蛹、米虫草多糖含量及抗氧化活性比较研究

旨在研究不同来源北虫草子实体多糖的含量差异以及分级醇沉各组分的抗氧化活性差异。通过热水浸提、分级醇沉法分别获得蛹虫草多糖(Cordyceps militaris polysaccharide,CMP)、米虫草多糖(Cordyceps oryzae polysaccharide,COP);以DPPH自由基清除率、羟基自由基(·OH)清除率和铁离子还原能力法(ferric reducing antioxidant power,FRAP)评价两种多糖的体外抗氧化活性;构建H_2O_2致PC12细胞氧化损伤模型,比较两种虫草多糖对氧化损伤的PC12细胞的保护作用。不同乙醇浓度沉淀获得的虫草多糖中,米虫草多糖提取率及含量高于蛹虫草多糖;米虫草多糖对DPPH自由基、·OH清除率分别可达66.43%、69.22%,蛹虫草多糖可达73.69%、73.50%;FRAP法测得蛹虫草多糖抗氧化能力较强。细胞试验结果表明,氧化损伤的PC12细胞经两种多糖处理后细胞存活率皆有不同程度的提升,呈浓度依赖性,蛹虫草多糖组细胞存活率最高可达90.45%,米虫草多糖组细胞存活率最高可达82.62%。以蚕蛹为培养基的蛹虫草在多糖提取率及含量方面低于以大米为培养基的米虫草,但其多糖对自由基清除能力及PC12细胞保护作用优于米虫草多糖,具有较好的抗氧化能力。     

人工蛹虫草子实体多糖分离最佳工艺研究

蛹虫草又称北冬虫夏草，作为蛹虫草的活性成分之一的蛹虫草多糖，对小鼠的特异性、非特异性、体液免疫及红细胞免疫均有显著增强作用。为了更好地进行蛹虫草多糖活性的研究，本文对其最佳分离条件进行了深入研究。     

虫草与富硒虫草多糖的体外抗氧化活性

采用Fenton法和邻苯三酚自氧化法测定虫草和富硒虫草多糖对.OH、O2-.和H2O2的清除率。结果表明:虫草多糖对O-2.和H2O2的清除能力依次为富硒虫草胞外多糖>富硒虫草胞内多糖>虫草胞外多糖>虫草胞内多糖,而对.OH的清除能力依次为:富硒虫草胞外多糖>虫草胞外多糖>富硒虫草胞内多糖>虫草胞内多糖;当100mg/L多糖溶液添加量分别高于80、40、90μL时,各组多糖对.OH、O2-.和H2O2 3种自由基的抑制率均可高于50%。     

虫草多糖啤酒的制备试验

本文研究了虫草多糖啤酒的制备工艺,先将虫草发酵滤液减压浓缩、过滤得湿多糖,再经减压干燥得到虫草多糖;以30％小麦麦芽、70％大麦麦芽为原料、料液比1：2．5进行糖化、过滤、煮沸,煮沸过程中添加酒花,随后,将麦汁静置、冷却至18℃时接入10％上面发酵酵母泥,当发酵液残糖降低至1．2°P时,停止发酵进行后贮,将制备好的虫草多糖以1％的比例添加到啤酒中,即得具有保健功能的虫草多糖啤酒。     

蛹虫草高产胞外虫草素和虫草多糖的诱变育种

通过诱变获得高产胞外虫草素和虫草多糖的蛹虫草菌株.采用紫外线诱变(UV)、化学诱变(LiCl)、复合诱变(UV-LiCl) 3种方式对蛹虫草孢子进行诱变;发酵检测存活菌株的胞外虫草素和虫草多糖的含量.结果:以胞外虫草素为指标,3种诱变方式的最大正突变率分别为化学突变(29.2％)＞紫外突变(28.6％)＞复合诱变(26.5％);以胞外多糖为指标,最大正突变率分别为紫外诱变(35.7％)＞复合诱变(33.3％)＞化学诱变(27.0％).紫外诱变突变株Z-5-1胞外虫草素产量达0.842g/L,比出发菌株高311％;紫外诱变突变株Z-4-7胞外虫草多糖产量达5.250g/L,比出发菌株高148％.在连续培养5代后,仍具有较好的遗传稳定性.紫外诱变能获得较高的蛹虫草正突变率,同时能获得高产虫草素、虫草多糖的突变株.     

虫草多糖及与其他多糖组合物的降糖活性研究

目的:研究6种不同配方的虫草多糖组合物的降糖活性。方法:建立糖尿病小鼠模型,分别给药不同剂量虫草多糖。筛选虫草多糖最优剂量,与地黄、树舌灵芝、仙人掌、青钱柳、毛酸浆、马齿苋的多糖提取物配伍成6种虫草多糖组合物。以血糖值、体特征量、糖耐受量、α-葡萄糖苷酶活性、SOD活性和MDA含量为指标,筛选出最优虫草多糖组合物。结果:添加6种多糖的虫草多糖组比单用虫草多糖组各项指标优异。最优虫草多糖组合物为:虫草多糖地黄多糖组(200mg·kg-1+150mg·kg-1)和虫草多糖毛酸浆多糖组(200mg·kg-1+150mg·kg-1)。对于STZ糖尿病小鼠,能够明显降低血糖,改善体特征量,增强糖耐受作用,降低α-葡萄糖苷酶活性,并明显升高超氧化物歧化酶(SOD)活性,降低丙二醛(MDA)含量,具有较好的抗氧化活性。结论:两组虫草多糖组合物有望成为有效的降糖食品主要成分。     

戴氏虫草产多糖的固体发酵工艺优化

以大米为原料进行戴氏虫草真菌发酵，通过优化发酵条件提高戴氏虫草多糖含量。采用单因素实验和多因素实验优化戴氏虫草产多糖的固体发酵条件。Plackett-Burman试验结果表明，影响戴氏虫草多糖含量的主要因素是发酵温度、接种量和料水比。最陡爬坡试验和Box-Behnken试验得出产戴氏虫草多糖的最适条件为：发酵温度25℃，接种量8%，料水比（g/mL）=1:1.5，基质重量10 g，发酵时间5 d，得到的戴氏虫草多糖含量为5.31%±0.11%，与理论值的误差为0.93%±1.8%。本文旨在为戴氏虫草多糖的工业化生产提供理论依据，同时为其它虫草真菌固体发酵生产虫草多糖提供理论参考。     

蛹虫草多糖对α-葡萄糖苷酶活性的抑制研究

本文以蛹虫草子实体为原料,通过建立a-葡萄糖苷酶抑制剂体外验证模型,以麦芽糖作为反应底物,阿卡波糖作为阳性对照,利用体外酶促反应方法,对通过水提、脱色、醇沉、除蛋白及色谱柱纯化得到的不同纯度的蛹虫草多糖的α-葡萄糖苷酶抑制活性进行了验证。结果表明,通过逐步的酶促反应实验,确定蛹虫草中对α-葡萄糖苷酶活性具有较显著抑制作用的功能成分为多糖,并且随着多糖纯度的不断提高其抑制率随之提高。通过对经色谱层析柱纯化后蛹虫草多糖进一步的酶促反应实验研究,表明蛹虫草多糖对α-葡萄糖苷酶的抑制率随多糖浓度的提高而提高,说明蛹虫草多糖的抑制效应存在一定的剂量依赖性,纯化后的多糖对α-葡萄糖苷酶的半数抑制浓度(IC50)为4.22 mg/m L,呈现出良好的降血糖功能,为今后将蛹虫草开发为降血糖药物及保健品提供了一定的理论依据。     

戴氏虫草多糖的提取工艺优化和抗氧化活性研究

为了研究戴氏虫草多糖的抗氧化活性能力，同时提高戴氏虫草多糖的提取率。采用水浸提法提取戴氏虫草多糖，利用单因素试验和响应面试验探究提取虫草多糖的最优条件，利用羟基自由基法和DPPH自由基法测定多糖的抗氧化能力。在料液比1∶35(g/mL)、浸提温度80℃、浸提时间2 h、乙醇浓度为70%的条件下，戴氏虫草多糖的提取率最高，为5.26%±0.01%；多糖的质量浓度为1.0 mg/mL时，羟基自由基清除率为45.95%,DPPH自由基清除率为60.24%。文章优化了戴氏虫草多糖的提取条件，为其它虫草多糖的提取提供了理论参考，其结果表明戴氏虫草多糖具有较强的抗氧化活性能力，为进一步虫草多糖的功能研究奠定了基础。     

冬虫夏草多糖组分研究及药理实验

虫草多糖是冬虫夏草中的主要有效成分。对虫草菌菌种进行了分离纯化及选育,筛选出一株稳定的产生可溶性虫草多糖水平最高的菌株,优化培养基配方,进行了发酵罐中试生产,制订出虫草多糖的提取及精制工艺,采用层析及电泳技术,分析了虫草多糖的成分及结构。对虫草多糖进行了毒性及药理研究,结果显示属于无毒物质,并且具有明显的增强免疫和抑制肿瘤的作用。     

虫草花多糖提取工艺优化及其抗氧化特性

采用超声辅助法提取虫草花多糖,在单因素试验的基础上,通过L9（34）正交试验优化了虫草花多糖提取工艺;并就虫草花多糖对羟基自由基（·OH）、1,1-苯基-2-苦肼基（DPPH）自由基的清除作用和还原能力进行研究。结果表明：虫草花多糖最佳提取工艺条件为超声功率300 W,液料比30∶1（mL∶g）,超声时间30 min,超声温度45 ℃。在此优化条件下,多糖的平均提取率为3.88%。抗氧化活性试验结果表明,虫草花多糖质量浓度在2.9～14.7 mg/L范围内,随着虫草花多糖质量浓度的增加,其OH、DPPH自由基清除能力及还原能力均逐渐增强,虫草花多糖质量浓度为14.7 mg/L时,对·OH和DPPH·清除率分别达到44.39%和56.34%,说明虫草花多糖具有较强的抗氧化活性。     

蛹虫草培养基多糖的超声波提取及抗氧化性研究

研究用超声波提取蛹虫草培养基中粗多糖的工艺条件,并比较了该多糖与蛹虫草子实体多糖的抗氧化性。结果表明:在料液比1∶30(质量比),乙醇用量15 mL,超声波功率70 W,超声时间90 min的条件下,蛹虫草培养基中多糖含量为3.30%。在0.2 mg/mL～1.0 mg/mL浓度范围内蛹虫草培养基多糖与子实体多糖抗氧化能力相似,且具有一定的量效关系。红外显示两种多糖结构相同。     

关于蛹虫草菌多糖发酵及培养基的研究

研究了蛹虫草胞外多糖发酵过程，分析不同因素对胞外多糖得率的影响，获得了比较适宜的培养基组成和发酵条件。蛹虫草胞外多糖优化发酵培养基组成为：蔗糖12％，玉米浆2％，酵母膏2％，硝酸钾0．45％；发酵培养条件为：pH值6．5，温度20℃。此条件下蛹虫草胞外多糖得率为1．188g／100mL，菌丝体干重为1．221g／100mL。     

功能因子冬虫夏草多糖的研究开发

本文对冬虫夏草多糖的组分组成、理化性质、结构连接特性、毒理学性质及药理活性进行了研究,并确定了可作为保健食品中功能因子的虫草多糖的生产工艺。     

蛹虫草多糖提取纯化工艺研究

为能更好地产业化开发利用蛹虫草,对蛹虫草多糖的提取纯化工艺进行研究。通过正交试验探讨了料液比、提取温度和提取时间对多糖提取率的影响,在此基础上通过分析不同的醇沉和去蛋白纯化条件,确定蛹虫草多糖的最佳制备工艺。结果表明,最佳工艺为先在液料比30∶1(V∶m)、提取温度70℃和提取时间4h下提取多糖,然后在浓缩液浓度为14%、乙醇溶液浓度为80%下进行醇沉,再调节多糖溶液的pH=3并加入4%的硫酸锌。整个工艺多糖提取率为8.97%,纯度高达68.9%,有良好的去杂纯化效果且多糖损失较小。该研究为产业化生产蛹虫草多糖提供了基础数据。     

巴西虫草胞内多糖培养参数的优化研究

为了提高巴西虫草深层液体发酵胞内多糖的产量,本研究采用二次正交旋转组合设计方法,研究了接种量、培养时间、装液量和种子培养时间这四个因素对巴西虫草胞内多糖发酵的影响;建立了二次回归模型,并使用DPS软件进行了条件寻优,确定了巴西虫草胞内多糖发酵的最优工艺参数。结果表明,所得回归方程达到极显著水平,无失拟因素存在。最优发酵工艺为接种量14%、培养时间84h、装液量45m L、种子培养时间60h,在此条件下虫草多糖的产量为7.50mg/m L,较优化前提高了12.4%。在优化条件下,进行三次验证实验,实验值与模型预测值基本符合,说明了二次正交旋转组合设计预测结果的准确性,证实了该方法可用于巴西虫草胞内多糖深层液体发酵的工艺参数优化,为其工业化生产奠定了基础。     

蛹虫草胞外多糖的制备、结构分析及其免疫活性

本实验选择蛹虫草菌株CICC 14014液态发酵培养，提取蛹虫草胞外多糖，测定其理化性质及结构，并对其免疫活性进行研究。采用DEAE-Sephacel阴离子交换柱联合Sephadex G-200葡聚糖凝胶柱纯化蛹虫草胞外多糖；利用高效液相色谱法测定多糖分子质量，利用傅里叶变换红外光谱鉴定多糖结构；选用BALB/c小鼠构建免疫损伤模型，考察其体质量及免疫器官指数变化情况，观察其脾脏组织切片形态，计算其T、B细胞增殖率，测定其血清细胞因子及免疫球蛋白质量浓度。结果表明，蛹虫草发酵液中多糖质量浓度为3.15 mg/mL，经分离纯化后所得单一多糖分子质量为3.67 kDa，纯度可达86.13%。动物实验结果表明，蛹虫草胞外多糖可明显提高免疫器官指数，能够有效促使T细胞（低剂量时）、B细胞增殖和免疫球蛋白（immunoglobulin，Ig）G、IgA、IgM、肿瘤坏死因子-α、白细胞介素（interleukin，IL）-6、IL-2、干扰素（interferon，IFN）-γ的分泌，免疫调节效果显著。研究结果表明蛹虫草胞外多糖可修复环磷酰胺导致的BALB/c小鼠免疫功能损伤，为开发蛹虫草发酵液资源建立了部分理论支撑。     

虫草多糖苹果果醋的保健功能评价

目的：虫草多糖与果醋均具有对人体有益的功效,该实验将两者结合,并通过小鼠连续灌胃体内实验,考察虫草多糖果醋抗疲劳、增加免疫力、降血脂和降血糖等方面的功效。方法：首先从蛹虫草子实体中提取虫草多糖。然后以苹果为原料经过酒精发酵和醋酸发酵制备苹果果醋原液,经调配制备苹果果醋。按实验设计添加不同剂量的虫草多糖制备虫草多糖果醋。对成年小鼠进行不同剂量的虫草多糖果醋灌胃后,通过小鼠的负重游泳时间、肝糖原含量和游泳后血乳酸含量测定等判定虫草多糖果醋提高小鼠抗疲劳能力的效果。通过抑制迟发型变态反应和增强碳廓清能力测定判定虫草多糖果醋提高小鼠免疫能力的效果。对成年小鼠在饲喂高脂饲料的同时进行不同剂量的虫草多糖果醋灌胃后,通过血清总胆固醇和甘油三酯水平测定判定虫草多糖果醋对高血脂的预防效果。对成年小鼠高血糖模型进行不同剂量的虫草多糖果醋灌胃后,通过测定血糖值判定虫草多糖果醋的降血糖效果。结果：通过抗疲劳实验研究发现,虫草多糖果醋组与空白对照组相比小鼠的负重游泳时间显著提高,肝糖原含量显著升高,游泳后血乳酸含量显著降低。通过增强免疫力实验研究发现,虫草多糖果醋组与空白对照组相比,耳肿胀度明显下降,廓清指数和吞噬指数显著提高。通过辅助降血脂实验发现,虫草多糖果醋组与饲喂高脂饲料的空白对照组相比,血清总胆固醇和甘油三酯水平显著降低,小鼠体质量显著低于空白对照。通过辅助降血糖实验发现,虫草多糖果醋组与空白对照组相比,血糖水平显著降低。并且各种生物活性实验结果均与虫草多糖果醋中虫草多糖的剂量成正比。虫草多糖果醋的功效要好于虫草多糖和果醋单独使用的功效。结论：虫草多糖果醋具有缓解体力疲劳、增强免疫力、辅助降血脂和辅助降血糖的保健功能。     

北虫草发酵过程中营养成分及代谢物变化研究

研究了北虫草摇瓶发酵过程中培养基营养成分及其代谢物质变化情况,测定了培养基的pH、总糖、还原糖和可溶性蛋白及游离氨基酸等成分含量,探明了北虫草菌体生长、多糖及虫草素生成规律。结果显示:随发酵时间的延长,发酵液的pH、可溶性固形物、总糖和还原糖含量均总体呈下降趋势;游离氨基酸含量呈先变化迟缓而后上升趋势;北虫草菌丝体及虫草素产量随时间延长先增加后下降;粗多糖含量总体略呈下降趋势。     

虫草枸杞复合发酵工艺研究

在蛹虫草液体培养过程中加入枸杞汁,进行虫草枸杞复合发酵,对发酵过程中虫草菌生长曲线及发酵产物有效成分含量进行了测定。确定了虫草枸杞复合发酵最佳工艺条件为:蛹虫草发酵72 h时向培养基中添加5 g/L的枸杞匀浆液,发酵周期144 h。在此工艺条件下,复合发酵产物产量较虫草菌丝体升高了112.12%,达11.73 g/L。其中虫草素含量11.23 mg/g,虫草酸含量178.21 mg/g,多糖含量30.73 mg/g,较虫草菌丝体分别提高了29.98%,64.46%和97.20%。复合发酵产物抗氧化能力较虫草菌丝体升高了44.62%。