桑黄菌丝体多糖的分离纯化及抗氧化、抗肿瘤活性分析

采用水提醇沉法制备桑黄菌丝体粗多糖，分别用终浓度为30%、45%和60%的硫酸铵溶液对桑黄菌丝体中粗多糖进行粗分离，并比较所得各多糖组分的抗氧化、抗肿瘤活性。对其中活性强的组分采用离子交换树脂柱色谱纯化，采用高效排阻色谱-折光示差检测器-多角度光散射仪对纯化多糖进行均一性分析和分子量测定。结果显示，45%硫酸铵分离多糖IPS45显示最强的抗肿瘤活性及较好的清除超氧阴离子活性，IPS45经DEAE-52纤维素离子交换柱纯化得到四个级分，经高效排阻色谱分析，其中蒸馏水洗脱级分（IPS45-W）为均一多糖，重均分子量为79.1 kDa；气相色谱分析其单糖组成为甘露糖:葡萄糖:半乳糖:未知单糖，摩尔比为1.57:8.38:1.09:1.00。IPS45-W可抑制HepG2细胞生长，当浓度为50μg/mL时，对HepG2细胞的抑制率为56.74%，高于前期研究的乙醇沉淀分离所得桑黄菌丝体均一多糖同浓度下11%～35%的抑制率。该结果为不同组成的桑黄多糖的分离和应用提供依据。     

海星多糖的分离纯化及鉴定

目的:建立海星多糖分离纯化的方法,并对纯化组分进行鉴定。方法:用碱提-酶解法提取海星多糖,再用离子交换层析和凝胶过滤层析法进行纯化;用理化方法和光谱法对纯化组分进行鉴定。结果:分离纯化的海星多糖不含蛋白质,含硫酸基,其中SSP1含己糖醛酸18.5%,含氨基己糖22.6%,含岩藻糖16.8%。结论:获得海星多糖6个纯化组分(SSP1-6),其中SSP1由己糖醛酸、氨基己糖、岩藻糖和硫酸基组成,其组成摩尔比约为:1.00∶1.10∶1.07∶(未测含量)。     

菜籽蛋白水解物的分离纯化及抗肿瘤活性研究

本研究将菜籽蛋白通过碱性蛋白酶-风味蛋白酶分步酶解制备得到菜籽蛋白水解物(RPH),在经过超滤、葡聚糖凝胶柱(Sephadex G-15)以及半制备液相(RP-HPLC)分离纯化得到各级分离组分。采用MTT比色法分析菜籽蛋白水解物各组分RPHs(MW1 ku)对人体肝癌细胞HepG2、乳腺癌细胞MBA-MD-231及人体结肠癌细胞Caco-2的体外抗增殖活性。当RPHs质量浓度为50～1 000μg/mL时,RPHs对HepG2细胞、MBA-MD-231细胞及Caco-2细胞均有一定的抑制作用,且抑制效果与样品浓度之间呈现出剂量依赖性;其中,HepG2细胞对RPHs的作用最为敏感。经Sephadex G-15凝胶柱分离后得到2个洗脱峰,收集并测定其活性,发现组分RPHs-F2具有更强的抗肿瘤细胞增殖活性;再进一步对其经半制备液相分离得到的组分进行体外抗增殖活性分析发现,除组分RPHs-F2-4外,其他3个分离组分都具有显著的抑制作用,而组分RPHs-F2-3对HepG2细胞具有最高的体外增殖抑制率,当作用质量浓度为1 000μg/mL时,抑制率为(51.53±5.59)%。因此认为菜籽蛋白酶解物分离组分RPHs-F2-3具有较好的抗肿瘤活性,可以作为功能性成分用于抗肿瘤相关的功能食品及保健品的开发。     

桦褐孔菌纯化多糖体外降血糖活性研究

采用水提醇沉法得到桦褐孔菌发酵粗多糖,将粗多糖过DEAE-52纤维素柱分离纯化得到两种多糖(EIOP1、EIOP2),本文以α-葡萄糖苷酶抑制活性、正常HepG2细胞及胰岛素抵抗HepG2细胞的单位细胞葡萄糖消耗量为主要指标,探究桦褐孔菌两种纯化多糖不同浓度(10、20、40、80、160和320 μg/mL)的降血糖活性,其中α-葡萄糖苷酶抑制活性以阿卡波糖作为阳性对照,葡萄糖消耗实验以二甲双胍作为阳性对照。结果表明,EIOP1、EIOP2的α-葡萄糖苷酶抑制活性均高于阳性对照组阿卡波糖与粗多糖,IC₅₀值分别为39.18、29.87 μg/mL。EIOP1在浓度为80 μg/mL时,对HepG2细胞的葡萄糖消耗量极显著高于对照组,促进效果最好,比对照组提高了30.62%(P<0.01);EIOP2在浓度在40 μg/mL时,葡萄糖消耗量极显著高于对照组,比对照提高了75.99%(P<0.01);对胰岛素抵抗HepG2细胞的葡萄糖消耗实验发现EIOP1在浓度为40 μg/mL时,促进效果最好,比胰岛素抵抗组提高了30.00%,EIOP2在浓度为80 μg/mL时,促进效果最好,比胰岛素抵抗组提高了90.49%,高于Met组(P<0.01)。因此,桦褐孔菌纯化多糖对正常HepG2细胞和胰岛素抵抗HepG2细胞的葡萄糖消耗均具有促进作用,对α-葡萄糖苷酶的抑制活性显著高于粗多糖。     

裙带菜多糖的分离纯化及抗肿瘤活性

目的:对自提精制裙带菜粗多糖(UPPS)进行分离纯化及体外抗肿瘤活性研究。方法:实验首先对裙带菜粗多糖进行Sevage法除蛋白、H2O2法脱色素、透析法除去小分子;然后运用DEAE-52、Sephadex G-200柱层析对裙带菜多糖半纯品进一步纯化;最后采用MTT法测定了UPPS-B1对肿瘤细胞SGC-7901和HepG-2生长、增殖的抑制作用。结果:裙带菜粗多糖通过脱蛋白、脱色、透析后运用DEAE-52、Sephadex G-200柱层析进行分离纯化,得到一个组分UPPS-B1。其对SGC-7901和HepG-2均具有一定的抑制作用并具有剂量依赖性。结论:UPPS-B1是均一度较好的多糖组分,具有抗肿瘤活性。     

芦根多糖的分离纯化和体外抗肿瘤研究

从芦根中提取和纯化了芦根多糖,并研究其体外抗肿瘤活性。采用热水浸提法从芦根中提取芦根多糖,经Sevag法脱蛋白,冷冻干燥后,葡聚糖凝胶柱层析分离纯化,得到纯化的芦根多糖,苯酚-硫酸法测定多糖样品中总糖含量,凝胶层析测定多糖分子量,细胞毒性实验研究其体外抗肿瘤作用。结果测得芦根多糖样品中总糖含量为0.872%,分离纯化得到三种芦根多糖组分R-PolyⅠ、R-PolyⅡ、R-PolyⅢ,三者的分子量分别为79781、29073、10605u,细胞毒性实验表明三种芦根多糖组分对Hela细胞和B16细胞均具有良好的抑制作用。这为芦根多糖在食品工业及医药保健等领域的应用奠定了基础。     

杨梅多酚提取物对高糖损伤INS-1细胞活性及Pdx-1表达的影响

目的:研究杨梅多酚提取物(CBE)对高糖损伤的INS-1细胞活力、凋亡和坏死以及Pdx-1蛋白表达水平的影响。方法:通过四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测胰岛细胞活性,采用Hoechst 33342/PI双染法观察细胞的凋亡和坏死,同时以Western blot法检测Pdx-1蛋白的表达水平。结果:杨梅多酚提取物(0.5～20μg/mL)对高糖损伤INS-1细胞具有保护作用,其中5μg/mL CBE的保护效果较好,与损伤组相比,细胞活性上升14%以上。且在低质量浓度范围(0.5～5μg/mL),CBE的保护效果呈剂量效应关系。荧光染色结果表明杨梅多酚提取物对高糖诱导损伤的INS-1细胞凋亡具有明显的抑制作用。免疫印迹试验显示杨梅多酚提取物干预可改善INS-1细胞因高糖诱导的Pdx-1表达水平下调。结论:杨梅多酚提取物对高糖诱导损伤的INS-1细胞具有显著的保护作用,其机制可能与改善葡萄糖刺激的胰岛素分泌功能有关。     

灰树花多糖的分离纯化及体外抗肝癌作用研究

利用超声破碎、水提醇沉、葡聚糖凝胶过滤层析等方法,对灰树花子实体多糖进行分离得到多糖组分GFD-1。高效液相色谱分析表明,GFD-1是分子量为29.574 k Da的多糖均一组分。利用显色试验、紫外光谱、红外光谱及原子力显微镜分析,GFD-1为不含还原性羰基、酚羟基、游离或结合蛋白质、核酸类物质的非淀粉类α-吡喃多糖,其糖链高度在0.5 nm~1 nm。GFD-1能够显著抑制人肝癌细胞HepG2的增殖,并呈剂量依赖关系,IC_(50)为94μg/m L,但其对于正常肝脏细胞L-02无明显影响;通过AO/EB双染,经GFD-1作用的HepG2细胞呈典型凋亡形态学特征;经流式细胞仪分析,HepG2细胞被阻遏在S期。上述结果可知,初步确定分离纯化的GFD-1是一种具有抗肿瘤活性的均一多糖组分,为开发天然抗肿瘤物质和进一步分析其抗肿瘤作用机制提供了参考。     

青钱柳多糖降血糖活性成分研究

该研究旨在探究青钱柳多糖的结构及其降血糖活性。以青钱柳叶为原料，对水提醇沉得到的青钱柳粗多糖采用DEAE-纤维素柱、HW-55F凝胶柱及Sephacryl S400凝胶柱进行分离纯化，并利用动物实验筛选降血糖活性成分，通过核磁共振波谱分析鉴定化学结构。结果表明，青钱柳粗多糖及其DEAE-纤维素柱水洗脱样品B能够显著降低糖尿病小鼠的空腹血糖，提高口服葡萄糖耐受量。样品B再经进一步分离纯化得到具有降血糖活性的多糖CPP-1。根据其核磁共振波谱分析结果，初步推断该多糖由(1→2)-β-D-葡萄糖构成主链，由β-D-葡萄糖醛酸乙酯构成侧链，侧链连接在β-D-葡萄糖C3上，该结构在青钱柳多糖的研究中为首次报道。     

苦荞茶多糖的体外抗氧化活性及其分离纯化

对苦荞茶多糖(tartary buckwheat tea polysaccharide,TBTP)进行分离纯化和活性分析,为苦荞的进一步推广和应用提供理论依据。采用水提醇沉法获得TBTP,利用苯酚-硫酸法测定粗多糖中的糖含量,通过体外抗氧化评价体系研究TBTP对DPPH自由基、羟基自由基(·OH)、超氧阴离子(O2-·)的清除活性以及TBTP的总还原能力,并利用DEAE-52纤维素和G-150葡聚糖凝胶柱对获得的粗多糖进行纯化、分组。结果表明:TBTP的多糖含量为58.75%;在质量浓度为8.0 mg/m L时,对DPPH·的清除率为94.16%,对·OH的清除率为82.25%;在质量浓度为4.0 mg/m L时,对O2-·的清除率为98.05%。同时经DEAE-52纤维素和G-150葡聚糖凝胶柱对TBTP进行分离纯化后,将TBTP分为3个成分均一的组分,分别为TBTP-1、TBTP-2、TBTP-3。苦荞茶作为食源性物质,其多糖有明显的抗氧化活性。DEAE-52纤维素和G-150葡聚糖凝胶柱对该多糖有很好的分离、纯化效果。     

基于多元统计分析的曹妃甸区24份盐地碱蓬成分指标综合评价

目的:以来自唐山市曹妃甸不同区域盐地碱蓬为研究对象,探究土壤盐分、速效养分与品质之间的关系,对盐地碱蓬成分指标进行综合评价。方法:通过测定水分、抗坏血酸、蛋白质、氨基酸、亚硝酸盐、总黄酮含量,进行了相关性分析、主成分分析以及聚类分析。结果:不同区域盐地碱蓬成分指标存在明显差异,其中亚硝酸盐含量差异最大,变异系数大于50%,水分含量差异最小,变异系数仅为1.83%。主成分分析结果表明抗坏血酸、黄酮和氨基酸含量是影响碱蓬品质的核心指标。系统聚类结果可知,曹妃甸8个区域盐地碱蓬可划分为3类,其中南堡区、一场及七场的盐地碱蓬品质较好,二场的盐地碱蓬品质最差。结合土壤盐分和速效养分结果分析,表明土壤盐分、速效钾含量高,能够显著提升盐地碱蓬蛋白质和亚硝酸盐含量,但抑制了总黄酮含量的积累。结论:建议盐地碱蓬栽培发展中着重关注土壤盐分和速效养分含量,本试验可为曹妃甸区盐地碱蓬质量评价提供可靠的分析方法与参考依据。     

碱蓬草总生物碱提取工艺优化及其对高脂饮食小鼠的体内抗氧化活性

目的:优化碱蓬草总生物碱的提取工艺,研究碱蓬草总生物碱对高脂饮食小鼠的体内抗氧化性。方法:以碱蓬草总生物碱的提取量作为指标,在单因素实验的基础上,进行正交分析。利用碱蓬草的总生物碱对高脂饮食小鼠进行灌胃,定期监测小鼠的衰老指标。结果:碱蓬草总生物碱的最佳提取工艺:超声时间20 min、超声温度45 ℃、乙醇浓度85%、料液比1:10,在此条件下,总生物碱的提取量为（0.65 ± 0.02）mg/g。抗氧化活性实验表明,碱蓬草总生物碱的低（2 mg/kg）、中（4 mg/kg）、高剂量（8 mg/kg）组均可以显著降低小鼠肝脏中MDA的含量（P<0.05）,同时碱蓬草总生物碱的低、中、高剂量组均可以显著增加肝脏中的CAT和GSH-Px（P<0.05）。结论:本实验的优化工艺具有良好的可行性,碱蓬草总生物碱具有抗氧化活性,可作为碱蓬草食品及医药方向的研究基础。     

盐地碱蓬有效成分提取方法及工艺研究进展

综述了盐地碱蓬中碱蓬籽油、黄酮、色素等有效成分的提取方法及工艺进展。盐地碱蓬提取方法主要包括溶剂浸提法、超声波或微波辅助提取法、超临界CO₂萃取法。溶剂浸提法是提取碱蓬中碱蓬籽油、黄酮、色素的传统方法,超声波辅助和微波辅助提取将超声或微波技术引入碱蓬提取中,提高了提取效率。超临界CO₂萃取技术应用于碱蓬提取,避免了溶剂回收和有机溶剂残留的问题,并且可实现原料的充分利用。碱蓬有效成分提取应向工艺整合以实现多种成分综合提取利用的方向发展。     

盐胁迫对不同时期盐地碱蓬组分含量的影响

采用自吸水耐盐鉴定法,研究了不同NaCl浓度（0.10%、0.30%、0.60%、0.90%、1.20%）对盐地碱蓬不同生长时期组分含量的影响。结果表明,不同生长时期的盐地碱蓬组分含量存在明显差异,其中苗期盐分对亚硝酸盐影响最大,最高亚硝酸盐含量为7.09 mg/kg;花期盐分对氨基酸含量影响最大,最高含量达134.26 μmol/g;结果期盐分对蛋白质影响最大,最高含量为19.36 mg/g。苗期盐地碱蓬水分含量最高,随盐胁迫程度增加而增加,在1.20% NaCl处理下达最大值;抗坏血酸在不同时期随梯度盐分增加呈现总体降低趋势,低浓度（小于0.60%）NaCl处理下,苗期盐地碱蓬抗坏血酸含量最高。以总黄酮含量为优化目标,采用高效液相色谱检测方法（HPLC）对盐地碱蓬总黄酮提取技术进行了优化,得到最优提取条件:超声功率500 W,超声温度70 ℃,超声时间25 min,料液比1:60 g/mL;在0.90% NaCl处理下,花期盐地碱蓬总黄酮含量最高,达3.68%。综上,本研究明确了适宜发展优质安全盐地碱蓬的土壤盐分范围为0.60%,为指导盐地碱蓬生产和合理开发提供技术支撑和理论依据。     

海英菜多糖提取工艺的响应面法优化及其体外抗氧化作用

以单因素试验为基础,选择提取温度、提取时间、液料比三因素三水平进行Box-Behnken组合试验,对野生海英菜粗多糖提取工艺参数进行优化分析。结果表明海英菜粗多糖水浸提的最佳工艺条件为提取温度87℃、提取时间3.5h、液料比31.5:1(mL/g),在此条件下海英菜粗多糖得率达到2.028%。以VC和叔丁基对苯二酚为对照,测定脱蛋白海英菜多糖的体外抗氧化作用,结果表明海英菜多糖的还原能力、对超氧阴离子自由基和羟自由基的清除能力均表现出较好的效果,清除超氧阴离子自由基和羟自由基的IC50分别为0.841mg/mL和0.712mg/mL,其抗氧化能力低于VC,与叔丁基对苯二酚相近。     

响应面法优化碱蓬根总生物碱的提取工艺及其抑菌活性

为优化碱蓬根总生物碱的提取工艺,并研究其抑菌活性,以碱蓬根为原料,在单因素实验基础上,采用响应面法确定碱蓬根总生物碱的最佳提取条件,管碟法及两倍稀释法检测碱蓬根总生物碱提取物对三种常见致病菌(大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌)的抑制效果。结果表明,当料液比为1:25 g/mL,乙醇浓度86%,提取温度78 ℃,提取时间2.1 h时,总生物碱得率最高为0.521%±0.04%。碱蓬根总生物碱对大肠杆菌及金黄色葡萄球菌有一定的抑菌效果,最低抑菌浓度为0.4 mg/mL,对枯草芽孢杆菌无抑菌性。该提取工艺高效可行,可用于碱蓬根中总生物碱的提取,同时提取物具有一定的抑菌性。     

麦冬多糖POJ-U1a的结构研究及原子力显微镜观测

用功率超声从麦冬中提取麦冬多糖POJ-U1,通过DEAE-52 cellulose色谱柱和Sephadex G-150凝胶色谱柱进行分离纯化得到POJ-U1a,采用高效凝胶渗透色谱法测定其分子量,采用红外光谱法、气相色谱法对其化学结构进行研究,原子力显微镜观察其微观形貌。结果表明,麦冬多糖POJ-U1a的平均分子量为4.02×103D,是一种由均一葡萄糖组成的葡聚糖,具有糖类物质的特征吸收峰,同时存在呋喃环,是具有高度分枝的化学结构的多糖。     

玉竹中性多糖的分离纯化及单糖组成分析

采用水提醇沉方法提取玉竹(Polygonatum odoratum (Mill) Druce)粗多糖,通过DEAE- 纤维素离子交换层析和Sepharose CL-6B 分子筛层析分离纯化得到玉竹中性多糖。应用紫外光谱分析中性多糖的纯度,凝胶过滤法测定其分子质量,红外光谱和高效液相色谱对其结构和单糖组成进行初步分析。结果表明：玉竹多糖主要为中性多糖,同时含有少量酸性多糖;玉竹中性多糖平均分子质量为1.21 × 106D,主要由甘露糖和葡萄糖组成,其物质的量比为5:1,同时含有少量半乳糖。     

响应面分析法优化碱蓬多糖的脱色工艺

为了优化活性炭对碱蓬多糖的脱色工艺条件,在单因素实验基础上,选取碱蓬多糖脱色过程中的活性炭用量、脱色温度、脱色时间和pH为影响因素,根据Box-Behnken中心组合设计原理,进行响应面法分析,确定碱蓬多糖的最佳脱色工艺条件为:活性炭用量3.3%,脱色温度53 ℃,脱色时间43 min,pH5.4,脱色率为65.38%,RSD为1.74%。该优化工艺简单、稳定、具有良好的可行性。     

盐地碱蓬膳食纤维对高脂血症大鼠的降血脂作用

探究盐地碱蓬膳食纤维对高脂血症大鼠的降血脂作用,56只雄性SD大鼠随机平分为7组：正常组、盐地碱蓬膳食纤维预防组、高脂模型组,阳性对照组,盐地碱蓬膳食纤维高、中、低浓度3个干预组。干预6周后,分别测定各组大鼠的体重、摄食量、脏器重量、附睾周脂重量、肝脏系数、动脉硬化指数及血清血脂水平。结果：与高脂模型组相比,干预组的体重、摄食量、心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、附睾周脂重、肝脏系数、动脉硬化指数均有下降,其最大降幅分别为：26.21%、26.66%、27.01%、46.03%、35.71%、3.43%、22.69%、57.14%、39.92%、76.94%。血脂方面,干预组较高脂模型组的TC、TG、LDL-C值均降低,其最大降幅分别为：19.12%、87.20%、60.50%。较阳性组,高剂量组的LDL-C降低38.16%,HDL-C升高27.01%,存在显著性差异（p<0.05）。预防组与正常组比,脏器重量均有不同程度减少,血脂方面,预防组较正常组的TG、LDL-C值均降低,分别为：68.85%、31.64%,HDL-C升高12.88%。表明盐地碱蓬膳食纤维对高脂血症大鼠体重、摄食量、脏器重量、附睾周脂重、肝脏系数及动脉硬化指数具有预防及控制作用,并且对高血脂有降脂作用。