重庆地区烟叶辣椒脉斑驳病毒的检测与鉴定

为确定重庆烟区烟草叶片上出现黄化斑点、枯斑等症状的病原,进而制定出科学的综合防治措施,对采自重庆市涪陵和巫溪烟区与北碚试验田的18份烟叶样品进行了病毒种类检测与鉴定。根据病毒外壳蛋白基因序列设计了特异性引物,采用RT-PCR扩增及BLAST序列对比分析,结果表明:涪陵烟区烟叶上出现黄化斑点、枯斑等症状的样品中检测出烟草花叶病毒（Tobacco mosaic virus,TMV）和辣椒脉斑驳病毒（Chilli veinal mottle virus,ChiVMV）,检出率分别为54.55%和100%;巫溪烟区样品中检测出TMV和马铃薯Y病毒（Potato virus Y,PVY）,检出率分别为100%和66.67%;北碚烟草试验田病叶样品中检测出ChiVMV,检出率为100%。其中,ChiVMV为重庆地区烟草上首次发现。      

云南烟草漂浮苗主要病毒病种类的检测

采用三抗体夹心法和双抗体夹心法对云南省烟草漂浮苗移栽前后样本进行了病毒种类的检测。苗期采集的1400多个样本的检测结果表明:云南省为害烟草漂浮苗的病毒种类主要为烟草普通花叶病毒(TMV),占95%以上;黄瓜花叶病毒(CMV)和马铃薯Y病毒属病毒(包括PVY和TEV等)较少见,占5%以下。感染TMV的育苗池,烟苗带毒率大多比较高(15%~80%);管理良好的育苗棚,烟苗TMV带毒率为零或很低(低于0.5%)。在移栽后团棵期对花叶型病毒病发病率高(20%以上)的取样点采集的697个烟草花叶症状样本的检测结果显示,烟草病毒病害仍以TMV为主,检出率48.1%~100%,CMV和马铃薯Y病毒属病毒较少见,检出率0%~12.2%。因此,漂浮育苗苗期和移栽后大田前期病毒病的综合防治应以TMV为重点。     

枯草芽孢杆菌Tpb55抗烟草普通花叶病毒（TMV）活性研究

利用三生-NN烟测定Tpb55菌悬液对烟草普通花叶病毒(TMV)钝化、预防和治疗作用,结果表明,Tpb55菌悬液对TMV具有较好的钝化、预防和治疗效果,枯斑抑制率分别为96.15%、79.72%和65.71%.选用易感TMV烟草品种K326为试验材料,测定Tpb55对TMV控病作用,结果表明,先接种Tpb55菌液再接种TMV的烟株,发病程度明显低于接种TMV再接种Tpb55菌液的烟株;不论在烟株接种TMV前或后,用Tpb55菌液处理烟株的叶片与只接种病毒烟株相比,叶片内过氧化物酶(POD)、多酚氧化酶(PPO)、苯丙氨酸解氨酶(PAL)活性均显著提高,以接毒前Tpb55菌液处理的烟株活性水平最高.从本试验结果来看,Tpb55具较强的抗TMV活性,可通过直接接触钝化作用及诱导烟草抗病性米抑制TMV侵染.     

部分烟区烟草病毒病病原检测及复合侵染分析

为明确主要烟区烟草病毒病的主要病毒种类,采用抗原直接包被ELISA法对重庆、四川、云南、贵州、河南、陕西和甘肃等省市部分烟区采集的266个烟草病毒病样品进行了检测.结果表明,样品中共检测到马铃薯Y病毒(Potato virus Y,PVY)、烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus,TMV)、黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)、番茄花叶病毒(Tomato mosaic virus,ToMV)及芜菁花叶病毒(Turnip mosaic virus,TuMV)等5种病毒.其中PVY的侵染最普遍,总检出率达75.56%;TMV、CMV、ToMV和TuMV的总检出率分别为65.41%、57.14%、36.84%和34.59%,其中,ToMV和TuMV仅在云南、四川、贵州和重庆样品中检测到.在257个阳性样品中有97个样品受CMV、TMV或PVY单独侵染,其检出率分剔为7.39%、13.23%和17.12%;其余样品均受2种以上病毒复合侵染,其中55.63%的样品中检测到5种病毒复合侵染.田间烟草样品表现出复杂的病毒病症状类型.这些结果说明田间烟草病毒复合侵染现象严重,PVY已成为当前我国烟区的优势毒原.     

重庆丰都烟区田间烟草病毒病及其Dot-ELISA检测

为明确重庆市丰都烟区田间烟草病毒病的发生情况,开展了病毒病调查,并于还苗期、伸根期、旺长期和成熟期共采集病毒病样品117份,利用TMV、CMV、PVY、TEV、PVX、TuMV和BBWV-2等7种病毒的特异性抗体对其进行Dot-ELISA检测。调查发现,病毒病症状主要包括花叶、畸形、坏死斑、脉坏死、矮化和蚀纹等类型。9个调查点烟草病毒病的发病率在28%~84%,病情指数最低为6.67,最高为60.89。Dot-ELISA检测结果表明,还苗期样品未检出病毒;伸根期没有检测到PVX;旺长期和成熟期均检测到7种病毒,其中TMV和CMV的检出率较高,其次为TuMV和PVY,PVX的检出率较低。此结果表明,烟草病毒病在丰都烟区发生较普遍,且TMV和CMV为田间烟草病毒病的优势毒源。     

TMV接种后烟株中病毒相对含量研究

为了更有效地防治烟草普通花叶病,在烟草苗期、团棵期、旺长期接种烟草普通花叶病病毒(TMV),并分期取样,应用TAS-ELISA法对样品进行检测。结果表明,接种TMV后不同烟株器官中病毒相对含量的高低顺序为:团棵期接种的叶>苗期接种的叶>团棵期接种的根>苗期接种的根>苗期接种的茎>团棵期接种的茎>旺长期接种的茎>旺长期接种的叶>旺长期接种的根;不同接种时期烟株病毒相对含量的高低顺序为:团棵期接种>苗期接种>旺长期接种。接种TMV后花和蒴果都带病毒,花器官病毒相对含量的高低顺序为:花冠>子房>花萼>雄蕊>雌蕊。     

河南烟草主要病毒发生种类及侵染类型分析

为进一步明确河南烟区主要病毒种类及侵染类型,2020年从河南9个烟区分别采集疑似烟草普通花叶病毒(TMV)、黄瓜花叶病毒(CMV)、马铃薯Y病毒(PVY)和烟草蚀纹病毒(TEV)侵染的烟草样本共407份,分别利用上述4种病毒的特异性引物进行单重RT-PCR病原检测。检测结果表明,河南烟区病毒病样本的总检出率为98.28%,其中,检出率最高的是CMV为89.19%,其余依次为TMV 63.88%、PVY 28.99%和TEV 24.32%。侵染类型分为单一病毒侵染和复合病毒侵染,单一病毒侵染率为23.34%,该侵染类型中CMV所占比例最高,为16.71%;复合病毒侵染率为74.94%,复合病毒侵染类型中CMV+TMV所占比例最高,为36.86%,其次分别为CMV+TMV+PVY和CMV+TEV+PVY两种侵染类型,侵染比例均是7.62%。因此,CMV是2020年河南烟区的优势病毒,田间侵染以复合病毒侵染为主,侵染类型主要有CMV+TMV、CMV+TMV+PVY及CMV+TEV+PVY。     

两株根际促生细菌对TMV的生防作用研究

烟草花叶病毒（Tobacco mosaic virus,TMV）是危害烟草的主要病毒之一,其寄主范围广、侵染力和抗逆性强,尚无有效的抗病毒药剂。利用植物根际促生细菌（PGPR）对寄主的促生以及对病毒的钝化作用进行病毒病早期预防,是控制TMV的有效途径。本文对筛选到的两株PGPR菌株Sa和Sk进行了菌株鉴定及促生和防病作用研究。结果表明:Sa为芽孢杆菌属（Bacillus sp.）、Sk为假单胞菌属（Pseudomonas sp.）。在霍格兰氏营养液中添加Sa、Sk的发酵上清液,能显著促进烟苗的根系发育和茎叶生长;“半叶法”试验结果显示Sa、Sk的发酵上清液能在体外钝化TMV,并且Sa的粗蛋白溶液、去蛋白上清、蛋白失活后的粗蛋白溶液对TMV的抑制效果分别为85.2%、83.1%、36.2%,说明Sa的发酵物中对TMV起钝化作用的活性物质主要包括蛋白和非蛋白两类;Sk的粗蛋白溶液、去蛋白上清抑制TMV的效果分别为88.0%、0%,说明Sk的发酵物中对TMV起钝化作用的活性物质主要为蛋白类。利用TMV30B侵染性克隆,观察到Sa、Sk发酵上清液能显著抑制病毒的初侵染。室内栽培烟株喷施Sa、Sk发酵上清后,对TMV的防效分别为27.71%和18.55%。芽孢杆菌Sa生防效果好于Sk,具备抗病毒剂的开发潜力。      

青岛烟区马铃薯Y病毒株系鉴定及系统传导特性

为明确引起青岛试验田烟草脉坏死及花叶的PVY的发生规律、分子进化和系统传导特性,通过病毒病害表型,发病率和病情指数明确青岛试验田病毒病害流行规律;利用MEGA7构建系统发育树鉴定PVY青岛分离物的株系;通过q RT-PCR,western blotting和PVY-GFP荧光明确PVY侵染烟株的传导路径;通过不同叶位、不同症状病叶取样,利用q RT-PCR检测PVYCPm RNA相对含量,明确显症和隐症叶片的病毒含量差异,以及TMV、CMV、PVY单独、两者混合、三者混合侵染时的干扰或协生作用。结果显示：烟株成熟期,PVY与TMV和CMV混合发生严重,PVY分离物为N:O株系,未突破va基因抗性。在侵染早期,病毒从接种叶沿叶脉进入茎,开始双向运输时,先向根部移动,进而到达苗端;再扩散至上部叶,较慢移动至下部叶;最后伴随烟株生长持续向两端新生部位运输。侵染中期病株上部叶隐症现象显著,病叶症状与病毒浓度呈正相关。烟田中后期,PVY与TMV和CMV混合侵染,病毒间的干扰和协生作用导致症状复杂多变。研究结果有助于提高品种抗性鉴定试验的准确性和药效试验的靶标性。     

陕西烟草病毒病毒原鉴定及种群区系分布

2001年在陕西省烟区采集了165个样品,经过生物学测定、血清学反应(琼脂双扩散法和酶联免疫吸附法)和电镜观察,鉴定出5种为害烟草的病毒。其中烟草普通花叶病毒(TMV)34份、烟草蚀纹病毒(TEV)32份、黄瓜花叶病毒(CMV)31份、马铃薯Y病毒(PVY)16份、烟草环斑病毒(TRSV)4份,分别占总标样的20.61%、19.39%、18.79%、9.7%和2.4%。TMV和CMV、TMV和TEV、TMV和PVY复合侵染各为35、2和11份,分别占总标样的21.21%、1.2%和6.67%。TEV和PVY在某些烟区有明显上升的趋势。     

烟梗草炭在烟草漂浮育苗基质中的应用

为探索废弃烟梗作为烟草漂浮育苗基质原料的可行性,用自制的烟梗草炭(TSP)为烟草栽培基质,进行了烟草漂浮育苗试验.结果表明:TSP 1号(烟梗草炭50％+天然草炭50％)、TSP 2号(烟梗草炭50％+椰糠50％)、TSP 3号(烟梗草炭50％+天然草炭25％+椰糠25％)均可替代天然草炭用于烟草漂浮育苗基质中,其中TSP 3号替代的效果较好,烟苗综合长势优于天然草炭配方基质;烟梗草炭l号和2号替代天然草炭育苗,其烟苗长势均与天然草炭配方基质相当.因此,利用废弃烟梗替代天然草炭作为烟草漂浮育苗基质的方法可行.     

Tobacco Sorter和Tobacco Scan 6000烟草异物剔除系统的比较

对TobaccoSorter和TobaccoScan 60 0 0系列的烟草异物剔除系统进行了对比 ,从系统组成、烟叶单层化及稳定传送装置、图像获取方式及识别算法、异物的剔除方法、照明光源等方面进行了详细的比较和分析 ,由此看出 :随着相关技术的快速发展 ,应用线性CCD摄像机作为检测装置的异物剔除系统将具有越来越明显的优势。     

烟草膨胀及对其化学成分的影响研究进展

综述了烟草膨胀的目的和作用、烟草膨胀方法的分类,和各种烟草膨胀方法以及膨胀对烟草化学成分的影响。     

山东烟区主要病毒的株系鉴定

1995年至1997年间,从山东烟区各主要产烟县(市)采集病毒样品,经鉴定、分类、分离、纯化后,对纯化物进行了生物学特性、病毒粒体形态、血清学关系等方面的比较,从而明确了山东烟区主要烟草病毒病病原物的株系:烟草黄瓜花叶病毒的普通株系(CMVc)、坏死株系(CMVTN)、黄化株系(CMVY);烟草普通花叶病毒的普通株系(TMVC)、坏死株系(TMVN)、黄化株系(TMVY)、环斑株系(TMVRS);烟草马铃薯Y病毒的普通株系(PVYO)、坏死株系(PVYN);烟草蚀纹病毒的轻症株系(TEVM)、重症株系(TEVs)。其中烟草黄瓜花叶病毒的普通株系(CMVC)、烟草普通花叶病毒的普通株系(TMVC)、烟草马铃薯Y病毒的坏死株系(PVYN)、烟草蚀纹病毒的重症株系(TEVS)是优势株系。烟草蚀纹病毒(TEV)的株系毒力分化属国内首次报道。      

原子荧光光谱法测定烟草中的硒

建立了氢化物发生-原子荧光光谱(HG_AFS)法测定烟草及烟草制品中微量硒的方法,即先用4体积HNO3+1体积HClO4混合酸消化烟草样品,而后用HG_AFS仪测定消化液中的硒含量。该法的线性范围为0~250μg/L,检出限0.18μg/L,RSD<6.0%,回收率为92.5%~97.5%。     

烟草干燥研究进展

综述了国内外50年来有关烟草干燥的研究进展,包括烟草热物性、烟草干燥原理、干燥过程中的物理、化学变化等。认为随着科学技术的发展和试验及分析手段、方法的完善,对烟草干燥进行数值模拟计算以及开展对烟草干燥过程中香味物质和有害物质的变化研究,将是今后烟草干燥研究的重要方向之一。     

烟草蚀纹病毒的鉴定和主要特性研究

采用人工摩擦接种和桔斑分离技术，从陕西烟田普遍表现叶脉坏死的自然感病烟草（NC89）叶片上分离到蚀纹病毒源，经鉴别寄主测定，琼脂免疫双扩散试验和病叶超薄切片的电镜观察，初步鉴定出所分离的毒源为烟草蚀纹病毒（TobaccoEtchVirus－TEV）。病毒粒子呈弯曲线状，多为723nm×11．5nm，在细胞质中有风轮状和其它形状的内含体。TEV在烟草病汁液中的3种物化特性为：钝化温度为56℃，稀释限点为10－4，在室温条件下体外存活期为7～9天。将提纯的病毒样品进行有关理化分析试验。结果显示：病毒粒子的沉降系数为S20,w=153S,A260/280=1.15,A=2.56.粒子外壳蛋白为单一多肽，分子量为3.1×104。核酸为单分子RNA，分子量为3．2×104。桃蚜传播所需的最短获毒和传播时间均为10S，最长持毒时间为2h，表明桃蚜可进行非持久性传毒。     

发酵香料烟烟籽生产烟用香料研究

研究了发酵温度、时间、通气材料和加水量等因素对微生物菌株P1发酵香料烟烟籽的影响。优化实验结果显示:将选定的通气材料加入到烟籽中,于28℃发酵10d,并在第4天时补加相当于0.5倍烟籽质量的水,烟籽中的油脂降解率最高。对发酵前后烟籽中的挥发性化学成分进行了GC/MS分析。共鉴定出43种成分,其中26种重要香味物质在未发酵烟籽中不存在,同时发酵烟籽中的烟碱含量显著降低。加香实验结果显示,当将发酵烟籽的提取物加到卷烟中后,卷烟的刺激性降低,吸味明显改善。     

连续流动分析法测定烟草中的蛋白质

先用0.5%醋酸煮沸样品15min,抽滤,滤渣用0.5%醋酸洗涤,再将滤渣置于消化管中,加入0.1g HgO1、.0g K2SO4和5mL浓硫酸消化,然后采用连续流动分析法测定烟叶样品中的蛋白质含量。方法的RSD为1.1%,回收率在98%~102%之间。并采用该法测定了部分烟叶的蛋白质含量。     

催化光度法测定烟草微量锰

本文以二甲苯兰FF (XfleneCfanoleFF)作吸光物质,使用分光光度法研究了烟草中的微量元素锰的简易测定法。该方法以高温灰化样品,加适量盐酸和H₂O₂制备样液,在pH=4±0.2,反应温度60℃的HAc (0.56mol/L)--NaAc (0.1mol/L)缓冲溶液中,以邻菲罗啉(Phen)作活化剂,以盐酸羟胺作阻抑剂,无需加掩蔽剂。利用锰对高碘酸钾氧化二甲苯兰FF使之褪色的催化效应,溶液由亮兰变为棕黄,反应前后,在618nm处的吸光度显著下降,其下降值与一定量的钙(Ⅱ)浓度成正比,从而测定烟草中锰的含量。本法的线性范围为0~11.0ug/27ml,回收率在97%~104%。