蚕虫草与有关虫草活性成分检测比较

通过测定蚕虫草、蚕蛹草和冬虫夏草的腺苷、虫草素、虫草多糖和虫草酸,发现以家蚕为寄主的蚕虫草,虫草素的含量高达12.59mg/g,是同一菌种蚕蛹草的4.45倍,同时虫草多糖是蚕蛹草的2.68倍;与冬虫夏草相比,除虫草素是其数百倍外,腺苷也高达4倍之多,是一种很有开发前景的虫草新资源。     

栽培基质及碳源对蛹虫草子实体中主要有效成分的影响

主要通过改变蛹虫草固体栽培基质(大米、小米、高粱米、玉米、小麦)和添加不同的碳源(葡萄糖、麦芽糖、半乳糖、蔗糖、乳糖、甘露醇),探索这2个因素对蛹虫草子实体中腺苷、虫草素、SOD酶、多糖等的影响。综合分析如上有效成分含量值,据此选取葡萄糖为最佳碳源(腺苷含量为169.5 mg/100 g,虫草素含量为149.0 mg/100 g,SOD活力值为5568.0 U/g,粗多糖含量为2.791 g/100 g),玉米为最佳培养基质(腺苷含量为248.5 mg/100 g,虫草素含量为221.1 mg/100 g,SOD活力值为2325.0 U/g,粗多糖含量为2.774 g/100 g)组合,为蛹虫草保健品中多种有效成分含量的提高提供了理论依据。     

灵芝孢子粉蜂胶复合物对小鼠免疫功能的影响

目的:研究灵芝孢子粉蜂胶复合物对小鼠免疫功能的影响。方法:将雌性昆明鼠随机分成空白对照组和低、中、高剂量组,每组10只,分别灌胃给予蒸馏水、灵芝孢子粉蜂胶75、150和450 mg/kg bw。30 d后测定小鼠体重、免疫脏器指数、碳粒廓清能力、腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞能力、脾淋巴细胞增殖能力、迟发型变态反应(DTH)和血清溶血素水平。结果:与对照组相比,中、高剂量能显著增强小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞能力和脾淋巴细胞增殖能力(p 0.05)、极显著提高小鼠血清溶血素水平和迟发型变态反应和脾淋巴细胞增殖能力(p 0.01),而低剂量能显著(p 0.05)提高小鼠血清溶血素水平。结论:灵芝孢子粉蜂胶复合物具有增强小鼠免疫功能的作用。     

超声-微波-HPLC联合提取检测CS-4菌丝体中的腺苷类物质

北冬虫夏草(CS-4)富含虫草多糖、虫草酸、腺苷类物质等多种生物活性成分,是野生冬虫夏草最佳的替代品,试验建立了一种超声-微波联合提取法,辅助HPLC测定CS-4菌丝体冻干粉中腺苷类活性成分。结果表明:用料液比1︰300(g/m L)的蒸馏水超声提取15 min,440 W微波提取6 min,腺苷类物质的提取率高达61.24%。经HPLC检测,对菌丝体冻干粉中5种生物活性成分(胞苷、尿嘧啶、尿苷、腺苷和虫草素)进行了定性定量分析,含量分别为92.54μg/g,305.79μg/g,1.79 mg/g,785.85μg/g和695.64μg/g。     

HPLC法同时测定蛹虫草中虫草素、腺苷和麦角甾醇的含量

建立一种利用高效液相色谱法同时测定蛹虫草中虫草素、腺苷和麦角甾醇含量的方法,并对沈阳、广东、江苏3个产地的蛹虫草进行测定结果的比较。结果表明,虫草素、腺苷和麦角甾醇分别在5μg/mL～65μg/mL、5μg/mL～35μg/mL和25μg/mL～300μg/mL范围内线性关系良好,江苏的虫草素含量最高,为1.3 mg/g,广东的含量最低,为0.5 mg/g,广东的腺苷和麦角甾醇含量最高分别为1.9、5.8 mg/g。不同产地蛹虫草中的腺苷、虫草素和麦角甾醇的含量差异较大;该方法准确性高,重复性好,适用于蛹虫草中腺苷、虫草素和麦角甾醇的含量测定,为其质量评价提供参考。     

人工培养的兰坪虫草子实体中核苷类成分研究

兰坪虫草(Ophiocordyceps lanpingensis)产于我国滇西北地区,是一种寄生在钩蝠蛾幼虫上的虫生真菌。本文以四种不同培养基培养的兰坪虫草子实体为原料,采用高效液相色谱法(HPLC)同时检测10种核苷类成分(尿嘧啶、尿苷、2'-脱氧尿苷、肌苷、鸟苷、腺嘌呤、胸腺、腺苷、2'-脱氧腺苷、虫草素),并将其与野生冬虫夏草(Ophiocordyceps sinensis)、野生兰坪虫草进行对比分析,初步评估人工培养兰坪虫草子实体的质量。结果表明,以大米和蚕蛹粉为主要原料的培养基所培养的兰坪虫草子实体生长时间平均为40 d,周期短于其他三种培养方式;且其腺苷、总核苷含量分别为2744μg/g和8015μg/g,明显高于野生冬虫夏草、野生兰坪虫草,有较好的质量水平。因此,人工培养的兰坪虫草子实体具有重要的研究价值和应用潜力。     

鱿鱼墨黑色素的免疫调节作用

探讨鱿鱼墨黑色素对小鼠免疫机能的调节作用。用不同剂量的鱿鱼墨黑色素灌胃氢化可的松所致免疫机能低下模型小鼠28d,分别检测正常及模型小鼠的脾和胸腺指数,血清溶血素水平(HC50),小鼠迟发性变态反应(DTH)及脾淋巴细胞增殖能力,小鼠NK细胞活性、碳廓清指数、腹腔巨噬细胞吞噬率及吞噬指数。结果表明,鱿鱼墨黑色素可显著提高免疫低下模型小鼠的脾及胸腺指数、血清溶血素水平(HC50),小鼠迟发性变态反应及脾淋巴细胞增殖能力,显著促进小鼠NK细胞活性及巨噬细胞吞噬能力。提示鱿鱼墨黑色素对机体特异性及非特异性免疫机能具有显著调节作用,且中、高剂量组效果更明显。     

山药多糖对动物机体免疫调节作用的Meta分析

为综合评价山药多糖对动物机体免疫调节作用,检索PubMed、中国知网、维普、万方、Springer等数据库相关文献。采用间接比较法,通过阅读文献中的摘要和讨论来进行人工筛选相关文献。利用RevMan 5.3软件对纳入文献中的研究进行Meta分析。在所纳入的12篇文献中,通过对小鼠碳廓清能力、脾脏增长指数、小鼠血清IL-2含量、小鼠淋巴细胞增殖能力、胸腺增长指数、小鼠血清溶血素等6项免疫指标的Meta分析发现：小鼠碳廓清能力、脾脏增长指数、血清IL-2含量等免疫指标的Meta分析结果与对照组相比,差异具有统计学意义（p<0.05）;小鼠免疫淋巴细胞增殖能力、胸腺增长指数、小鼠血清溶血素免疫指标与对照组相比,差异不具有统计学意义（p>0.05）。敏感性分析显示该文结果具有一定的可靠性和精确性;所纳入的文献除碳廓清能力指数研究外都具有一定的发表偏倚性。上述结果表明,山药多糖在一定程度上能够增强动物的免疫,但还需要大量的研究数据支持。     

培养基质对蛹虫草中虫草酸及核苷类物质的影响

采用燕麦、小米、大麦、大米4种培养基质固体培养获得蛹虫草子座,比较子座中虫草酸、虫草素、腺苷、尿苷、鸟苷及胸苷含量的差异。采用比色法测定虫草酸含量,采用高效液相法测定核苷类物质含量。结果表明:培养基质对蛹虫草代谢产物合成的影响各有不同,小米培养的子座虫草酸(9 000μg/g)及虫草素(9 531.0μg/g)含量最高,大米培养的子座腺苷(818.9μg/g)和尿苷(2 028.4μg/g)含量最高,大麦培养的子座鸟苷(1 105.3μg/g)含量最高。     

蛹虫草口含片制备工艺及活性评价研究

为改善蛹虫草提取物制品的口感及药效,研究蛹虫草口含片的加工工艺及其活性评价。利用超高压协同酶解所得蛹虫草提取物作为原料,以感官评定为主要指标确定最佳配方组合,并对产品进行质量评价及免疫学实验。其中蛹虫草提取物添加量为10%,淀粉、麦芽糊精质量添加比例为1∶1时口感最佳。考察片剂的水分、灰分、硬度、片重差异等质量指标,均符合药典对口含片的要求。另外分别按低中高剂量将蛹虫草口含片喂食给小鼠,考察小鼠的脏器/体重比值、碳粒廓清能力及脾淋巴细胞增殖能力,与空白组对比,喂食蛹虫草提取物口含片可以提高小鼠巨噬细胞吞噬指数、T淋巴细胞转化率和B淋巴细胞转化率,说明超高压协同酶解蛹虫草提取物口含片具有增强免疫的作用。     

高效液相色谱法测定3 种蛹虫草中虫草素及比较分析

对3 种蛹虫草中虫草素含量进行高效液相色谱法测定并比较,以查看不同地区来源的蛹虫草中虫草素含量
的区别,为选育高含量虫草素蛹虫草菌种及改变其培养条件指明方向。首先采用正交试验研究虫草素的提取条件,
获得最适提取工艺,即料液比1∶80、提取时间5 h、提取温度70 ℃,在此条件下虫草素的得率达0.604%（以湖北地区
的蛹虫草作为原料）。然后在此条件下分别对湖北地区（A）、云南地区（B）和本实验室培养（C）的蛹虫草中提
取虫草素并进行测定,结果表明：样品C的虫草素含量远高于A（6.041 mg/g）和B（7.606 mg/g）,为26.071 mg/g。
结果显示,不同产地的蛹虫草中虫草素含量有一定区别,这可能与培养蛹虫草所用的菌种和培养条件差异有关。本
研究筛选出来的菌种以及获得的培养方法,对后续研究补硒栽培对蛹虫草中的活性成分虫草素含量的影响提供了技
术基础。     

不同添加物对青稞蛹虫草子实体中虫草菌素产量的影响

研究不同物质及添加量对青稞蛹虫草子实体中虫草菌素含量的影响,并对影响虫草菌素产量的培养基配方进行优化。结果表明,蔗糖、蚕蛹粉、磷酸二氢钾、链霉素分别作为碳源、氮源、无机盐和生长因子有利于青稞蛹虫草子实体虫草菌素的合成、累积,且作用显著。通过正交试验确定不同物质对青稞蛹虫草子实体中虫草菌素含量影响的主次因素为蔗糖＞蚕蛹粉＞磷酸二氢钾＞链霉素＞硫酸镁＞酵母膏,各物质最佳添加量为蔗糖30 g/L,蚕蛹粉7.5 g/L,磷酸二氢钾1.0 g/L,链霉素2.0 g/L,硫酸镁1.5 g/L,酵母膏2.5 g/L。在优化配方条件下,青稞蛹虫草子实体中虫草菌素含量可达8 215 mg/kg。     

不同产地蛹虫草鲜干品核苷类含量测定

运用液相色谱法分别对山东、安徽、云南、湖北四种产地和烘干、冻干、新鲜三种加工后的蛹虫草中腺苷、虫草素、N-6-2羟乙基腺苷进行比较,考察不同地区、不同加工方法的蛹虫草核苷物质含量及种类差别,以期找到蛹虫草的较好来源及其加工方法。结果表明:热水提取法的效果明显比超声提取法好。云南产地蛹虫草中腺苷、虫草素、N-6-2羟乙基腺苷含量最高,分别为0.19,0.21和0.24 mg/g。新鲜蛹虫草超声水提后腺苷、虫草素、N-6-2羟乙基腺苷含量明显要比冻干、烘干含量高。     

蛹虫草胞外多糖的制备、结构分析及其免疫活性

本实验选择蛹虫草菌株CICC 14014液态发酵培养，提取蛹虫草胞外多糖，测定其理化性质及结构，并对其免疫活性进行研究。采用DEAE-Sephacel阴离子交换柱联合Sephadex G-200葡聚糖凝胶柱纯化蛹虫草胞外多糖；利用高效液相色谱法测定多糖分子质量，利用傅里叶变换红外光谱鉴定多糖结构；选用BALB/c小鼠构建免疫损伤模型，考察其体质量及免疫器官指数变化情况，观察其脾脏组织切片形态，计算其T、B细胞增殖率，测定其血清细胞因子及免疫球蛋白质量浓度。结果表明，蛹虫草发酵液中多糖质量浓度为3.15 mg/mL，经分离纯化后所得单一多糖分子质量为3.67 kDa，纯度可达86.13%。动物实验结果表明，蛹虫草胞外多糖可明显提高免疫器官指数，能够有效促使T细胞（低剂量时）、B细胞增殖和免疫球蛋白（immunoglobulin，Ig）G、IgA、IgM、肿瘤坏死因子-α、白细胞介素（interleukin，IL）-6、IL-2、干扰素（interferon，IFN）-γ的分泌，免疫调节效果显著。研究结果表明蛹虫草胞外多糖可修复环磷酰胺导致的BALB/c小鼠免疫功能损伤，为开发蛹虫草发酵液资源建立了部分理论支撑。     

蛹虫草发酵乳饮料对小鼠免疫力的影响

目的:研究蛹虫草发酵乳饮料对小鼠免疫力的影响。方法:分别以不同剂量的蛹虫草发酵乳饮料给小鼠连续灌胃,测定各项指标。结果:蛹虫草发酵乳饮料可明显提高小鼠脾脏和胸腺指数,促进吞噬细胞的吞噬活性,并且饮料对小鼠产生任何没有毒副作用。结论:蛹虫草发酵乳饮料具有增强小鼠免疫力的功能。     

冬虫夏草与蛹虫草融合株的原生质体诱变育种

以冬虫夏草与蛹虫草融合株为研究材料,对其原生质体进行紫外诱变,筛选优质高产的新型菌株。得到了高产菌株Y-90,虫草酸产量是出发菌株的1.80 倍,高产菌株YP-42,虫草素产量是出发菌株的1.33 倍。采用随机扩增多态性DNA（random amplified polymorphic DNA,RAPD）分子标记技术和核糖体rDNA内部转录间隔区（internaltranscribed spacer,ITS）序列分析技术对突变株的遗传变异情况进行分析。结果表明突变株的ITS序列并没有发生变化。RAPD结果显示突变株的扩增片段与亲本菌株不同,说明发生了基因突变,其高产性状是可遗传的性状,可以将其用于进一步的育种研究。     

人工培育蝉花虫草的抗肿瘤活性

以天然蝉花虫草生药为对照,以中国仓鼠卵巢肿瘤（Chinese hamster ovary,CHO）细胞株为模型,采用刃天青染色法检测人工培育蝉花虫草的抗肿瘤活性。结果表明：人工培育蝉花虫草和天然蝉花虫草生药都具有抗肿瘤活性,且活性成分均为中等极性化合物。对人工培育蝉花虫草中的抗肿瘤活性成分进行分离制备,得到两种化合物,命名为化合物1和化合物2。化合物1经鉴定为虫草素,化合物2经纯度验证为纯品,活性验证结果发现当其质量浓度为50 μg/mL时,对CHO细胞抑制率高达（94.55±2.33）%。     

响应面法优化蛹虫草固态发酵产物虫草素与腺苷综合提取工艺

以大米、啤酒糟共培养的蛹虫草固态发酵产物为原料,采用浸提法综合提取虫草素与腺苷,并利用响应面法优化提取条件。通过单因素试验考察提取时间、乙醇溶液体积分数、液料比和提取温度对综合提取虫草素与腺苷得率的影响。在单因素试验基础上,利用Box-Behnken试验设计,对浸提工艺中各影响因素进行优化。结果表明,浸提法综合提取虫草素与腺苷的最适工艺条件为纯水提取、提取温度45?℃、液料比22∶1（mL/g）、提取时间87?min,在该条件下虫草素与腺苷的综合得率为2.491‰,与模型理论预测值相近,说明该模型回归性良好,试验的拟合程度高。蛹虫草固态发酵产物中富含虫草素、腺苷,具有一定开发价值。     

蛹虫草虫草素合成代谢网络及其关键节点的研究进展

虫草素（Cordycepin）是虫草属（Cordyceps）真菌产生的核心高附加值次级代谢产物之一。与其他工业菌种相比,蛹虫草在腺苷结构类似物（如虫草素）合成方面有天然的代谢通量优势。近年,随着组学分析技术和蛹虫草基因编辑技术的发展,蛹虫草虫草素合成代谢网络,尤其是关键的底物合成途径得到了完整的解析。因此,该综述对目前已知的蛹虫草虫草素合成代谢网络进行了模块化梳理,将其划分为中心碳代谢途径、单磷酸肌苷（Inosinate,IMP）途径和虫草素底物合成途径,并分析了前体物质组成和多个分散途径、关键节点对虫草素合成的影响,系统阐述了IMP物质的合成与流向,佐证了IMP的合成与代谢是虫草素合成的关键节点,为未来通过代谢工程与合成生物学策略优化蛹虫草虫草素代谢网络、构建稳定高产虫草素的蛹虫草菌株提供相对详实的背景参考。