酶法制备阿拉斯加鳕鱼降压肽的工艺优化及其产物的结构鉴定

以体外血管紧张素转化酶(ACE)抑制率为指标,筛选出制备阿拉斯加鳕鱼降压肽的最优酶。本研究通过正交实验以及单因素优化实验确定了阿拉斯加鳕鱼降压肽的最优酶解工艺,考察了最优工艺降压肽的氨基酸含量与分子量分布范围。结果表明:在菠萝蛋白酶、木瓜蛋白酶、胰蛋白酶、复合蛋白酶、碱性蛋白酶和酸性蛋白酶6种蛋白酶中,经胰蛋白酶酶解得到的降压肽ACE抑制率最高,为68.48%,其中影响胰蛋白酶活性大小的因素依次为温度、酶与底物质量比、料液比、pH和时间,最优酶解温度40℃,酶与底物质量比3%,料液比1:7,pH=7,酶解时间2 h。在此工艺条件下,降压肽ACE抑制率可达79.62%,氨基酸总含量为83%,分子量低于500 Da的降压肽可达到70.74%。优化的阿拉斯加鳕鱼降压肽的提取工艺可行、合理,降压肽也具有较高的体外ACE抑制活性。本研究结果为进一步考察食源性降压肽提供了参考。     

响应面法优化双酶复合水解鳕鱼加工副产物的加工工艺

目的采用响应面法对复合酶酶解鳕鱼加工副产物的工艺进行优化,实现副产品的综合利用。方法采用胰蛋白酶和风味蛋白酶,运用单因素实验、Box-Behnken中心组合设计和响应面分析法,研究鳕鱼加工副产物的最佳酶解条件。结果最佳条件为:复合酶比例(胰蛋白酶和风味蛋白酶)(m:m)2:1,酶解温度45.52℃,液固比(m:m)3.19:1,加酶量2.93%,pH 7.5,酶解时间6 h。在此条件下,酶解鳕鱼加工副产物所得氨基酸含量理论预测值为16.3523 mg/mL,验证实验的氨基酸含量为16.33 mg/mL,与响应面预测值基本吻合。结论用胰蛋白酶和风味蛋白酶复合水解鳕鱼加工副产物得到的酶解液氨基酸含量较高,可作为鱼蛋白有机肥用于农牧业生产。     

复合酶深度酶解牡蛎制备呈味基料的研究

以牡蛎为原料,选用胰蛋白酶和风味蛋白酶组成复合酶对其进行深度酶解,以水解度和感官评分为指标,通过单因素试验考察了胰蛋白酶与风味蛋白酶比例、酶添加量、酶解pH、酶解温度和酶解时间对牡蛎深度酶解的影响,对牡蛎深度酶解工艺进行优化,并对最优酶解条件下获得的牡蛎深度酶解产物的肽分子量分布和氨基酸组成进行分析。研究结果表明:牡蛎深度酶解最优工艺条件为胰蛋白酶与风味蛋白酶质量比为21、蛋白酶添加量0.1%([E]/[S])、酶解pH 7.5、酶解温度60℃、酶解时间24h,该条件下得到的牡蛎深度酶解产物中分子量3ku的多肽占83.5%,其中含有33.4%的分子量为1~3ku的多肽和50.1%的分子量1ku的多肽。牡蛎深度酶解产物游离氨基酸中必需氨基酸含量为40.51%,鲜味氨基酸含量为17.50%,甜味氨基酸含量为30.60%。     

鳕鱼皮胶原活性多肽的制备研究

以鳕鱼皮为研究对象,研究不同蛋白酶对鳕鱼皮酶解效果的影响.实验以水解度为指标,通过正交试验确定胰蛋白酶、碱性蛋白酶、中性蛋白酶、木瓜蛋白酶的最佳酶解条件.采用试剂盒法对4种酶解液进行抗氧化活性测定.结果显示,碱性蛋白酶酶解液的总抗氧化能力最强,达到2.431 U/mgprot;中性蛋白酶酶解液清除超氧阴离子自由基的能力最强.     

复合酶制备鳕鱼皮梯级胶原肽的初步研究

利用酶工程技术,以鳕鱼皮作为研究对象,研究开发鳕鱼皮梯级胶原肽制品.选取胰蛋白酶和碱性蛋白酶作为试验用酶,通过正交试验方法确定最适水解条件,胰蛋白酶:加酶量2.5%、温度45℃、pH6.5、时间4h;碱性蛋白酶:加酶量4%、温度50℃、pH 8.0、时间3 h.复合酶解的最适条件为:胰蛋白酶和碱性蛋白酶混合水解,加酶量分别为2.5%和4%、温度50℃、pH 8.0、时间4 h,蛋白质水解度26.1%.分离得到两多肤组分UF-1和UF-2,分子量(Mr)范围分别为:UF-1:2000u相似文献   

分步酶解猪骨粉提取猪骨素的工艺研究

本文以三氯乙酸可溶性氮(SN-TCA)的含量与水解度(DH)为测定指标,研究了中性蛋白酶、胰蛋白酶和木瓜蛋白酶复配后与风味蛋白酶分步酶解猪骨粉的工艺,优化了复合酶的最佳配比和酶解工艺参数。研究结果表明,第一步酶解三种酶的最佳配比为中性蛋白酶添加量5000 U/g、胰蛋白酶添加量4420 U/g和木瓜蛋白酶添加量3000 U/g,此时所得SN-TCA的最大含量为52.6%;复合酶最优的酶解工艺参数为酶解温度43.4℃、酶解时间6 h、pH 7.6、加酶量0.31%、料液比1:5.4,此时SN-TCA含量最高为55.42%;第一步酶解液灭酶后进行第二步酶解,保持体系料液比和pH不变,加入风味酶酶解温度为45℃、酶解时间为4 h、加酶量为0.4%,此时酶解效果最好,水解度可达到13.71%。     

沙蚕不同蛋白酶酶解产物滋味特征及聚类分析研究

摘要：目的 研究沙蚕不同酶解产物中氨基酸和呈味核苷酸的含量、组成和呈味效果差异。方法 以酱油粉为对照,采用味道强度值、味精当量、主成分分析法、聚类分析法进行分析和综合评价。结果 沙蚕不同蛋白酶解产物中游离氨基酸含量在90.84±1.12~151.25±0.95 mg/g之间;风味蛋白酶酶解产物的游离氨基酸和呈味氨基酸含量最高;胰蛋白酶组的味精当量值远高于酱油粉组;各组氨基酸对滋味有较大贡献,风味、胰蛋白酶组中谷氨酸的味道强度值值与酱油粉组中该值接近,分别为37.13和35.40 mg/g。提取了4个主成分,累计方差贡献率达95.372%,较好地反应了酶解产物中游离氨基酸的综合信息,风味蛋白酶组综合得分最高,基于电子舌的滋味轮廓也支撑了这一结论。采用聚类分析将实验组分为4类,较直观地反映了不同酶解产物间的差异。结论 风味蛋白酶和胰蛋白酶酶解沙蚕的产物游离氨基酸品质较好,且鲜味氨基酸含量和呈味核苷酸含量较高,可开发呈味基料。     

海蜇胶原蛋白肽的酶解制备工艺

以海蜇加工下脚料为原料提取胶原蛋白,以还原力(RP)和水解度(DH)为指标,采用响应面法研究了酶解温度、酶解时间、pH、料液比、酶添加量对还原力和水解度的影响,得到最佳酶解胶原蛋白的工艺条件;并进一步与复合酶水解工艺进行比较,确定海蜇胶原蛋白肽的最优制备工艺。结果表明:胰蛋白酶的最优酶解条件为:温度44℃、pH8.5、料液比0.50 g/mL、酶添加量3.0%和酶解时间4 h;风味蛋白酶的最优酶解条件为:温度44℃、pH7.5、料液比0.56 g/mL、酶添加量4.0%和酶解时间4 h;进一步进行复合酶实验,结果表明采用风味蛋白酶和胰蛋白酶分别在其最适条件下进行先后酶解获得的酶解液的DH和RP最高,分别为(71.56%±0.0076%)和(0.341±0.0101)。     

人工饲养大鲵皮胶原蛋白肽提取工艺研究

对6种蛋白酶进行筛选,优选出大鲵皮明胶酶解制备小分子胶原蛋白肽的三种最佳用酶为中性蛋白酶、木瓜蛋白酶及风味蛋白酶,添加量分别为木瓜蛋白酶8 000U/g,中性蛋白酶3 000U/g、风味蛋白酶600U/g。实验采用复合酶解工艺方法,以蛋白质回收率为参考指标,确定了最佳工艺参数:酶解时间为7h,酶解温度为55℃,料液比为1∶4。此时蛋白质的回收率为78.9%,其中相对分子量≤5 000Da占46.86%。     

五种蛋白酶对牡蛎酶解产物滋味特性的影响

以牡蛎为研究对象,在水解度一致的情况下,探究胰蛋白酶、动物蛋白酶、碱性蛋白酶、中性蛋白酶和风味蛋白酶对牡蛎酶解产物感官、肽分子量和游离氨基酸的影响。结果表明:五种酶解产物均具有较强的鲜味。碱性蛋白酶酶解产物在五种酶解产物中整体感官评价最佳。分子量<5 kDa肽比例从大到小是胰蛋白酶(74.99%)、动物蛋白酶(73.44%)、中性蛋白酶(71.53%)、碱性蛋白酶(68.46%)和风味蛋白酶(58.77%)。五种酶解产物中游离氨基酸百分比均呈现出谷氨酸百分比最高、组氨酸百分比最低的特点。游离氨基酸总量从高到低分别为胰蛋白酶(22.816 mg/g)、中性蛋白酶(20.775 mg/g)、风味蛋白酶(20.530 mg/g)、动物蛋白酶(16.287 mg/g)、碱性蛋白酶(16.232 mg/g)。胰蛋白酶、动物蛋白酶、碱性蛋白酶、中性蛋白酶和风味蛋白酶酶解产物中TAV大于1的游离氨基酸数量分别为10、8、8、9和11种。5种蛋白酶酶解产物中,TVA值最大的氨基酸均是谷氨酸。     

黑线鳕鱼皮胶原蛋白胰蛋白酶酶解多肽对UVB诱导HaCaT光损伤的抑制作用

目的：研究黑线鳕鱼（Melanogrammus aeglefinus）皮胶原蛋白胰蛋白酶酶解多肽的抗氧化、抑制光损伤作用,提高鱼皮的再利用价值。方法：利用单因素试验和响应面试验设计,探讨黑线鳕鱼皮胶原蛋白的最佳酶解工艺。将制得的酶解多肽通过基质辅助激光解离飞行时间串联质谱仪（matrix-assisted laser desorption/ionization time of flight tandem mass spectrometry,MALDI-TOF MS/MS）测定多肽序列。利用Discovery Studio中CDOCKER模块将所得的优势肽与抗氧化相关的Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白-1（Keap1）进行分子对接。用不同质量浓度的多肽预处理人表皮角质形成细胞（HaCaT）后,使用中波紫外线诱导HaCaT细胞构建光损伤模型,通过超氧化歧化酶（superoxide dismutase,SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（glutathione peroxidase,GSH-Px）活性、丙二醛（malondialdehyde,MDA）含量及细胞凋亡与周期来研究酶解多肽抑制光损伤的能力。结果：黑线鳕鱼皮胶原蛋白在胰蛋白酶质量分数1.23%、酶解温度52.95?℃、酶解时间1.75?h条件下,水解度为78.33%。MALDI-TOF MS/MS测定出酶解液中的优势肽序列为V-IFFVTMGTP-R、L-SIVPV-R和L-MHT-T。通过分子对接发现V-IFFVTMGTP-R与Keap1结合最稳定,从而预测其具有抗氧化的作用。用250?mg/mL酶解液处理光损伤的HaCaT细胞,其SOD、GSH-Px活性较模型组极显著提高（P＜0.01）,MDA含量极显著降低（P＜0.01）。结论：黑线鳕鱼皮胶原蛋白胰蛋白酶酶解多肽具有抗氧化活性,对光损伤具有一定的抑制作用。     

文蛤肉复合酶分步酶解工艺的研究

本实验探讨了中性蛋白酶和胰蛋白酶的复合酶与风味蛋白酶分步酶解文蛤肉的技术。 通过q检验法确定中性蛋白酶和胰蛋白酶最佳的复合比例,再通过正交试验探讨复合酶与风味蛋白酶二段酶解的最佳工艺参数,并以水解度、水解得率及风味评分值为指标对分步酶解工艺的最佳条件进行比较验证。结果表明,胰蛋白酶与中性蛋白酶的最佳复合比例为3:1,风味蛋白酶二段酶解的最优工艺参数为水解温度55℃、水解时间5.0h、加酶量1000 U/g(原料)、pH值(5.00±0.05),所得文蛤肉水解液中水解度、水解得率及风味评分值分别为55.97%、87.14%及230.98。     

飞鱼籽生物酶法脱囊衣技术研究

以飞鱼籽为原料,鱼籽脱囊衣率为指标,从胰蛋白酶、胶原蛋白酶、碱性蛋白酶和木瓜蛋白酶4种酶中,筛选出胰蛋白酶为最佳使用酶,并采用L9(34)正交实验设计对胰蛋白酶脱除飞鱼籽囊衣工艺参数进行优化。结果表明,酶解液浓度0.8mg/mL、pH9、在20℃下酶解12min,飞鱼籽脱囊衣率可达83%以上。     

河蟹肉酶解产物的氨基酸组成分析

以邻苯二甲醛为衍生剂,采用反向高效液相色谱、二级阵列检测器测定河蟹肉酶解蛋白粉的水解氨基酸及游离氨基酸组成。结果表明,河蟹肉中含有48.5%的呈味氨基酸和35.2%的必需氨基酸。与碱性蛋白酶和胰蛋白酶解粉相比,河蟹肉蛋白酶解粉中木瓜蛋白酶解粉氨基酸组成均衡,呈味和必需氨基酸含量较高,与FAO/WHO推荐的成人、学龄儿童必需氨基酸需求量模式相比,其第一限制氨基酸均是亮氨酸,氨基酸分分别达116.74和50.41。     

正交试验优化长吻鮠肉蛋白酶解工艺

以脱脂长吻鮠肉蛋白为原料,利用碱性蛋白酶酶解制备水解鱼肉蛋白。通过单因素试验和正交试验优化确定酶解的工艺参数,并考察酶解产物的氨基酸组成和分子量分布特征。结果表明,碱性蛋白酶对长吻鮠肉蛋白酶解最佳工艺参数为加酶量2.0%、温度60℃、pH 8.0、酶解时间4 h,在此条件下,水解度可达27.14%。长吻鮠肉蛋白酶解产物中谷氨酸、天门冬氨酸、赖氨酸和亮氨酸含量相对较高,其中必需氨基酸约占33.44%,酶解产物分子量分布范围主要集中在500~5 000 Da,占总酶解产物的78.3%。     

东海海参胶原蛋白酶解工艺研究

主要研究从东海海参中提取胶原蛋白的工艺以及胶原蛋白酶解的条件优化.以干东海海参为原料,采用酸碱溶液浸泡除去东海海参表面的钙质及非胶原物质,然后在酸性条件下用1%胃蛋白酶进行水解,提取胶原蛋白;分别探讨木瓜蛋白酶、风味蛋白酶和胰蛋白酶酶解胶原蛋白的最佳条件.结果表明:木瓜蛋白酶最适条件:底物含量30 g/g酶.温度40℃,pH 7.5;风味蛋白酶最适条件:底物含量40 g/g酶,温度40℃,pH 7.5;胰蛋白酶最适条件:底物含量40 g/g酶,温度55℃,pH 9.0.复合酶水解的最佳工艺:风味蛋白酶与木瓜蛋白酶的质量比1:1,木瓜蛋白酶与胰蛋白酶的质量比3:1,风味蛋白酶与胰蛋白酶的质量比1:1.     

鳕鱼骨胶原蛋白肽的抗氧化活性

以鳕鱼骨为原料,采用热水提取法提取胶原蛋白,并采用中性蛋白酶、复合蛋白酶、酸性蛋白酶和胃蛋白酶分别进行酶解制备鳕鱼骨胶原蛋白肽。以对.OH、DPPH.和O2-.自由基的清除率作为评价指标,比较4种蛋白酶酶解制备的鳕鱼骨胶原蛋白肽的抗氧化活性。结果表明:4种蛋白酶制备的鳕鱼骨胶原蛋白肽对3种自由基均有一定的清除能力,且其清除能力随样品质量浓度的增大而增强;4种蛋白酶酶解制备的鳕鱼骨胶原蛋白肽对3种自由基的清除能力各不相同,其中对.OH的清除能力最强且有较好的量-效关系;当多肽质量浓度在4～10 mg/mL时,4种蛋白酶酶解胶原蛋白肽对DPPH.的清除能力优于对O2-.的清除能力。     

河豚鱼皮胶原寡肽制备工艺的优化

研究以无毒河豚鱼皮作为原料,采用两步酶解法制备胶原寡肽的最佳工艺。以水解度和分子量为指标,通过单因素和正交实验优化工艺条件。实验结果表明,第一步最佳用酶为鱼鳞鱼皮胶原蛋白水解专用酶或胰蛋白酶,第二步最佳用酶为酸性蛋白酶。酸性蛋白酶的最佳酶解条件为:投酶量2%,p H4.5,温度50℃,水解时间8h。制备得到的河豚鱼皮胶原寡肽分子量分布主要集中在100~600u。冻干样品的胶原肽含量为94.0%,灰分为0.71%,水分为5.2%。     

超声波辅助酶解提取鮟鱅鱼皮胶原蛋白的工艺优化

以鮟鱇鱼皮为原料,以料液比、超声时间、加酶量、酶解时间、酶解温度、提取pH为实验因素,用超声-风味酶法和超声-碱性酶法分别提取,并利用正交试验确定鮟鱇鱼皮胶原蛋白最佳提取工艺。结果表明,超声-风味酶法提取鮟鱇鱼皮胶原蛋白的最佳提取工艺条件为:超声时间80 min,酶解时间5 h,风味蛋白酶5000 U/g,酶解温度40℃,在此条件下胶原蛋白提取率为3.54%±0.21%;超声-碱性酶法提取鮟鱇鱼皮胶原蛋白的最佳提取工艺条件为:超声时间80 min,酶解时间6 h,碱性蛋白酶4000 U/g,酶解温度45℃,在此条件下胶原蛋白提取率为3.25%±0.68%,其中酶解时间比超声-风味酶法多1 h,但胶原蛋白提取率却不及超声-风味酶法。综上,选取超声-风味酶法提取鮟鱇鱼皮胶原蛋白。     

酶解法制备鹿角盘胶原蛋白的工艺

确定鹿角盘胶原蛋白的酶解法制备工艺。采用正交试验考察法,优选出最佳提取工艺,用高效凝胶色谱法,筛选最佳酶解条件。鹿角盘胶原蛋白的最佳制备工艺为:料液比(g/mL)1:10,水煮5 h,提取4次,胰蛋白酶与底物(鹿角盘粉)比是1:10 000,酶解时间为1.5 h。验证试验结果表明,鹿角盘胶原蛋白收率为22.31%,蛋白含量为66.32%。