花生分离蛋白碱性蛋白酶Alcalase水解物具有血管紧张素转化酶抑制活性

分别以碱性蛋白酶Alcalase和中性蛋白酶Neutrase对花生分离蛋白进行水解，制备花生分离蛋白水解物，并测定不同水解时间所得产物对血管紧张素转化酶(ACE)的抑制活性。未水解的花生分离蛋白没有ACE抑制活性，用中性蛋白酶Neutrase水解所得的水解物显示弱ACE抑制活性。然而，碱性蛋白酶Alcalase水解物具有很强的ACE抑制活性，水解0．5h时水解物活性最高，其半抑制浓度为(IC50)0．56mg／ml。本研究表明，当用碱性蛋白酶Alcalase水解时，花生分离蛋白是生产ACE抑制肽的良好蛋白质来源，花生分离蛋白碱性蛋白酶Alcalase水解物可作为具有降压功能的功能食品添料。     

麦胚抗氧化肽水解用酶的筛选研究

研究了中性蛋白酶AS1.398、Neutrase及碱性蛋白酶Alcalase、Proleather FG-F、Protease S水解麦胚蛋白的进程特性,考察了5种蛋白酶水解物的体外抗氧化活性。结果表明,碱性蛋白酶Proleather FG-F是制备麦胚抗氧化肽的最适水解酶,其酶解物清除超氧阴离子自由基(O2-.)的能力最强,IC50为1.33mg/mL;其酶解物中相对分子质量小于1000的组分所占比例最高,达到68.28%。     

花生分离蛋白水解物中血管紧张素转化酶抑制肽的分离纯化与结构鉴定

利用碱性蛋白酶Alcalase对花生分离蛋白进行水解,制备花生分离蛋白水解物,并测定不同水解时间所得产物对血管紧张素转化酶(ACE)的抑制作用。未水解的花生分离蛋白没有ACE抑制活性,而利用碱性蛋白酶Alcalase水解所得的水解物具有很强的ACE抑制活性,水解30 min时水解物活性最高,其半抑制浓度为(IC50)0.56 mg/mL。通过超滤、Sephadex G-15凝胶过滤层析、反相高效液相色谱(RP-HPLC)、基质辅助激光解吸电离飞行时间串联质谱(MALDI-TOF-MS/MS)和氨基酸组成分析等分析手段从水解30 min所得的水解物中分离鉴定出两种新的ACE抑制肽,氨基酸序列为Gln-Gly-Gly-Ser-Gly-Met-Thr-Leu-Ala-Phe-Pro-Leu-Pro-Lys和Lys-Ile-Phe-Leu-Arg-Leu-Ser,其IC50值分别为10.6μmol/L和36.6μmol/L。     

扁杏仁肽对血管紧张素转化酶的抑制作用研究

采用碱溶酸沉法从陕北扁杏仁制得杏仁总蛋白,并采用Osborne法分级制备清蛋白、醇溶蛋白、球蛋白和谷蛋白;用碱性蛋白酶Alcalase水解,超滤分离,制备不同分子量总蛋白杏仁肽和分级蛋白杏仁肽;利用高效液相色谱法测定水解物,系统研究杏仁肽对血管紧张素转化酶(ACE)的抑制活性。结果表明,不同分子量的总蛋白杏仁肽均具有ACE抑制活性,且肽段分子量越小,抑制活性越强;分级蛋白杏仁肽中,谷蛋白肽的抑制活性最强,分子量低于1 ku的谷蛋白肽的IC50值为(96.21±0.06)μg/m L。     

菜籽蛋白水解物及其膜分离组分的降血压相关活性

应用商业化蛋白酶Alcalase水解菜籽分离蛋白(RPI),并通过膜分离技术将水解物分离成4种不同分子质量大小的多肽组分(<1kD、1～3kD、3～5kD和5～10kD);评价水解物(RPH)和多肽组分的血管紧张素转化酶-Ⅰ(ACE)、肾素抑制活性和氧自由基吸收能力(ORAC)。结果表明:分子质量大小与菜籽肽的氧自由基吸附能力成负相关;<1kD的组分具有最大的ACE抑制活性(抑制率为(83.42±0.35)%)和氧自由基吸附能力;与膜分离组分相比,Alcalase水解物具有最高的肾素抑制活性。研究认为,菜籽蛋白Alcalase水解物及其<1kD的膜分离组分可能作为功能性成分用于降血压相关的功能食品和保健品的开发。     

油菜蜂花粉ACE抑制活性酶解物的制备及分离

采用4 种蛋白酶水解油菜蜂花粉蛋白制备ACE 抑制活性物质,高效液相色谱法测定油菜蜂花粉蛋白水解物对ACE 的抑制率。结果表明：油菜蜂花粉蛋白酶水解物具有ACE 抑制活性,水解物对ACE 的抑制活性差异显著(P ＜ 0.05),其中碱性蛋白酶＞中性蛋白酶＞木瓜蛋白酶＞酸性蛋白酶,碱性蛋白酶水解物的IC50 为0.35mg/mL。4 种蛋白酶水解物经Bio P-2 凝胶分离后,ACE 抑制活性较强的组分主要集中在保留时间70～120min,在此区间碱性蛋白酶水解物分离组分对ACE 的抑制率达到90% 以上,分子质量在376.4～1355D 之间。     

酶解玉米蛋白制备降血压肽的研究

以玉米蛋白粉为原料,选用7种蛋白酶分别进行单一酶和复合酶水解生产玉米蛋白降血压肽,用Cushman紫外分光光度法测定水解液的ACE抑制活性。结果表明,碱性蛋白酶Alcalase2.4L水解液具有最大的ACE抑制率,水解条件优化实验确定最适pH为8.0,温度为55～60℃,底物浓度为2.5%,加酶量为48AU/kg。水解度15.96%时所得水解物对ACE抑制作用最强,IC50为0.125mg/mL。     

苜蓿叶蛋白抗氧化肽水解用酶的筛选研究

研究了中性蛋白酶AS1.398、Neutrase及碱性蛋白酶Alcalase FG2.4L、Proleather FG-F、Protease S水解苜蓿叶蛋白的进程特性,考察了五种蛋白酶水解物及不同DH的Alcalase FG2.4L酶解物对二苯代苦味肼基自由基(DPPH·)清除能力的影响。结果表明,碱性蛋白酶Alcalase FG2.4L是制备苜蓿叶蛋白抗氧化肽的最适水解酶,其DH20的酶解物浓度为1.6mg/ml时对DPPH·清除率达80%以上;其酶解物中相对分子质量小于1000的组分所占比例最高,达到67.86%;酶解物的DH与DPPH·清除率之间不存在线性关系。     

棉籽蛋白ACE抑制肽的酶法制备及其体外稳定性研究

食源性血管紧张素转化酶(angiotensin-I-converting enzyme, ACE)抑制肽因安全、无副作用、易吸收等优点,对防治高血压、提高居民健康水平具有重要作用。利用碱性蛋白酶、复合蛋白酶、风味蛋白酶、木瓜蛋白酶和菠萝蛋白酶水解棉籽蛋白制备ACE抑制肽,通过单因素实验优化水解条件,分离纯化水解物并鉴定其活性肽段组成,评价水解物的体外消化吸收稳定性。结果表明,棉籽蛋白经复合蛋白酶(1500U/g)在pH值为8.0和55℃下水解5h,蛋白回收率为39.8%,ACE抑制率可达93.7%。棉籽蛋白复合蛋白酶水解物经分离得到5个组分,其中组分4(F4)的ACE抑制活性最高(IC₅₀=220.1μg/mL)。从该组分中发现3条新型ACE抑制肽:VFNNNPQE、LLSQTPRY和VFPGCPET,其中LLSQTPRY的活性最高(IC₅₀=105.2μmol/L)。经人工胃肠液消化和Caco-2细胞单层膜吸收后,棉籽蛋白复合蛋白酶水解物仍具有一定ACE抑制活性,分别为53.8%和20.5%。研究结果表明,棉籽蛋白的复合蛋白酶水解物有望作为一种功能性食品配料,用于开发降压食品。     

鱼鳞明胶ACE抑制肽的制备及其活性研究

利用Alcalase 2.4L酶解鱼鳞明胶制备具有血管紧张素转化酶(ACE)抑制活性的降血压肽,通过超滤处理富集得到具有较高活性的ACE抑制肽,并对该组分进行分子量分布、氨基酸组成分析及抗消化性研究。结果表明:水解明胶6 h所得水解物的ACE抑制活性最高,其IC50为0.56 mg/mL,水解度为15.54%;超滤膜处理分离后,分子量小于5 kDa的多肽组分Ⅱ的ACE抑制活性最高,其回收率达90%以上;多肽中对ACE抑制活性贡献大的脯氨酸、羟脯氨酸、色氨酸等疏水性氨基酸的保存率高;体外消化实验显示,该抑制肽在胃肠道消化酶作用下能保持较好的ACE抑制活性。     

乙醇-水相中酪蛋白水解物修饰及对2个性质的影响

利用Alcalase水解酪蛋白,制备水解度为11.6％、IC5值为42.8 mg/L的酪蛋白水解物.在乙醇-水体系中采用Alcalase催化类蛋白反应修饰酪蛋白水解物,固定反应时间6h,优化得到酶添加量、乙醇体积分数、底物质量浓度、反应温度分别为:8.36 kU/g,56.8％,568 g/L,37.5℃.制备不同反应程度的修饰产物,评估其ACE抑制活性及Zn2+螯合能力变化,发现修饰产物的ACE抑制活性得到改善,抑制最高达到62.5％(IC50达到27.7 mg/L),但是与反应程度有关;Zn2+螯合能力则由4.22 mg/g降低至1.97～3.86 mg/g.修饰产物的Zn2+螯合能力与类蛋白反应程度无关,与ACE抑制活性也不存在相关性.     

玉米ACE抑制肽的制备工艺及中试生产

以玉米黄粉为原料,利用Alcalase酶、Protamex酶和Flavourzyme酶酶解制备血管紧张素转换酶(ACE)抑制肽,研究酶解条件、酶解方式对玉米肽ACE抑制活性的影响。同时,在试验的基础上,对100 kg玉米黄粉酶解制备ACE抑制肽进行了中试生产。实验结果表明:单酶水解制备ACE抑制肽的最适酶为Protamex酶,在酶解150 min时水解产物的ACE抑制率为(90.98±0.54)%,水解产物的分子质量集中在10 405.22~300 Da。Flavourzyme酶和Protamex酶的分步水解可进一步提高玉米蛋白的酶解效率和玉米肽对ACE的抑制活性,在先用Flavourzyme酶水解2 h再加入Protamex酶继续水解3 h后,水解产物的ACE抑制率达到(99.35±3.55)%(IC50=0.764 mg/m L),水解产物的分子质量集中在8 439.49~185.2 Da。采用双酶分步水解方式水解100 kg玉米黄粉时,肽粉得率为27%,ACE抑制率为(56.70±0.86)%(1 mg/m L)。     

高粱碱溶蛋白ACE抑制肽的制备及其稳定性研究

以高粱为原料,通过碱法提取制备高粱碱溶蛋白,利用不同蛋白酶对其进行酶解,结果表明Alcalase碱性蛋白酶水解高粱蛋白得到的水解产物水解度和血管紧张素转化酶(ACE)抑制率最高。在此基础上进一步考察了碱性蛋白酶酶量、pH值、温度、反应时间这4个因素对水解产物ACE抑制率的影响,并通过响应面实验优化酶解条件,得到Alcalase碱性蛋白酶水解高粱碱溶蛋白制备ACE抑制肽最优工艺为:酶解温度55.5℃,酶解时间1.68 h,pH值7.95,酶量2 360 U/g,此条件下实测ACE抑制率达到75.98%,该ACE抑制肽具有良好的热稳定性和酸碱稳定性,并且在体外经胃肠道酶系消化酶解后,依然能保持良好的抑制活性。     

小米米糠蛋白水解物及其膜分离组分的降血压相关活性研究

植物源蛋白肽具有较好的抗氧化和降血压活性,研究采用蛋白酶Alcalase水解小米米糠分离蛋白(MBPI)获得小米米糠蛋白水解物(MBPH),经膜分离技术得到成4种不同分子质量大小的多肽组分。通过氧自由基吸附能力(ORAC)、血管紧张素转化酶(ACE)抑制活性、肾素(renin)抑制活性和体内降血压活性,评价了小米米糠蛋白水解物及其不同分子质量组分抗氧化及降血压活性,鉴定了1 ku组分多肽的氨基酸序列。结果显示,低分子质量小米米糠蛋白水解物具有更好的氧自由基吸附能力和降血压活性,1 ku组分的ORAC值为1 455.41μmol TE/mg,ACE抑制率分为73.667%,肾素抑制率为74%,且在灌胃6 h后降低SHRs的收缩压约37.8 mm Hg;1 ku组分中鉴定出7个小肽序列VALVR、VLER、VVRP、WVGK、FGPK、VLLF和LFGK。研究认为小米米糠蛋白水解物,尤其是1 ku肽组分可能作为功能性成分用于降血压相关的功能食品和保健品的开发。     

酶法生产大豆蛋白ACE抑制肽的研究

研究了Alcalase碱性蛋白酶、Neutrase中性蛋白酶、Protames复合蛋白酶、Flavourzyme风味蛋白酶对大豆分离蛋白的水解效果和ACE(血管紧张素转化酶)的抑制活性。水解能力用pH-start法检测,水解度大小依次为:Alcalase碱性蛋白酶>Protames复合蛋白酶>Neutrase中性蛋白酶>Flavourzyme风味蛋白酶;ACE抑制活性用高效液相法检测,ACE抑制率强弱依次为:Alcalase碱性蛋白酶>Flavourzyme风味蛋白酶>Protames复合蛋白酶>Neutrase中性蛋白酶。综合考虑,选定Alcalase碱性蛋白酶为生产大豆ACE抑制肽的最适酶,并对其酶解条件进行了优化,确定生产大豆ACE抑制肽的最佳条件为:温度60℃、pH8.0、[S]=4%、[E]/[S]=4%,这时的水解度为14.4%。     

螺蛳腹足肌的酶解工艺

以螺蛳的腹足肌部分为研究对象，比较了几种酶对螺蛳蛋白的作用效果，选择了一种新型酶Proleather FG-F。以水解度和蛋白质得率为指标采用响应面分析法对酶解工艺进行了优化，对酶解产物的相对分子质量分布范围、游离氨基酸含量及ACE酶抑制活性等进行了分析和比较。     

黑豆蛋白质酶水解物体外抗氧化活性的研究

采用Alcalase、Neutrase和Flavourzyme蛋白酶水解2种不同类型的黑豆蛋白,在其最适水解条件下,通过单酶水解和分阶段多酶复合水解方式制备黑豆蛋白水解物,利用邻苯三酚自氧化法测定比较其体外抗氧化活性.结果表明:在水解度相近的情况下,早熟大粒黑豆蛋白的Alcalase单酶水解物的抗氧化活性高于晚熟小粒黑豆蛋白;在水解时间相同的情况下,黑豆蛋白的Alcalase单酶水解物的抗氧化活性高于Neutrase和Flavourzyme蛋白酶;Alcalase和Neutrase分阶段水解90 min高于Alcalase单酶水解4 h的黑豆蛋白水解物的抗氧化活性;试验获得的具有较高抗氧化性的质量分数为2%的黑豆蛋白酶水解物,对邻苯三酚自氧化的抑制率与0.01%的维生素C水溶液相近.     

酪蛋白类蛋白物的溶剂分级和酶水解对ACE抑制活性的影响

利用响应面法优化类蛋白反应条件修饰酪蛋白水解物制备酪蛋白类蛋白物.酪蛋白类蛋白物的ACE抑制活性高于酪蛋白水解物,IC50值从52.6 mg/L降低到14.9 mg/L.利用乙醇-水混合溶剂对酪蛋白水解物和类蛋白物进行分级,结果表明,极性最低的溶剂得到的上清液部分活性较高,而沉淀部分活性较低.4种蛋白酶水解酪蛋白类蛋白物的分级产物,导致活性下降,除碱性蛋白酶外,木瓜蛋白酶、胃蛋白酶和胰蛋白酶的水解产物ACE抑制活性为31.5％～46.8％,但是仍然高于酪蛋白水解物的ACE抑制活性(27.8％),表明类蛋白反应提高了酪蛋白水解物对一些蛋白酶的体外抵抗能力.     

体外模拟消化对大米谷蛋白结构及水解产物生物活性的影响

通过体外模拟消化,研究不同消化时间下谷蛋白结构与抗氧化和血管紧张素转换酶（angiotensin-converting enzyme,ACE）抑制活性的关系。利用内源荧光光谱和傅里叶变换红光谱测定谷蛋白水解过程结构变化。通过测定水解产物抗氧化能力和ACE抑制率表征酶解产物的活性,利用四极杆串联飞行时间质谱鉴定具有抗氧化和ACE抑制活性的组分。结果表明,谷蛋白水解度在2 h内快速增加,随后趋于平缓。水解导致谷蛋白λmax红移且荧光强度增强,α-螺旋含量显著增加、β-折叠相对含量显著降低（P＜0.05）。α-螺旋结构含量的增加降低了水解物的抗氧化能力,谷蛋白β-折叠结构含量的减少能增强水解物的ACE抑制能力。水解0.5 h抗氧化能力最强,1,1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基清除率的半抑制浓度（half maximal inhibitory concentration,IC50）为（1.113±0.015）mg/mL,·OH清除率IC50为（0.518±0.053）mg/mL、Fe2＋螯合能力IC50为（0.678±0.019）mg/mL。ACE抑制率先增加后降低,在2 h达到最高,IC50为（0.693±0.011）mg/mL。水解度的增加降低了水解物抗氧化能力,但增强了ACE抑制能力。水解物在0.5～2 h抗氧化能力和ACE抑制能力呈现负相关关系,随后抗氧化能力和ACE抑制能力均下降。水解物抗氧化肽和ACE抑制肽分子质量均小于2 kDa,筛选出以VEGGFLFIV为代表抗氧化活性多肽,且ACE抑制肽大部分N-端是疏水性氨基酸或者碱性氨基酸。因此,通过控制谷蛋白体外消化水解度,可制备最优的大米谷蛋白抗氧化或降血压相关功能性产品。     

燕麦麸ACE抑制肽酶解工艺优化及其稳定性研究

为了充分利用燕麦蛋白资源,增加燕麦加工产品附加值,本课题以燕麦加工副产物燕麦麸为实验原料,采用酶解技术制备燕麦麸ACE(Angiotensin Converting Enzyme)抑制肽。通过超微粉碎、有机溶剂萃取、酶解等处理技术,打破原料致密的结构,去除其中的淀粉、脂类等可能影响到肽的制备与纯化的物质。在酶的筛选试验中,以酶解产物ACE抑制率和水解度为指标选出最佳水解用酶为Alcalase 2.4L碱性蛋白酶。对最佳酶解工艺和肽的稳定性进行了研究。结果表明最佳酶解工艺参数为:加酶量4500u/g、pH 8.1、温度56℃、底物浓度7.5%,得到的ACE抑制率抑制率为70.67%。IC50为0.83mg/mL。最后,研究了燕麦麸ACE抑制肽的消化稳定性,结果显示模拟消化处理后肽的活性并无明显变化,稳定性良好。