嗜冷杆菌EastSeaG5-1415脂肪酶基因的克隆和序列测定

从东海深海底泥中筛选到一株产低温碱性脂肪酶的海洋细菌EastSeaG5-1415,经鉴定为嗜冷杆菌Psychrobacter glacincola。将其染色体DNA用Sau3AI部分酶切后,低熔点琼脂糖回收2～10kb的。DNA片段,用Klenow大片段酶半补齐,与用Sal I酶切半补齐的质粒pUC19连接后,转化E．coli．JM109构建基因文库。用平板测活法从基因文库初步筛选到两株产碱性脂肪酶的阳性克隆,采用ELISA反应进一步鉴定。序列测定分析表明,两个重组质粒中都包含长度为951bp的碱性脂肪酶基因的完整开放阅读框架(ORF)和上游基因调控序列。此片段编码有317个氨基酸组成的酶,计算分子量为35000 Dal。通过Southem杂交证实了此片段来自于嗜冷杆菌Psychrobacter glacincola EastSeaG5-1415基因细。     

南极产低温几丁质酶菌株的16S rDNA序列分析及其发酵条件及酶学性质研究

从南极深海沉积物中筛选到一株产低温几丁质酶的菌株AC444,经细菌形态观察及16S rDNA序列分析,该菌株属于假交替单胞菌属（pseudoalteromonas）,其最适与最高生长温度分别为15℃和30℃,属于兼性嗜冷菌。AC444菌株能利用多种碳源产酶,在含胶体几丁质和蛋白胨的培养基中产酶最高,达13．47U,最适产酶温度为20℃。酶的最适反应pH为7．0,最适作用温度为35℃,属中性低温酶。     

低温脂肪酶产生菌的筛选、鉴定及其部分酶学性质

从南极乔治王岛冻土来源的76株低温细菌中筛选到13株低温脂肪酶产生菌，对其中的BTsl0022菌株进行鉴定。通过生理生化特征、16s rDNA基因序列的同源性和系统发育分析发现，菌株RTsl0022属于假单胞菌属(Pseudomonas)，但与已定名的假单胞菌有一定的差异，与未定名的Pseudomonas sp．PsB的亲缘关系最接近，故将其暂定名为Pseudomonas sp．BTsl0022。对该菌脂肪酶的酶学性质初步研究表明，酶的最适作用温度为24℃，对热敏感，60℃处理30min仅残留25％酶活性，酶的适宜作用pH范围在7．0～9．0，最适pH为8．0。     

低温纤维素酶产生菌的筛选、鉴定、生长特性及酶学性质

从北极楚科奇海分离出一株产纤维素酶的耐冷假交替单胞菌BSw20308。研究表明：该菌最适生长温度10℃,35℃不生长;在pH7．0～8．0、含2．0％～3．0％NaCl的培养基条件下最适宜菌株生长与产酶;可溶性淀粉、酵母浸出液是有利于菌株生长及产酶的碳源、氮源物质;蔗糖、可溶性淀粉、麦芽糖及麸皮对CMCase的合成具有明显诱导作用;CMC、麸皮、可溶性淀粉及麦芽糖对滤纸酶的合成有一定诱导作用,单糖与部分双糖(蔗糖、纤维二糖及乳糖)则起阻遏作用;在指数生长后期至稳定早期,大量产CMCase;发酵液含CMCase、滤纸酶及葡萄糖苷酶活性,以CMCase活力最高;胞外CMCase活力占总CMCase活力的74．1％左右;酶最适作用温度35℃,5℃时酶活保留50％左右;酶对热敏感,35℃半衰期为3h,25℃下酶活稳定;酶最适pH8．0。     

深海适冷菌Pseudomonas sp.SM9913的适冷生长机制探讨

研究了温度对适冷菌Pseudomonas sp.SM9913的生长与适冷蛋白酶合成的影响，结果表明，P.sp.SM9913的最适生长温度为15℃，最适产酶温度为10℃，是一典型的适冷菌。P.sp.SM9913分泌的适冷蛋白酶在低温下与底物的亲和力增大，反应的活化能降低，表明在低温下较中温蛋白酶有更高的催化效率。深海产适冷蛋白酶的适冷菌P.SM9913可能是通过提高菌株在低温下的生长速率和增加酶分子在低温下的催化效率两条途径增加低温环境中蛋白质的分解效率，从而以适应低温环境。     

邻单胞菌M6中甲基对硫磷水解酶(MPH)的纯化及性质的研究

通过热变性、硫酸铵沉淀、DEAE-Sephadex-A50阴离子交换层析和CM Sepharose Fast Flow阳离子交换层析等一系列步骤从有机磷农药降解菌Plesiomonas sp.M6中获得了甲基对硫磷水解酶(Methyl parathion hydrolase, MPH,EC 3.1.8.3)的电泳纯.酶谱显示和SDS-PAGE电泳表明纯化的酶只有一条条带,其分子量约为33kD.该酶热稳定性比较高,55℃、15min处理后酶活保持稳定,最适反应pH为9.0,最适反应温度在10℃左右.动力学分析表明其对甲基对硫磷的米氏常数(Km)为2.14mmol/L, 最大反应速度(Vmax)为14.08μmol/L.min,转换数(kcat)为2863s-1.     

高效降解苯胺的菌株AD9的分离、生理生化特性分析和分子鉴定

从活性污泥中分离到一株能以苯胺为唯一碳源、氮源生长的苯胺降解菌株AD9,该菌株最适生长的苯胺浓度为1000mg／L,降解效率可达90％,对苯胺耐受程度高达4500mg/L,降解苯胺的最适pH值为7．0,最适温度为30℃。以上实验结果表明,AD9具有降解苯胺速率快、耐受苯胺浓度高的特性。该菌具有氨苄青霉素、卡那霉素和利福平抗性,无氯霉素、四环素抗性,其16SrDNA序列与多株Delftia sp．菌有很高的同源性,其G＋C含量为66．8mol％,非常接近于标准菌株D．tsuruhatensis T7（66．2mol％）。另外该菌和17的DNA-DNA杂交率为83．8％。结合AD9的表型鉴定将该菌株归属为D．tsuruhatensisas。这是D．tsuruhatensis菌种苯胺降解细菌菌株的首次报道。     

洋葱假单胞菌G63脂肪酶基因及其伴侣基因的克隆和同源高效表达

从油污土壤中筛选到一株脂肪酶活性较高的洋葱假单胞菌(Pseudomonas cepacia)G63.运用PCR的方法从该菌株中克隆了脂肪酶基因(lipA)及其伴侣基因(lipB).该脂肪酶基因开放式阅读框(ORF)为1092bp,编码364个氨基酸残基.经KpnⅠ/HindⅢ酶切,将其克隆到广泛宿主质粒pBBR1Tp载体上,构建成质粒pBBR1-lipAB.通过三亲杂交,在辅助质粒pRK2013的帮助下,转入原宿主菌P.cepacia G63中,构建成lipA基因同源高效表达的基因工程菌.该菌株在连续转接5次,培养45h后质粒保持率为82.6%,适用于规模化发酵生产.摇床发酵表明,工程菌在60h时酶活达到150.63 U/mL,较原始菌株提高3.6倍.     

优化米曲霉固体发酵产果胶酶及产物酶学性质

以麸皮为基质,橘皮粉添加量、氮源、培养基初始含水量和发酵时间为因子,采用响应面法的中心组合设计,对影响米曲霉(Aspergillus oryzaeJL14)固体发酵产果胶酶的条件进行了优化.结果表明,橘皮粉、硫酸铵的最适添加量分别为13.2%和2.3%,初始含水量为63.5%,发酵时间为77.0 h,米曲霉果胶酶产量最大预测值达316.4 U/g发酵产物,实验验证值为310.7 U/g发酵产物,是基础培养基酶产量的3.3倍.该米曲霉果胶酶(PG)的最适温度为50℃,Tm为55.9℃,其热稳定性较差;最适pH为4.0,属于嗜酸性果胶酶,在pH 5.0~8.0范围内稳定性较好,处理1 h后残余酶活均在80%以上.PG的Km和Vmax分别为7.06 mg/mL和62.5μmol-1.min.mL-1.PG能快速降低果胶溶液的黏度.该研究为提高橘皮利用率和酶法生产高品质果胶低聚糖奠定基础.     

细胞固定化方法对酶活稳定性的影响

本文以大肠杆菌为转化菌,研究了海藻酸钠包埋法细胞固定化技术,初步探讨了细胞固定化方法对产天冬氨酸酶活稳定性的影响。将固定化细胞放置于不同条件下保存,对比研究保存前后的酶活力,结果表明：海藻酸钠浓度4％,细胞浓度5％,温度40℃时保存的固定化细胞酶活稳定性最高。     

Estimation of Parameters of Universal Distribution of Moments of Failure of Products

A method is proposed for estimating the parameters of a mixture of exponential and Weibull distributions for which the accuracy of preliminary estimates obtained by graphical analysis is refined in accordance with the criterion of maximum likelihood. The efficiency of the proposed method is supported by the results of statistical modeling.     

秒表检定的测量不确定度评定

介绍了用标准时间间隔发生器检定秒表时，测量结果不确定度分析和评定过程；讨论了测量不确定度的几个主要来源；通过一组实例，给出了秒表检定不确定度的分析和评定结果，该过程和结论可应用在对于计量标准进行相应指标的不确定度分析上，也可用于估计秒表检定本身的不确定度。     

空压机轴承箱蜗壳温度探头油封改造

由于空压机进气侧轴承箱蜗壳温度探头密封效果不好,使空压机及其后续管道受到油污染。后将温度探头的O形圈密封改为骨架油封,杜绝了轴承箱漏油问题。文章简介空压机的结构和技术参数,详细介绍了骨架油封的制作和优点。     

水三相点复现的不确定度评定

水三相点是开尔文热力学温度的唯一基准点，也是ITS-90国际温标重要的定义固定点。因此，水三相点不确定度分析对整个温标的建立、温度量值传递起着至关重要的作用。近3年来，中国计量科学研究院研制出一系列高质量的水三相点容器，加强了水三相点的研究，为不确定度的分析提供了更为可靠的实验依据。同时，不确定度的分析也是客观评价新研制容器性能的一个重要指标。因此，根据实验结果对新研制容器所复现的水三相点进行了不确定度评定。评定结果表明，其扩展不确定度为0．16mK(k=2．69，P=0．99)。     

输入估计值的测量不确定度评定

本文所介绍的与1993年由ISO等7个国际组织联合发表的《测量不确定表示指南》（简称《指南》）完全一致，只是指南上的实用于物理测量的绝大多数领域，而本文介绍的仅适用于校准实验的测量。同时本文主要侧重于对输入估计值的A类测量不确定度和B类测量不确定度的评定的介绍，为输出估计值的测量不确定度评定奠定了良好的基础。     

Assurance of the Uniformity of Measurements of the Power of Laser Radiation

On the basis of an analysis of the principle underlying the construction of standards and systems designed for reproduction of the unit of mean power and energy of laser radiation, it is shown that these standards consist of unified subsystems that carry the principal metrological load. By means of such a division, it is possible to realize a systems-engineering synthesis of standards with preassigned error. __________ Translated from Izmeritel'naya Tekhnika, No. 11, pp. 20–23, November, 2005.     

方波幅度的测量不确定度

介绍了用众数法评价方波幅度时的不确定度分析和评价过程；讨论了主要的不确定度来源，包括众数判别区间的影响、波形测量系统幅度测量误差的影响等等；给出了减小不确定度的主要措施，并结合一个实例，给出了方波幅度的不确定度评价结果。     

一起珠光砂堵塞过冷器的故障处理

在KDON-4500/4500-3型空分设备精馏塔大加温过程中发生管道断裂故障,珠光砂进入纯氮通道堵塞过冷器并造成空分设备停车。介绍为排除故障而对过冷器进行正、反向吹扫的管线流程。阐述了为避免同类故障再次发生,对冷箱内管道、支架所作的改进措施以及精馏塔加温吹扫的优化操作。     

Assurance of the Uniformity of Measurements of Energy of Short-Pulse Coherent Radiation

Ways of creating unified automatized reference (calibration) and standard measurement equipment for the purpose of developing a subsystem for the assurance of the uniformity of measurements of the energy of short-pulse laser radiation are considered. __________ Translated from Izmeritel'naya Tekhnika, No. 11, pp. 24–28, November, 2005.     

Calculation of the Heat of Combustion of Hydrocarbon Components of Fuels

Development is continued of the empirical method for the calculation of the heat of combustion of organic compounds and, in particular, of hydrocarbons of different structures by the additive scheme based on their chemical structure.