溶圈法和发色底物法测活的重复性较好，特异性好，灵敏度高，较适合测定瑞替普酶活性的要求。     

葡萄酒缩合单宁测定方法的比较研究

目的：对比葡萄酒中测定缩合单宁的甲基纤维素沉淀法(MCP法)和蛋白质沉淀法(A-H法),以寻找一种快速准确的测定方法。方法：采用两种方法测定不同类型、产地、品种葡萄酒的缩合单宁,考察其测定值和变异系数;采用液相色谱-质谱联用法(HPLC-MS法)测定缩合单宁含量,采用吸光度法(A280)测定总酚含量,并与上述两种方法的结果对照。结果：(1)MCP法和A-H法均只适用于红葡萄酒缩合单宁测定,MCP法精度略高但差异不显著。(2)MCP法测定值平均为A-H法的9.13倍,但二者存在较好的线性关系(R2=0.6029)。MCP法与HPLC-MS法线性关系良好(R2=0.7733),A-H法较差(R2=0.4843)。(3)MCP法与总酚存在良好的线性关系(R2=0.9095),A-H法与总酚无显著线性关系(R2=0.2872)。结论：两种方法均能反映红葡萄酒缩合单宁含量,但MCP法与HPLC-MS法、总酚具有更高的一致性,如采用A280测定总酚,应采用MCP法测定缩合单宁。