两步法制备大豆异黄酮操作单元研究

麸皮、玉米粉等成分，按1：1加矿泉水，灭菌后接种3％菌种，30℃发酵5d，刚缓冲液提取β-葡糖糖苷酶。常用氮源和2．5％乳酸对菌种产酶无影响。纯化的β-葡糖糖苷酶最适pH为4．4～4．8，最适催化温度60℃，最适催化时间30min。用含2％CaCO3的60％乙醇在50℃提取豆粕中苷类物质，用石油醚、氯仿去除杂后，再用正丁醇精提豆粕中苷类。用特制碎胶柱分离正丁醇液，用丙酮等洗脱获高纯度大再异黄酮糖苷。用β-葡糖糖苜酶水解片黄酮糖苷，经超滤、固定化细胞等处理，制备高纯度大豆异黄酮甙元。     

壳聚糖/海藻酸钠固定化β-葡萄糖苷酶的研究

以壳聚糖、海藻酸钠为包埋材料,戊二醛为交联剂,固定化β-葡萄糖苷酶,研究了固定化条件与固定化酶的活力回收的关系.通过单因素和正交实验确定了最佳的固定化方法,即:壳聚糖(脱乙酰度=85%)浓度为1.5%、海藻酸钠浓度为2%、戊二醛浓度为1.0%、钙离子浓度为0.7mol/L、pH为5,固定化酶的活力回收达到83.8%.固定化酶的最适温度为60℃,最适pH为5,该固定化酶重复使用5次后,其活力仍能保持70%.由于β-葡萄糖苷酶比较昂贵,采用固定化技术将其固定在载体上反复使用,可以达到简化工艺、降低成本的目的,作用于大豆异黄酮的水解方面具有潜在的应用前景.     

改进豆乳不良风味的浸泡机制

在加工豆乳的第一道工序即浸泡大豆过程中,引起7,4’-二羟基异黄酮和5,7,4’-三羟基异黄酮的增加．这些不良风味物质的生成量取决于浸泡水的温度和pH值,并在50℃下pH值为6.0的浸泡水中获得最大生成量．当向浸泡水中加入β-萄糖苷酶的竞争抑制剂δ-葡糖酸内酯时,可以强烈抑制这些不良风味物质的生成．因此可以判定在浸泡过程中,是β-葡糖苷酶导致了7,4’-二羟基异黄酮和5,7,4’-三羟基异黄酮的生成．     

固定化酶生产低聚异麦芽糖工艺研究

壳聚糖溶解于20％的盐酸，配成25％的壳聚糖溶液，然后用注射器注射到含15％氢氧化钠和30％甲醇的混合溶液中凝结成2mm左右的中空球形壳聚糖。经4％的戊二醛活化的中空球形壳聚糖分别与α-葡萄糖转苷酶、α-淀粉酶、β-淀粉酶、切枝普鲁兰酶在室温反应2h，4℃静置过夜，制备固定化酶。固定化酶的最适pH值约降低1个单位，最适温度提高约10℃。固定化α-淀粉酶和β-淀粉酶的相对酶活力分别为7．2％和22.3％。四种不同的固定化酶重组构成酶催化反应器，生产低聚异麦芽糖含量达38．9％。     

β-葡萄糖苷酶对豆奶及豆奶粉中大豆异黄酮糖苷化合物的转化作用研究

对利用β-葡萄糖苷酶将豆奶及豆奶粉中生物有效性较低的异黄酮糖苷化合物转化为高活性的异黄酮糖苷配基化合物进行了试验研究。研究了不同浓度β-葡萄糖苷酶对豆奶及豆奶粉中大豆苷、乙酰大豆苷和丙二酰大豆苷的降解转化作用。结果表明,在β-葡萄糖苷酶浓度1.5U/mL、pH5.5、45℃保温1h的条件下,豆奶及豆奶粉中大豆苷、乙酰大豆苷和丙二酰大豆苷的总量分别降低了89.1%和89.5%,大豆黄素的含量分别增加了57.2和78.7倍;黄豆苷、乙酰黄豆苷和丙二酰黄豆苷的总量分别降低了93.2%和87.7%,黄豆黄素的含量分别增加了4.2和11.7倍;染料木苷、乙酰染料木苷和丙二酰染料木苷的总量分别降低了93.8%和82.4%,染料木黄酮的含量分别增加了5.2和23.0倍。试验结论:利用β-葡萄糖苷酶能够将豆奶及豆奶粉中生物有效性较低的异黄酮糖苷化合物高效转化为高活性的异黄酮糖苷配基化合物。     

固定化酶制备麦胚蛋白粉操作单元研究

中空球形壳聚糖经3%戊二醛活化后与真菌α-淀粉酶在室温反应2h,冰箱静置过夜,制备固定化α-淀粉酶.固定化α-淀粉酶最适催化温度为60℃,最适pH值为5.0,相对酶活力为7.4%.固定化α-淀粉酶连续使用15d,酶活力未下降,生产麦胚蛋白质的纯度达89%,得率为79%.     

大豆异黄酮糖苷酶法水解工艺研究

通过正交试验及方差分析,得到大豆异黄酮糖苷酶法水解为大豆异黄酮苷元最佳工艺条件:在pH 6.0缓冲液体系中,酶解温度为38℃,酶解时间为90 min,加酶量为4.0 mg(4%),酶法水解率为82.55%。     

表面脱乙酰化甲壳素颗粒固定溶菌酶及酶学性质研究

本研究以表面脱乙酰化甲壳素颗粒为载体,以戊二醛为交联剂,对溶菌酶进行固定化。本文利用正交试验设计,以蛋白利用率、活力回收率和保藏稳定性为指标,以半脱乙酰壳聚糖为底物,3-甲基-2-苯丙噻唑啉酮腙(MBTH)法为酶活力测定方法,优化了关键固定化参数,并考察了固定化对溶菌酶酶学性质的影响。结果表明:固定化过程中最佳脱乙酰时间(A)为25 min,戊二醛浓度(B)为5%,载体活化pH(C)为5.0,在此条件下固定化的溶菌酶与游离溶菌酶相比,其表观最适pH由4.0降至3.5;最适温度由75 ℃升高至80 ℃,且在70~90 ℃仍保持95%活力;K_m为2.69 mg/mL,明显大于游离酶的1.75 mg/mL;15 d稳定性保持66%。因此,固定化提高了溶菌酶的热稳定性和贮藏稳定性,具有广泛的应用前景。     

发酵酶解耦合法大豆苷元转化工艺

以市售大豆异黄酮粉为样品,选用产β-葡萄糖苷酶的LJ-Q2菌种与优化后的固定化β-葡萄糖苷酶进行耦合发酵,采用单因素、响应曲面法对耦合发酵条件进行优化,高效液相法(HPLC)测定大豆异黄酮苷元,考察耦合发酵条件对大豆苷元转化率的影响。研究结果如下:最优条件为温度54℃,耦合时间3 h,初始p H7,固定化酶添加量7%;大豆异黄酮苷元绝对质量13.76 mg,大豆异黄酮苷元转化率为76.8%。对大豆苷制备应用技术开发有参考价值。     

磁性壳聚糖微球固定化果胶酶的研究

以壳聚糖复合Fe3O4为载体,采用吸附．交联法固定化果胶酶。考察壳聚糖的脱乙酰度、分子量对微球载体形态的影响;对固定化过程中酶浓度、pH值、温度、时间等因素进行考察;采用正交试验设计对载体制备与酶固定化中的主要条件进行优化。结果表明,随着壳聚糖脱乙酰度、分子量的增加,载体表现出良好性能;脱乙酰度为95％、分子量为20万的壳聚糖浓度为3％、Fe3O4的加量与壳聚糖质量比为1：3、戊二醛浓度为3％、酶加量为0．3ml时,固定化果胶酶活力最高,其酶活保存率为79％。     

壳聚糖固定化α-葡萄糖苷酶的研究

以粉末状壳聚糖为载体 ,采用吸附 交联的方法将α 葡萄糖苷酶固定化。在最适固定化条件下 ,室温吸附 6h ,然后与 3 5%的戊二醛在 4 5℃交联 6h ,可得到固定化酶的活力为1430 0U ,酶活力回收率为 59 6 %。通过实验发现 ,与游离酶相比 ,固定化酶的最适 pH向酸性方向移动 0 5pH单位 ,为 pH 4 5;最适作用温度达到 70℃ ,比游离α 葡萄糖苷酶提高 5℃ ;酸碱稳定性、热稳定性及贮存稳定性均有较大提高 ;在 6 0℃操作半衰期为 16 8h     

两株素食者肠道菌产β-葡萄糖苷酶考察及产酶条件优化

采用对硝基苯基-β-D-葡萄糖苷法,与黑曲霉相比较考察素食者肠道菌LJ-G1、LJ-Q2产β-葡萄糖苷酶能力,再经单因素、响应面试验对菌种的产酶条件进行优化。结果表明:LJ-G1、LJ-Q2菌株均能产β-葡萄糖苷酶,且LJ-Q2产酶能力高于LJ-G1,与黑曲霉相比较,在发酵时间短于64 h时LJ-G1、LJ-Q2产酶能力高于黑曲霉;LJ-Q2菌种的最优产酶条件为:培养基p H 8.0、培养温度38℃、培养时间38 h。在最优条件下进行验证实验,酶活力达到1.70 IU/m L。加入大豆异黄酮原料进行发酵培养,得到游离大豆异黄酮转化率为39.4%。     

蜂蜜中β-葡萄糖苷酶活性测定及来源分析

以对硝基苯基β-D- 葡萄糖苷(pNPG)为底物,对蜂蜜中β- 葡萄糖苷酶活性测定条件进行研究。结果表明：蜂蜜中β- 葡萄糖苷酶活性测定的最佳条件为以柠檬酸- 磷酸氢二钠缓冲液为提取液,pH5.0,温度60℃,底物浓度30mmol/L。酶促反应在2.5h 和37℃时酶促反应曲线线性关系最好。研究还发现,β- 葡萄糖苷酶可能是蜜蜂在采集加工过程中加入进去的,同时,该酶活性还可能与蜂蜜的新鲜度相关。     

Hydrolysis of soybean isoflavone glycosides by a thermostable β-glucosidase from Paecilomycesthermophila

The β-glucosidase from Paecilomyces thermophila J18 was found to be capable of hydrolysing daidzin and genistin in a previous study. This report further evaluated the thermostability and hydrolysis of soybean isoflavone glycosides. The enzyme was found to be very stable at 50 °C, and retained more than 95% of its initial activity after 8 h at 50 °C. It converted isoflavone glycosides, in soybean flour extract and soybean embryo extract, to their aglycones, resulting in more than 93% of hydrolysis of three isoflavone glycosides (namely, daidzin, genistin and glycitin) after 4 h of incubation. Also, addition of the β-glucosidase greatly increased the contents of isoflavone aglycones in the suspended soybean flour and soymilk. The results indicate that the thermostable β-glucosidase may be used to increase the isoflavone aglycones in soy products. This is the first report on the potential application of fungal β-glucosidases for converting isoflavone glycosides to their aglycones in soy products.     

外源β-葡萄糖苷酶处理结合异烟酸-吡唑啉酮分光光度法测定橡胶籽中氰化物含量

研究经不同方法脱毒处理后的橡胶籽分别采用异烟酸-吡唑啉酮分光光度法和加入外源β-葡萄糖苷酶的异烟酸-吡唑啉酮分光光度法检测其氰化物含量。结果表明:采用异烟酸-吡唑啉酮分光光度法检测出的氰化物含量较低或不存在,而加入外源β-葡萄糖苷酶的异烟酸-吡唑啉酮分光光度法检测出的氰化物含量明显高于单独采用异烟酸-吡唑啉酮分光光度法的检出值。再对加入外源β-葡萄糖苷酶的异烟酸-吡唑啉酮分光光度法的应用条件进行优化后得到最优条件为浸泡时间3.35 h、浸泡温度45.06℃、加酶量24.11 U/100 mL、浸泡pH 5.56。以上条件下,预测的氰化物含量为28.79μg/g,加标回收率为85.02%~92.04%,测定结果准确可靠。     

固定化碱性蛋白酶制备麦胚降血压肽研究

采用中空壳聚糖作为载体,通过双功能试剂戊二醛作偶联剂,将碱性蛋白酶连接到中空壳聚糖,制备固定化碱性蛋白酶。研究固定化碱性蛋白酶的部分性质及水解麦胚蛋白质条件。实验结果显示,1.5% 戊二醛溶液活化的壳聚糖偶联1mg 碱性蛋白酶,酶催化相对活性可达90%;固定化酶最适pH 值为9.5,最适反应温度约65℃,催化水解麦胚蛋白质的水解率达16.5% 约需10min;固定化酶与麦胚蛋白质的比达到1:5 时,一次性获取含降血压肽水解物质的得率为15.6%。     

酿酒条件对两株商业酿酒酵母β-葡萄糖苷酶的影响

研究酿酒条件（氧气、pH值、温度、糖和乙醇等）对两株商业酿酒酵母β-葡萄糖苷酶的影响。结果显示：氧气促进酵母β-葡萄糖苷酶的合成,两株商业酿酒酵母完整细胞的β-葡萄糖苷酶最适pH值为5.0,最适温度为60 ℃,果糖、葡萄糖和蔗糖对两株酿酒酵母完整细胞的β-葡萄糖苷酶活性具有轻微抑制作用,乙醇（体积分数2%～20%）促进β-葡萄糖苷酶的酶活力。在葡萄酒发酵过程中,β-葡萄糖苷酶主要存在于完整细胞和透性化细胞中,上清液中酶较少。     

Purification and characterization of a β-glucosidase capable of hydrolyzing soybean isoflavone glycosides from Pichia guilliermondii K123-1

A β-glucosidase, efficiently hydrolyzing isoflavone glycoside to isoflavone aglycone, was purified from Pichia guilliermondii K123-1, isolated from Korean soybean paste by ammonium sulfate precipitation, ion exchange column chromatography, gel filtration, and fast protein liquid chromatogram (FPLC). The molecular mass of purified enzyme was estimated to be 45 kDa by sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis (SDSPAGE). The optimum temperature for enzyme activity was 45°c and it decreased dramatically above 50°c. The maximal activity was at pH 4.5 and more than 80% of the activity was retained for 24 hr in the pH range from 4.0 to 8.0 at 4°C. The N-terminal amino acid sequence of the enzyme was determined to be GLNWDYDNDK. Based on its substrate specificity and catalytic properties, the activity of the purified β-glucosidase was more effective when the sugar moiety of the glycoside was glucose and the size of the aglycone similar to that of the isoflavones. The purified β-glucosidase efficiently converts genistin and daidzin to genistein and daidzein 1.96 and 1.75 times more than almond meal β-glucosidase.     

球形交联壳聚糖固定化果胶酶在枇杷果汁澄清中的应用

以戊二醛为交联剂,NaOH与乙醇为凝结液组成成分,壳聚糖为载体制备了球形交联壳聚糖固定化果胶酶,对其在枇杷果汁澄清中的应用进行了研究。结果表明,固定化果胶酶澄清枇杷果汁的工艺参数为:固定化酶质量浓度为50 g/L(果汁),果汁pH值为3.0,果汁浓度为40%,酶解温度和时间分别是50℃和1.5 h,在重复使用7次后果汁透光率仍保留有75.8%。固定化果胶酶比溶液酶处理枇杷果汁的澄清效果好,酶解后果汁的糖度与酸度没有变化,汁渣分层速度快,果汁色泽为淡黄色,冷热稳定性也有所提高。     

绿色木霉β-葡萄糖苷酶的分离纯化及酶学性质

针对绿色木霉AS3.3711产生的β-葡萄糖苷酶组分,先后运用包括乙酸铵沉淀、透析、Sephadex G-150葡聚糖凝胶柱层析在内的一系列分离纯化技术对该纤维素酶进行纯化,得到β-葡萄糖苷酶纯化组分,并对该酶的酶学性质进行研究。纯化后酶液的蛋白质量浓度为8.12 mg/mL、酶活力为4.08 U/mL,纯化倍数达到18.48,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（sodium dodecylsulfate polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE）测定分子质量为66.0 kD。绿色木霉β-葡萄糖苷酶在酸性条件下稳定性良好,最适pH值为5.0;在温度60～70 ℃能长时间保持较高酶活力,最适反应温度为60 ℃。金属离子中,Ca2+、Mg2+、K+对绿色木霉AS3.3711 β-葡萄糖苷酶活力起到促进作用,Ca2+促进作用最强;而Zn2+、Fe3+对该酶有抑制作用,Ag+、Cu2+、Hg2+重金属离子使β-葡萄糖苷酶几乎丧失了全部活性。