鲢鱼鱼鳞胶原蛋白肽抗氧化作用研究

研究鲢鱼鱼鳞胶原蛋白肽-SCSCP-的抗氧化活性. 依次采用截留分子量为5, 3, 1ku的超滤膜对鲢鱼鱼鳞胶原蛋白肽进行分离分级,通过6种体外抗氧化指标评价各超滤组分抗氧化活性的强弱,分子量小于1ku的SCSCP-IV体外抗氧化活性最强-P＜005- ;氨基酸组成分析表明,SCSCP-IV中总疏水性氨基酸和精氨酸含量均较高,推测可能与其较高的抗氧化活性有关;建立高脂动物模型,考察SCSCP-IV在大鼠体内的抗氧化作用,结果显示SCSCP-IV能显著提高大鼠血清中抗氧化酶超氧化物歧化酶与谷胱甘肽过氧化物酶活力以及降低丙二醛含量-P＜0 05- ,表明SCSCP-IV在大鼠体内具有较好的抗氧化作用;结果表明SCSCP在体外和体内均具有良好的抗氧化活性.     

草鱼鱼鳞胶原蛋白提取及活性肽制备研究

以草鱼鱼鳞为原材料,探讨其胶原蛋白酸-酶组合提取工艺,并进一步研究相应抗氧化活性肽和血管紧张素转换酶抑制(ACEI)活性肽的制备方法。结果表明,草鱼鱼鳞胶原蛋白提取的最优工艺为:乙酸浓度0.3 mol/L、乙酸提取固液比1∶15(g/m L)条件下低温下提取24 h;离心后剩余残渣再按1∶10(g/m L)的比例浸入浓度为2%的胃蛋白酶溶液中低温下提取48 h;在该条件下鱼鳞胶原蛋白提取得率可达49.58%。以草鱼胶原蛋白粗提液为原料,制备抗氧化活性肽的最优工艺为:控制胶原蛋白浓度12.5 mg/m L,按10∶1(体积比)的比例加入浓度为4%的木瓜蛋白酶,60℃下酶解75 min,所得酶解液对ABTS~+自由基的抑制率可达45.7%;制备ACEI活性肽的最优工艺为:控制胶原蛋白浓度20 mg/m L,pH值调节为4.0,每10 m L加入6 000 U的酸性蛋白酶,37℃酶解3 h,所得酶解液对血管紧张素转换酶(ACE)的抑制活性可达98.8%。本研究结果,有望为水产品加工副产物的资源化利用提供参考。     

鱼鳞抗氧化肽/淀粉活性涂膜的制备工艺

以TVB-N为优化指标和冷藏鱼肉为保鲜对象,采用响应面法进行优化鱼鳞抗氧化肽与淀粉活性涂膜的制备工艺,建立了淀粉浓度、VC浓度和抗氧化肽浓度对制备鱼鳞抗氧化肽与淀粉活性涂膜的数学模型,优化最佳制备工艺。结果表明:淀粉浓度和抗氧化肽浓度对TVB-N的影响显著,VC浓度对TVB-N的影响不显著,影响的大小顺序为抗氧化肽浓度淀粉浓度VC浓度;淀粉浓度与抗氧化肽浓度的交互作用对TVB-N影响显著,VC浓度与淀粉浓度、VC浓度与抗氧化肽浓度的交互作用对TVB-N的影响不显著;活性涂膜的最佳制备工艺为淀粉浓度3.42%、VC浓度0.50%和抗氧化肽浓度1.22%,此条件下TVB-N为15.78mg/100g;空白组、不添加抗氧化肽组、最优组的对照试验表明用该模型制备鱼鳞抗氧化肽与淀粉活性涂膜是可靠的。     

胶原蛋白与胶原蛋白肽的抗氧化关系初探

胶原蛋白的抗氧化活性尚未见报道,而其水解产物胶原蛋白肽的抗氧化活性报道较多。为研究造成该差异性的原因,分别采用T-AOC法、盐酸羟胺法、DPPH法和ABTS法测定胶原蛋白模拟肽、胶原蛋白肽混合物及其组成氨基酸脯氨酸和甘氨酸的抗氧化活性,并用圆二色光谱法测定CMP和CP的二级结构。试验结果表明:(1)T-AOC法中,CMP,CP和各种氨基酸都不具有抗氧化活性;(2)在盐酸羟胺法中,只有CP具有抗氧化活性;(3)在DPPH法和ABTS法中,肽和氨基酸都具有一定的抗氧化活性,且抗氧化顺序为CPHyproCMP≥ProGly;(4)圆二色光谱法结果表明,CMP具有胶原蛋白形成稳定的3股螺旋结构所必须的α-螺旋,而CP的α-螺旋结构不明显。这些结果提示:(1)胶原蛋白本身稳定的3股螺旋结构可能是其抗氧化活性不明显的原因,而胶原蛋白肽的抗氧化活性的发挥有赖于肽键对氨基酸残基的连接作用以及氨基酸侧链对自由基的易接近性;(2)不同抗氧化测定方法对胶原蛋白肽相关分子的表征效果不同,其中DPPH法和ABTS法的灵敏度相对较高。     

一种以鱼鳞为原料的多产物联产工艺的建立与优化

鱼鳞中含有丰富的胶原和钙,可以作为生产胶原类产品和补钙产品的原料。为了提高鱼鳞的综合利用效果,解决鱼类加工过程中因副产物污染产生的环境问题,本研究以鱼鳞为原料,研究联合生产有机酸钙、胶原和胶原蛋白肽的工艺。具体地,鱼鳞先经过超声波辅助柠檬酸脱灰制备柠檬酸钙,再采用超声波辅助胃蛋白酶提取胶原,最后将提取胶原后的鱼鳞残渣用于制备胶原蛋白肽,并对所建立的联产工艺进行验证。结果表明,鱼鳞脱灰制备柠檬酸钙的条件为:超声波功率120 W,料液比1∶20 g/m L,柠檬酸浓度6%,处理时间180 min,草鱼鳞、鲢鱼鳞、沙丁鱼鳞的脱灰率分别为97.8%、97.6%、98.1%;胶原提取条件为:超声波功率180 W,料液比1∶20 g/m L,胃蛋白酶用量2000 U/g,处理时间8 h,草鱼鳞、鲢鱼鳞、沙丁鱼鳞胶原溶出率分别为40.1%、42.2%、56.2%;胶原制备条件为:底物浓度5%,胃蛋白酶用量280 U/g,初始p H2,处理温度65℃,草鱼鳞、鲢鱼鳞、沙丁鱼鳞胶原蛋白肽溶出率分别为91.7%、89.3%、88.9%。从鱼鳞中连续提取制备有机酸钙、胶原和胶原蛋白肽的工艺具有较好的可靠性和稳定性,有望在工业化生产中得到应用。     

鱼鳞抗氧化肽的酶法制备工艺及特性

采用碱性蛋白酶(alcalase)水解草鱼鱼鳞制备鱼鳞抗氧化肽。用单因素及正交试验考察温度、加酶量、底物水平、酶解时间等因素对酶解反应的影响,确定最适条件。以肽得率、水解度和对羟自由基清除率为考察指标,得出酶解草鱼鱼鳞的较佳工艺条件为温度55℃、底物水平10%、加酶量3%、时间5h、pH9.0;此时酶解液中鱼鳞肽得率为55.2%,羟自由基清除率为98.86%;高效液相色谱法测定鱼鳞抗氧化肽的相对分子质量排布,分子质量在1000D以下的占91.8%,等电点为2.6左右,在pH2～12的条件下溶解度均在98%以上,可广泛应用于食品中。     

鲢鱼鱼鳞胶原蛋白的流变特性

研究鲢鱼鱼鳞胶原蛋白的流变特性。采用MCR30高级流变仪和NDJ-8S数字式黏度计测定胶原蛋白溶液的流变特性值并绘制流变曲线。结果表明鲢鱼鱼鳞胶原蛋白溶液为典型假塑性流体;剪切速率、浓度和温度对胶原蛋白溶液的黏度影响较大;当振荡频率小于20 rad/s时,鲢鱼鱼鳞胶原蛋白溶液(1.0%)主要表现为黏性行为;当振荡频率大于20 rad/s时,鲢鱼鱼鳞胶原蛋白溶液(1.0%)主要表现为弹性行为;胶原蛋白发生热变性之后,其流体的弹性行为基本不变而黏性行为下降。     

大口黑鲈鱼皮胶原蛋白肽的制备及抗氧化活性研究

目的：探究酶种类对胶原蛋白肽抗氧化活性的影响。方法：从大口黑鲈(Micropterus salmoides)鱼皮中提取胶原蛋白,采用碱性蛋白酶、中性蛋白酶、木瓜蛋白酶和胰蛋白酶酶解胶原蛋白,得到碱性蛋白酶酶解胶原蛋白肽(APP)、中性蛋白酶酶解胶原蛋白肽(NPP)、木瓜蛋白酶酶解胶原蛋白肽(PP)、胰蛋白酶酶解胶原蛋白肽(TP),比较其总抗氧化活性、还原活性、对DPPH·、·OH 和O-2·清除能力以及亚铁离子螯合能力和脂质氧化抑制活性。结果：4种蛋白酶酶解胶原蛋白肽都具有抗氧化活性,且抗氧化能力与胶原蛋白肽浓度呈正相关,其中APP的抗氧化活性最佳,总抗氧化活性和还原活性分别为1.725和0.958,对DPPH·和O-2·清除率分别为56.35%和38.41%。结论：碱性蛋白酶酶解的胶原蛋白肽抗氧化活性更佳。     

酶解鱼鳞蛋白制备抗氧化肽的研究

以鱼鳞蛋白为原料,采用Neutrase蛋白酶酶解鱼鳞蛋白制备抗氧化活性肽,结合单因素实验筛选关键因子,通过响应面分析法,以·OH自由基的清除率为响应值,确定制备鱼鳞抗氧化活性肽的最佳工艺条件为:酶解时间5h、酶解温度50℃、底物浓度5.51%、pH5.64、酶用量4.12%,该务件下得到的鱼鳞抗氧化活性肽对·OH的清除率达78.82%.     

采用圆二色谱法研究冬夏鲢鱼鳞胶原蛋白的稳定性

采用圆二色谱法,研究比较了冬夏季鲢鱼鳞胶原蛋白的热稳定性。结果表明,对胶原蛋白溶液于30℃,33℃加热时,冬季鱼鳞胶原蛋白发生解螺旋现象,而夏季鱼鳞胶原仍保持完整的三螺旋结构;变性温度曲线显示,夏季样品的变性温度为36℃,而冬季样品出现2个峰值,分别为30℃和34℃。结果表明,夏季鲢鱼鳞胶原蛋白的热稳定性高于冬季胶原蛋白,这种不同可能与冬夏季鲢鱼生长环境温度的差异有关。     

Isolation and identification of antioxidative peptides from porcine collagen hydrolysate by consecutive chromatography and electrospray ionization–mass spectrometry

The porcine skin collagen was hydrolyzed by different protease treatments to obtain antioxidative peptides. The hydrolysate of collagen by cocktail mixture of protease bovine pancreas, protease Streptomyces and protease Bacillus spp. exhibited the highest antioxidant activities on 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH) radicals, metal chelating and in a linoleic acid peroxidation system induced by Fe²⁺. And degree of hydrolysis highly affected the antioxidant properties of the hydrolysates. Four different peptides showing strong antioxidant activity were isolated from the hydrolysate using consecutive chromatographic methods including gel filtration chromatography, ion-exchange chromatography and high-performance liquid chromatography. The molecular masses and amino acid sequences of the purified antioxidant peptides were determined using electrospray ionization (ESI) mass spectrometry. One of the antioxidative peptides, Gln-Gly-Ala-Arg, was then synthesized and the antioxidant activities measured using the aforementioned methods. The results confirmed the antioxidant activity of this peptide, and adds further support to its feasibility as a provider of natural antioxidants from porcine skin collagen protein.     

Purification and identification of antioxidant peptides from grass carp muscle hydrolysates by consecutive chromatography and electrospray ionization-mass spectrometry

Grass carp muscles were hydrolyzed with various proteases (papain, bovine pancreatin 6.0, bromelain, neutrase 1.5MG and alcalase 2.4L) to extract antioxidant peptides. The hydrolysates were assessed using methods of hydroxyl radical scavenging ability and lipid peroxidation inhibition activity. Hydrolysate prepared with alcalase 2.4L was found to have the highest antioxidant activity. It was purified using ultrafiltration and consecutive chromatographic methods including ion-exchange chromatography, multilayer coil high-speed counter-current chromatography, and gel filtration chromatography. The purified peptide, as a potent antioxidant, was identified as Pro-Ser-Lys-Tyr-Glu-Pro-Phe-Val (966.3 Da) using RP-HPLC connected on-line to an electrospray ionization mass spectrometry. As well, it was found that basic peptides had greater capacity to scavenge hydroxyl radical than acidic or neutral peptides and that hydrophobic peptides contributed more to the antioxidant activities of hydrolysates than the hydrophilic peptides. In addition, the amino acid sequence of the peptide might play an important role on its antioxidant activity.     

草鱼蛋白源抗氧化肽的分离及鉴定

利用超滤、离子交换色谱、高效逆流色谱以及凝胶过滤色谱等系列分离纯化技术从草鱼蛋白酶解产物中分离纯化抗氧化活性肽,分离过程中发现相对分子质量1～3kD 的组分抗氧化活性最强,且碱性肽组分的抗氧化活性强于酸性或中性肽组分、疏水性肽组分的抗氧化活性强于亲水性肽组分。最终借助反相高效液相色谱在线连接的电喷雾质谱结合氨基酸分析鉴定出一种抗氧化肽,一级结构序列为Pro-Ser-Lys-Tyr-Glu-Pro-Phe-Val,相对分子质量为966.3D。     

辛辣食物中农药残留检测方法研究- 第1部分: 研究进展

辛辣类食物作为显著味道特色的食物和调味品,普遍为世界各国人们所喜爱。这类作物在种植过程中难免使用农药,其特殊的化学成分会对农药残留检测产生严重干扰。本文对国内外辛辣食物中农药残留检测的净化方法和检测手段进行综述,提取与净化方法主要有固相萃取法、分散固相萃取法、分子印迹固相萃取法、凝胶净化法、微波热处理法、顶空固相微萃取法、搅拌棒萃取法等,分析方法有气相色谱法、气相色谱-质谱法、液相色谱法、液相色谱-质谱法、激光拉曼光谱法等。本文为今后辛辣食物中农药残留分析研究提供参考。     

蓝圆鲹骨骼肌脯氨酸内肽酶的分离纯化及其对胶原肽的作用

以蓝圆鲹为研究对象,探讨脯氨酸内肽酶(Prolyl endopeptidase,PEP)对鱼类肌肉胶原蛋白的作用及其机理。通过硫酸铵分级盐析,DEAE-Sephacel阴离子交换,Phenyl-Sepharose疏水层析和Q-Sepharose阴离子交换,从蓝圆鲹骨骼肌中分离纯化得到一种脯氨酸内肽酶。SDS-PAGE结果显示,PEP的分子量为82 ku,肽质量指纹图谱分析得到16个肽片段,共169个氨基酸残基。片段序列与墨西哥鲷鱼(Neolamprologus brichardi)PEP的同源性达98.8%,证明纯化得到的酶是PEP。PEP的最适温度为35℃,但热稳定性较差;最适p H为6.0,在p H 5.0~7.5之间有较好的稳定性。将PEP与合成的鱼胶原蛋白小肽反应,利用反相高效液相色谱对产物进行分离,电喷雾质谱分析结果显示PEP的水解位点在脯氨酸残基的羧基端。以上结果表明,鱼类肌肉中的PEP能够协同金属蛋白酶,通过切割脯氨酸残基进一步降解胶原小肽从而参与到鱼肌肉胶原蛋白的新陈代谢中,是鱼死后参与胶原蛋白降解的重要酶类。     

松仁清蛋白抗氧化肽的分离纯化及结构鉴定

利用碱性蛋白酶酶解松仁清蛋白制备高抗氧化活性肽,通过超滤、SephadexG-25、SephadexG-15及反相高效液相色谱对抗氧化肽进行分离纯化,并采用电喷雾串联质谱进行结构鉴定。经筛选获得高抗氧化活性肽苯丙氨酸-苯丙氨酸-脯氨酸-酪氨酸（FFPY）和酪氨酸-亮氨酸-脯氨酸-苯丙氨酸（YLPF）,分子质量分别为572.67 Da和538.65 Da。对FFPY和YLPF进行固相合成,纯度达到99.16%和99.91%,氧自由基吸收能力分别为7 329.63 μmol/g和2 835.47 μmol/g。     

烟草中有害金属元素的检测技术概述

从烟草样品的前处理方法和检测方法两方面综述了烟草中有害金属的检测进展。前处理方法包括干灰化法、酸消化法、微波消解、固相萃取、电热蒸发、悬浮进样技术等方法。检测方法包括原子光谱法、分光光度法、液相色谱法、电感耦合等离子体质谱法和中子活化法等。作者简述了各种方法的优缺点,展望了其它有害金属检测方法在烟草中的应用。     

气相色谱法分析共轭亚油酸异构体

有许多种测定共轭亚油酸各异构体相对含量的方法 ,如气相色谱法、银离子高效液相色谱法、气质联用和核磁共振法等 ,其中气相色谱法最为简便快速。本研究选择气相色谱法用于共轭亚油酸各异构体的分析。结果表明 ,气相色谱法可用于共轭亚油酸中主要异构体的相对含量的测定     

抗菌肽的功能及生产研究进展

为进一步了解抗菌肽的研究现状,以期为抗菌肽的纯化鉴定、生产和应用提供理论依据,对抗菌肽的功能,纯化鉴定方法,人工合成和基因工程表达进行了综述。抗菌肽不仅具有广谱的抗菌活性且有抗癌、抗病毒、促进伤口愈合等作用,抗菌肽经乙酸提取,反相液相色谱纯化是较常见的方法,抗菌肽的人工合成多采用固相合成,基因重组一般包括三个内容：抗菌肽的基因结构分析,抗菌肽的基因表达调控及互补脱氧核糖核酸（cDNA）编码,抗菌肽的基因表达系统。     

多酚类化合物检测分析方法研究进展

摘要：多酚类化合物是广泛存在于植物中的一类酚羟基化合物, 具有抗氧化、清除自由基、抑制癌症、降低血糖和血脂、延缓衰老、增强免疫力等功能, 其应用和开发价值很高。由于多酚类物质组成复杂, 结构不稳定, 易氧化, 对其检测技术提出了更高的要求。近年来, 光谱、色谱和质谱法技术不断发展和进步, 使其检测方法更先进、更灵敏、更稳定、更可靠。本研究在检索大量文献基础上, 综述了近年来国内外多酚类化合物检测分析方法, 对目前主要的检测分析技术光谱法(分光光度法、原子吸收光谱法、近红外光谱法)、色谱法(高效液相色谱法、气相色谱法)、质谱法(高效液相色谱-质谱法、气相色谱-质谱法、超高效液相飞行时间质谱法)进行对比, 旨在比较各种检测技术的优劣, 为多酚类化合物检测技术开发提供参考。