文冠果果壳总皂苷的提取工艺优化及抗氧化、抗肿瘤活性评价

文冠果果壳是文冠果生产过程中产生的废弃物,该研究以文冠果果壳为原料,采用单因素结合响应面法优化超声细胞破碎法提取文冠果果壳总皂苷的工艺条件,以DPPH·清除率、ABTS+·清除率及Fe2+螯合能力为指标评价总皂苷提取物的抗氧化活性,用CCK-8法分析总皂苷提取物对HepG2和A549细胞增殖的抑制效果。结果表明,文冠果果壳总皂苷最佳提取条件为：乙醇体积分数65%、液料比35:1（mL/g）、超声功率200 W、超声时间35 min、超声温度50 ℃,总皂苷得率可达14.95 mg/g。抗氧化实验结果表明总皂苷提取物浓度为0.05 mg/mL,对DPPH·、ABTS+·的清除率分别为91.35%、82.63%;浓度为0.10 mg/mL,对Fe2+螯合能力为88.01%;总皂苷提取物浓度与ABTS+·清除能力、Fe2+螯合能力呈极显著相关（p<0.01）。抗肿瘤结果表明总皂苷提取物浓度为 120 μg/mL,作用于HepG2细胞和A549细胞的细胞存活率分别为10.95%和2.04%,其IC50值分别为79.30 μg/mL和63 μg/mL。综上可知,超声细胞破碎法是一种高效的制备文冠果果壳总皂苷的技术,文冠果果壳总皂苷提取物具有良好的抗氧化、抗肿瘤活性,该研究可为文冠果废弃物的有效开发利用提供方法学借鉴。     

舞花姜根总皂苷的提取工艺及其抗氧化活性

研究舞花姜根中总皂苷的超声提取最佳工艺条件,并评价提取总皂苷的抗氧化活性。在单因素实验基础上,采用3因素3水平响应面实验优化超声提取条件。结果表明:舞花姜根总皂苷的最佳提取工艺参数为:料液比1:30 (g/mL),样品粒度40目,超声提取时间51 min。按此工艺对不同产地舞花姜根总皂苷进行提取,发现务川县和三都县的总皂苷含量相对较高且稳定,含量分别为16.88 mg/g和16.92 mg/g。利用DPPH、ABTS进行抗氧化分析,得出舞花姜根提取物浓度与抗氧化活性呈正比;不同产地的舞花姜根总皂苷提取物对自由基清除率不同;且清除率强弱与舞花姜根中提取的总皂苷含量呈正相关,验证了其抗氧化能力与总皂苷含量有关。     

响应面法优化地皮菜总三萜提取工艺及其抗氧化活性

以青海地皮菜为原料,研究其总三萜提取工艺条件及其抗氧化活性,通过单因素试验和Box-Behnken响应面试验进行超声波辅助提取地皮菜总三萜工艺优化,并测定地皮菜总三萜对DPPH自由基、ABTS+自由基、羟自由基的清除能力及总还原能力,以评估其体外抗氧化活性。最终得出的最佳提取条件为料液比1∶20（g/mL）、乙醇浓度95%、提取温度60℃、提取时间50 min,在此条件下测得地皮菜总三萜的得率为1.38%,与模型预测值1.41%基本相符。抗氧化试验结果表明,当地皮菜总三萜质量浓度为1.60 mg/mL时,DPPH自由基清除率达到最大,为48.43%;ABTS+自由基清除率随质量浓度的增加而增加,当浓度为3.20 mg/mL时,ABTS+自由基清除率达到最大,为81.43%;羟自由基清除率与浓度无明显线性关系;地皮菜总三萜的总还原能力随着浓度的增加呈增大趋势,当浓度为3.20 mg/mL时,总还原能力达到1.818。以上结果表明,响应面法对地皮菜总三萜的提取条件优化合理可行,且地皮菜总三萜具有较高的抗氧化活性。     

忧遁草多糖提取工艺优化及抗氧化活性研究

以提取温度、料液比和提取时间为影响因素,忧遁草多糖提取率为评价指标,采用Box-Behnken响应面法优化提取工艺。结果表明,忧遁草多糖的最佳提取工艺条件为料液比1:31 (g/mL),提取温度92℃,提取时间1.6h,此时多糖提取率为3.40%。抗氧化活性试验表明,忧遁草多糖具有良好的ABTS自由基和DPPH自由基清除效果,并具有一定的羟基自由基清除能力。     

微波超声协同提取金盏菊皂苷工艺及其抗氧化性研究

以金盏菊为原料,采用单因素结合响应面法对微波超声协同提取金盏菊皂苷工艺进行优化,并以ABTS+自由基清除率、DPPH自由基清除率和总还原能力评价其抗氧化活性。结果表明,液料比、乙醇浓度、微波功率和超声时间对金盏菊皂苷提取率的影响显著,优化后的工艺条件为液料比19∶1（mL/g）,乙醇浓度56%,微波功率410 W,超声时间9.2 min,金盏菊皂苷提取率平均值为21.298 mg/g,与理论预测值相差仅为2.6%,说明由该模型优化的最佳提取工艺条件稳定可靠,具有实际应用价值。体外抗氧化试验结果表明,金盏菊皂苷对ABTS+自由基和DPPH自由基均具有良好的清除能力,且具有一定的还原能力。     

洋葱黄酮的提取条件及抗氧化活性的研究

为研究超声波辅助乙醇提取洋葱黄酮最佳工艺和抗氧化活性.采用正交实验,研究乙醇体积分数、超声时间、浸提时间和料液比对洋葱黄酮提取量的影响,测定了在最优条件下提取洋葱黄酮的还原力和对羟自由基的清除率.结果表明,洋葱黄酮最佳提取工艺条件为乙醇浓度70％,超声波处理时间5min,浸提时间1.5h,料液比1∶15(m∶V),该条件下洋葱黄酮的提取量为40.17mg/g.0.5mg/mL洋葱黄酮与0.5mg/mL Vc还原力相等;洋葱黄酮对羟自由基的清除率随着溶液浓度(0～1.2mg/mL)的增加而增大,浓度为1.2mg/mL的黄酮溶液清除率为32.42％.实验表明洋葱黄酮提取物具有较强的抗氧化活性,可作为抗氧化剂或为研制功能食品提供资源.     

辣木籽多糖的内部沸腾法提取及抗氧化活性北大核心CSCD

为加快辣木籽多糖提取速率,以辣木籽为原料,采用内部沸腾法提取其中的多糖。采用单因素实验和响应面实验对内部沸腾法提取辣木籽多糖的工艺条件进行优化,通过自由基清除活性考察其抗氧化活性。结果表明:最优提取工艺条件为解吸剂乙醇体积分数20%、蒸馏水提取温度74℃、提取时间5 min、料液比1∶27,在此条件下辣木籽多糖得率可达12.5%;质量浓度为5.0 mg/mL的辣木籽多糖对羟自由基的清除率为91.1%,质量浓度为1.0 mg/mL的辣木籽多糖对DPPH自由基的清除率为38%;质量浓度为5.0 mg/mL的辣木籽多糖对超氧阴离子自由基的清除率为59.8%。综上,辣木籽多糖具有一定的抗氧化活性。     

苦瓜皂苷的制备及体外抗氧化活性研究

为优化苦瓜中皂苷的提取条件及其抗氧化活性,以皂苷得率为考察指标,研究了提取温度、时间、乙醇浓度和料液比对苦瓜皂苷提取的影响,并采用正交试验确定最佳条件;以苦瓜皂苷对超氧自由基、羟基自由基的清除率作为考查指标,研究苦瓜皂苷的体外抗氧化活性。确定了最佳提取工艺条件为：最佳提取乙醇浓度为70％,料液比为1:15,温度55℃,提取时间2.5h。0.4mg/mL苦瓜皂苷对超氧自由基的清除率达到92.5％,对羟基自由基(·OH)的清除率达到78.9％     

忧遁草茎中黄酮类化合物的提取工艺优化及比较

为筛选适合忧遁草茎中黄酮类化合物的提取方法,以得率为评价指标,在单因素基础上,通过正交试验优化纤维素酶法和有机溶剂浸提法提取忧遁草茎中的黄酮类化合物工艺;采用ABTS自由基法、DPPH自由基法和还原力法比较提取物的抗氧化性。结果表明,纤维素酶辅助提取忧遁草茎中黄酮类化合物的最佳工艺条件为:乙醇浓度80%(v/v)、温度55 ℃、pH5.0、底物质量浓度30 g/L、酶用量300 U/g、时间1.5 h;有机溶剂浸提的最佳工艺条件为:乙醇浓度80%(v/v)、温度55 ℃、料液比1:15 (g/mL)、时间2.5 h。纤维素酶辅助提取忧遁草茎中的黄酮类化合物得率为(1.32±0.11)%(w/w),高于有机溶剂浸提法的(1.05±0.08)%(w/w)。2种提取方法得到的黄酮化合物均具有较强的抗氧化性,其中纤维素酶辅助提取物清除ABTS自由基和DPPH自由基的半抑制浓度(IC50)值分别为(1.94±0.04)、(0.178±0.013)mg/mL,低于有机溶剂提取物的(2.76±0.05)、(0.200±0.015)mg/mL,说明酶法提取物的抗氧化性强于有机溶剂浸提法。忧遁草茎中黄酮类化合物提取采用纤维素酶辅助提取较为适宜。     

响应面法优化九头狮子草总黄酮提取工艺及其抗氧化活性研究

以乙醇水溶液为溶剂，采用超声波辅助法提取九头狮子草总黄酮，在单因素试验基础上，通过响应面试验优化提取工艺，并对其DPPH·、ABTS⁺·清除率及总抗氧化能力进行研究。结果表明：最佳提取工艺为乙醇体积分数30%、液料比50∶1 (mL/g)、超声时间35 min,超声温度30℃,在此条件下总黄酮得率为1.60%,与理论预测值接近，相对标准偏差RSD为2.43%。当九头狮子草总黄酮质量浓度为100μg/mL时，DPPH·、ABTS⁺·清除率分别为65.3%、74.1%,IC₅₀为79.9、45.3μg/mL,而当其质量浓度为300μg/mL时，总抗氧化能力为0.476mmol/L,说明九头狮子草总黄酮具有一定的抗氧化性能。     

农杆菌介导转化黑曲霉条件优化及脂肪酶表达

优化了农杆菌介导转化黑曲霉的方法,优化条件包括共培养材料、农杆菌种类、诱导剂浓度、共培养时间、共培养温度以及共培养时农杆菌的菌体浓度。结果表明,农杆菌介导转化黑曲霉的最适条件为107个/mL不萌发的新鲜孢子与OD_(600)培养至0.9～1.0的农杆菌以1∶1的比例混合后,在乙酰丁香酮浓度为200μmol/L的IM平板上,23℃避光培养48 h后进行转膜,转化子个数可达到(60±5)个转化子/10~6个孢子,且阳性率达到90%以上。并且构建了同源黑曲霉脂肪酶的组成型和诱导型启动子表达载体,通过优化后的农杆菌介导转化方法转化至黑曲霉中,利用罗丹明橄榄油平板对产酶转化子进行筛选鉴定,并获得了阳性克隆。     

TAT-SOD在长期保藏的重组毕赤酵母中表达的条件优化

TAT-SOD是TAT蛋白转导结构域与SOD的融合蛋白质。作者以2007年构建的产TAT-SOD重组毕赤酵母菌为出发菌株,通过摇瓶实验研究不同温度、初始pH、诱导剂浓度等因素对蛋白质表达的影响。通过比色分析法测定菌体浓度、超氧阴离子自由基清除法测定酶活、SDS-PAGE分析目的蛋白质TAT-SOD的浓度;并采用定量PCR法分析表达菌株的目的基因的mRNA变化规律,从而研究长期保藏重组毕赤酵母菌株表达TAT-SOD的适合性及其条件优化。研究结果表明,摇瓶发酵的最佳条件下（YPDM培养基,体积分数1.0%诱导剂浓度,诱导温度30.0 ℃,初始pH值7.0）,发酵液上清酶活水平为753 U/mL,是未优化初始酶活水平的5.1倍,其中pH值优化使TAT-SOD表达水平提高到原始值的3.4倍。7.0的初始诱导pH值的mRNA水平是对照组pH 4.0的3.5倍。这些结果说明,长期保藏的重组毕赤酵母菌株仍然适合表达TAT-SOD,发酵条件会对毕赤酵母的TAT-SOD表达造成显著影响,影响表达水平的最主要因素是目的蛋白质的mRNA水平变化。     

链霉菌SG17代谢产物对玉米黄曲霉的抑制作用及其稳定性分析

黄曲霉是玉米贮存过程中主要的污染之一,直接影响食品以及饲料的品质和安全.利用微生物及其代谢产物进行生物防治具有广泛的应用价值.作者以前期筛选获得的SG17菌株为材料,通过形态学观察、生理生化检测及16S rRNA序列分析,初步确定为链霉菌;平板对峙实验显示该菌株能够显著抑制黄曲霉等多种病原真菌的生长,具有一定的广谱性;...     

红曲色素高产菌的诱变选育与发酵优化

红曲红是一种由红曲霉生产的具有较高药用及营养价值的天然色素。为提高红曲红液态发酵产量,利用常压室温等离子体诱变技术(ARTP)对紫红曲霉（Monascus purpureus）LBBE进行诱变并优化了发酵条件。确定ARTP诱变条件为：红曲霉孢子浓度107个/mL、通气量10 SLM、功率80 W、诱变时间42 s。上述诱变条件下,经10轮诱变,红曲霉正向突变率从44.6 %降至3.8%,突变株LBBE-15的红曲红色价达到1 244 U/mL,较出发菌株提高1.26倍。红曲霉培养条件优化确定为：接种体积分数7%、硫酸锰1 g/L、初始pH 3.7。优化后的红曲红色价达到1 376 U/mL。50 L罐分批发酵显示,红曲红色价为642 U/mL。该研究结果为实现工业大规模生产提供了数据参考。     

红茶菌发酵制备特色酸香型烟草浸膏

为制备一种酸香型烟草浸膏,首先优化了烟草浸提液提取工艺,通过红茶菌发酵浸提液并浓缩获得烟草浸膏,经GC-MS分析了浸膏的香味成分,结合感官评价其在卷烟中应用效果。结果显示：提取工艺经优化后,烟草浸提液提取率和糖质量分数分别达到55.34%、13.14 g/L;与未发酵浸膏相比,发酵烟草浸膏香味成分含量和种类均有所增加,其中苯乙酸、乳酸、3-甲基丁酸等酸性香味成分增加明显,且巨豆三烯酮、β-大马酮、β-紫罗兰酮、麦芽酚等烟草特征香味成分含量均有提高;发酵浸膏在卷烟中应用,可有效提高卷烟的吸食品质,香气质和香气量也明显提高,且效果优于未发酵制备的烟草浸膏。经浸提优化和生物发酵,获得了一种具有酸香特征的烟草浸膏,为制备有特征香味的烟草浸膏提供了借鉴。     

利用CRISPR-Cas9和Cre/loxP系统删除34个非必需基因构建L-苏氨酸生产菌

L-苏氨酸是一种被广泛应用于食品、饲料及医药等领域的必需氨基酸。大肠杆菌以葡萄糖为碳源合成L-苏氨酸的过程中,一些非必需基因的转录和翻译会消耗碳源。利用CRISPR-Cas9和位点特异性重组系统Cre/loxP,敲除了大肠杆菌MG1655基因组中puuE和ynaI区间的34个非必需基因（共30.372 kb）,获得了突变菌MG003,然后通过高表达L-苏氨酸合成途径中关键基因thrA*、thrB和thrC以及L-苏氨酸转运酶编码基因rhtA和rhtC提高L-苏氨酸产量。与对照菌MG1655/pFW01-thrA*BC相比,MG003/pFW01-thrA*BC生长加快,L-苏氨酸产量提高25.5%;MG003/pFW01-thrA*BC-rhtA的L-苏氨酸产量提高了43.3%;MG003/pFW01-thrA*BC-rhtC的L-苏氨酸产量提高了74.5%。研究结果表明,大肠杆菌基因组中34个非必需基因的删除有利于其提高L-苏氨酸合成能力。     

枯草芽孢杆菌产D-阿洛酮糖3-差向异构酶的发酵优化

D--阿洛酮糖是D--果糖在C-3位的差向异构体,由于较低的热量和与蔗糖相似的甜度,D-阿洛酮糖成为一个具有发展前景的功能性甜味剂。D--阿洛酮糖 3-差向异构酶（D--psicose 3-epimerase,EC 5.1.3.30,DPEase）能够催化D--果糖生产D--阿洛酮糖,这种生物酶法制备的功能性甜味剂D--阿洛酮糖由于简单的纯化步骤和高产物浓度等优点受到关注。该研究对1株前期构建的枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis 1A751/pUB-P43dpe-dal产DPEase进行了3 L发酵罐水平培养,通过优化溶解氧（DO）、pH、温度、初始碳源质量浓度确定最适发酵条件为：DO为30%、pH 6.0、温度37 ℃、初始葡萄糖质量浓度15 g/L,最高发酵酶活达78.3 U/mL。在此基础上进行补料发酵优化,得到最适补料条件为：在发酵5 h进行补料,碳源补料速率8.0 g/（L·h）,在此条件下,发酵9 h全细胞酶活高达123.0 U/mL。此发酵策略为扩大工业化生产提供了参考。     

基于比较转录组学的多花黄精黄酮类化合物合成基因表达分析

为了解药用植物多花黄精Polygonatum cyrtonema Hua.中黄酮类化合物的生物合成途径,为黄精属植物黄酮类化合物的代谢与调控的分子机制研究提供数据,利用二代高通量测序技术,对分别培养了 3个月和9个月的多花黄精组培苗根茎进行比较转录组学研究.结果显示,经序列组装与功能注释,多花黄精根茎的转录组数据经拼接...     

蛹虫草及其下脚料水提物联合壳聚糖涂膜对西葫芦保鲜效果的影响

为研究壳聚糖涂膜以及蛹虫草及其下脚料水提物对生鲜果蔬的保鲜作用，探究了质量分数为1%的壳聚糖（Chi）、蛹虫草水提物（CM）、蛹虫草下脚料提取物（SS）、壳聚糖复合蛹虫草水提物（Chi+CM）和蛹虫草水提物复合蛹虫草下脚料提取物（Chi+SS）5种涂膜剂的抗氧化活性和抑菌能力。结果发现Chi+CM复合涂膜剂的DPPH自由基清除能力较好。抑菌圈实验证明，壳聚糖与蛹虫草水提物结合可提高对革兰氏阳性菌的抑制能力。将5种涂膜剂应用于西葫芦后发现，在6 ℃条件下冷藏，蛹虫草水提物联合壳聚糖涂膜能减少西葫芦在储藏期间的质量损失，降低褐变以及延缓硬度下降，保持西葫芦的可溶性固形物和抗坏血酸含量，降低MDA含量及延缓POD和PPO酶活的上升，抑制微生物繁殖。     

耐盐芽孢杆菌R1高效壳聚糖酶异源表达及特性分析

采用同源克隆获得耐盐芽孢杆菌壳聚糖酶基因,并异源表达制备重组耐盐芽孢杆菌壳聚糖酶（CsnBh46）,通过表征分析获得重组CsnBh46酶学特性。重组CsnBh46全长278个氨基酸,三维结构显示其分为上下两个半球,包含9个α螺旋和2个β折叠。在7 L发酵罐中,重组工程菌bh-5的最高酶活力和总蛋白质质量浓度分别为6 375 U/mL和4.3 g/L。纯化后的重组CsnBh46最适反应pH和温度分别为6.0和60 ℃,金属离子Mn²⁺、Ca²⁺和Mg²⁺对重组CsnBh46具有激活作用。重组CsnBh46最适底物为脱乙酰度95%胶体壳聚糖。重组CsnBh46能够高效水解胶体壳聚糖并且根据反应时间可以定向制备不同聚合度壳寡糖。本研究为CsnBh46产业化应用奠定基础。