RP-HPLC测定虫草菌粉中核苷类成分

采用高效液相色谱法测定虫草菌粉中核苷类成分,尿苷、鸟苷、腺苷及腺嘌呤能很好分离,其优化的色谱条件为:AlltimaC1 8(2 5 0mm×4 .6mm ,5 μm)色谱柱,乙腈-水(V/V =4 :96 )为流动相,流速为1 .0ml/min ,检测波长为2 6 0nm。该方法灵敏度高、定量准确、重现性好、回收率高(98.7%～1 0 1 .5 %) ,适合用于虫草菌粉中核苷类成分的分析。虫草菌粉中尿苷、鸟苷、腺嘌呤和腺苷的含量分别为1 0 .5 2mg/g ,8.5 6mg/g ,0 .70 8mg/g和1 .79mg/g ,其测定RSD范围为0 .5 1 %～1 .30 %(n =5 )。     

虫草头孢菌粉提取物对乳鼠心肌细胞博动节律异常的影响

目的:研究虫草头孢菌粉提取物对乳鼠心肌细胞博动节律异常的影响。方法:以氯化钙和异丙肾上腺素诱发博动节律异常的心肌细胞为模型组,分别以维拉帕米和普萘洛尔作阳性对照,溶剂为阴性对照,记录给药前后心肌细胞的博动频率和节律。结果:虫草头孢菌粉乙醇提取物(Cs-E)、虫草头孢菌粉乙醇提取物的乙酸乙酯萃取物(Cs-E-Et)和虫草头孢菌粉乙醇提取物的正丁醇萃取物(Cs-E-Bu)对于分别由氯化钙、异丙肾上腺素诱发的乳鼠原代培养心肌细胞正性频率作用和节律失常均有明显的改善效应。结论:虫草头孢菌粉乙醇提取物的乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物是抑制心肌细胞博动节律异常的有效部位。     

人工培育蝉花虫草的抗肿瘤活性

以天然蝉花虫草生药为对照,以中国仓鼠卵巢肿瘤（Chinese hamster ovary,CHO）细胞株为模型,采用刃天青染色法检测人工培育蝉花虫草的抗肿瘤活性。结果表明：人工培育蝉花虫草和天然蝉花虫草生药都具有抗肿瘤活性,且活性成分均为中等极性化合物。对人工培育蝉花虫草中的抗肿瘤活性成分进行分离制备,得到两种化合物,命名为化合物1和化合物2。化合物1经鉴定为虫草素,化合物2经纯度验证为纯品,活性验证结果发现当其质量浓度为50 μg/mL时,对CHO细胞抑制率高达（94.55±2.33）%。     

蛹虫草子实体中抗氧化活性化合物的分离纯化

以1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH)自由基清除活性为指导对蛹虫草子实体中的抗氧化活性化合物进行了分离纯化。对蛹虫草子实体经甲醇浸提后获得的甲醇提取物,再进行硅胶柱色谱分离得到一个具有较强抗氧化活性的组分CM9,组分CM9利用反相高效液相色谱法进行活性指导下的分离得到抗氧化活性化合物CM9-1。该化合物采用薄层色谱和高效液相色谱法进行纯度检测发现此为纯品化合物,液相色谱-质谱分析结果表明该化合物相对分子质量为430,分子式为C22H22O9。该物质在质量浓度为1.0 mg/m L时对0.4 mg/m L的DPPH自由基试剂的清除率为(73.67±0.29)%。     

蛹虫草及其培养基中主要核苷类成分的分析比较

采用高效液相色谱法测定虫草中的核苷类成分,优化后的色谱条件为YMC-Polyamine 柱(250mm × 4.6mm,5μm);采用梯度洗脱,流动相：乙腈- 水(V/V)：0～15min 为90:10,15～20min 为86.5:13.5,20～30min 为75:25,30～35min 为70:30;流速：1mL/min;柱温：30℃;检测波长：259nm;进样量：10μL。结果表明：胸腺嘧啶、虫草素、尿嘧啶、腺苷、腺嘌呤、尿苷、鸟嘌呤、次黄嘌呤均能得到较好分离,该方法稳定性好、精密度高、重现性好,适用于虫草中的核苷类成分的分析。经分析发现,蛹虫草子实体核苷类物质组成大致相似,但含量差异非常显著,同时发现蛹虫草培养基残基及固体发酵产物中虫草素含量较高,其他核苷类成分很少,因此认定蛹虫草培养基残基及固体发酵产物是非常优良的分离纯化虫草素的原料。     

山茱萸中生物活性物质的分离、鉴定及其神经保护作用

研究山茱萸乙醇提取物中生物活性成分的化学组成及其对神经的保护作用。采用正相常压硅胶、Sephadex LH-20凝胶、大孔吸附树脂、闪式低压正反相硅胶和氰基、反相高压液相等色谱方法对显示具有神经保护活性的组分进行分离纯化,根据核磁共振谱、质谱,同时结合已知文献数据对比鉴定化合物结构;再采用H 2 O 2诱导的SH-SY5Y细胞氧化损伤模型对分离鉴定的化合物进行体外神经保护活性测定。结果表明,从山茱萸显示神经保护活性的组分中分离鉴定了9个化合物,分别为7-β-莫诺苷(1)、7-β-O-甲基莫诺苷(2)、7-α-O-甲基莫诺苷(3)、金吉苷(4)、cornolactones D(5)、pollenfuran A(6)、threo-2,3-bis(4-hydroxy-3-methoxyphenyl)-3-ethoxypropan-1-ol(7)、5-羟甲基糠醛(8)和3,4-二羟基苯甲酸(9);其中化合物pollenfuran A(6)和threo-2,3-bis(4-hydroxy-3-methoxyphenyl)-3-ethoxypropan-1-ol(7)为首次从山茱萸属植物中分离得到,化合物cornolactones D(5)为首次从山茱萸中分离得到;化合物7-β-莫诺苷(1)、7-β-O-甲基莫诺苷(2)、7-α-O-甲基莫诺苷(3)具有神经保护活性。     

迷迭香中抑制NLRP3炎症小体活性成分的发现

迷迭香的抗炎活性成分已有多篇文献报道归结于其中所含的鼠尾草酸、鼠尾草酚和熊果酸等,但将迷迭香乙醇提取物除去上述3种含量较多的成分后,剩余组分仍显示出较好的抗炎活性,提示迷迭香中存在没被发现的抗炎活性成分。在体外抑制NLRP3炎症小体抗炎活性的筛选结果指导下,利用各种色谱技术和波谱学方法,从上述抗炎活性组分中,分离分析鉴定了3个黄酮类化合物:4′,5-二羟基-7-甲氧基黄酮(1)、 5-羟基-7,4′-二甲氧基黄酮(2)和5-羟基-7,8,4′-三甲氧基黄酮(3)。对分离得到的3个化合物进行体外抑制NLRP3炎症小体的验证,均显示一定的抑制活性。其中化合物1的抑制活性最强,与阳性对照MCC950(炎症小体抑制剂)相当。化合物3是首次从迷迭香属植物中分离得到。     

番石榴叶乙酸乙酯萃取物化学成分研究

目的：寻找番石榴叶乙酸乙酯萃取物中具有降糖活性的功能成分。方法：采用硅胶、羟丙基葡聚糖凝胶柱层析与溶剂重结晶法进行单体分离纯化;通过分析化合物的理化性质、核磁共振谱（nuclear magnetic resonancespectrum,NMR）、质谱（mass spectrum,MS）数据进行结构鉴定;建立降糖脂肪细胞模型评价主要单体的降糖活性。结果：从番石榴叶乙酸乙酯萃取物中共分得14 个单体化合物,分别鉴定为：金丝桃苷（化合物1）、异槲皮苷（化合物2）、槲皮素-3-O-β-D-木糖苷（化合物3）、广寄生苷（化合物4）、番石榴苷（化合物5）,槲皮素-3-O-(2’’-O-没食子酰基）-α-L-阿拉伯吡喃糖苷（化合物6）,槲皮素（化合物7）、没食子酸乙酯（化合物8）、齐墩果酸（化合物9）、β-谷甾醇（化合物10）、isocaryolan-9-one（化合物11）、(-)-epiglobulol（化合物12）、t-cadinol（化合物13）和muurola-4,10(14)-dien-1-ol（化合物14）。降糖脂肪细胞模型测定结果表明,5 种主要黄酮苷均具有降糖活性,其中以番石榴苷和广寄生苷降糖效果最好,40 μmol/L浓度下促葡萄糖摄取值分别达到了（1.74±0.076）、（1.81±0.029）mmol/L。结论：化合物6、8、11～14为首次从该植物中分得,化合物11为一新的天然产物;番石榴苷和广寄生苷可能为番石榴叶主要降糖活性成分。     

药食用真菌提取物抗氧化活性研究

为了探究猴头菌、蜜环、灵芝、虫草头孢和虫草被孢等5种药食用真菌菌粉中小分子的抗氧化能力,利用正己烷、氯仿、乙酸乙酯和甲醇等4种有机溶剂按极性提取各菌粉,建立了5种利用96微孔板快速检测物质的抗氧化指标的方法,并比较了不同菌粉提取物的抗氧化活性。结果表明,5种菌粉提取物对·O2-均有着良好的清除能力,虫草被孢和猴头菌提取物对DPPH·清除率比较高,在质量浓度达到8 mg/m L时的清除率分别达到94.91%和92.26%。灵芝氯仿提取物在质量浓度为8 mg/m L时,·OH清除率达到90%,接近VC的清除能力。     

虫草头孢菌粉粗多糖的理化性质和含量测定研究

目的:研究虫草头孢菌粉粗多糖的理化性质并测定其多糖含量。方法:用斐林试剂检测其还原性;用硫酸-苯酚法测多糖的含量。结果:本方法制备的虫草头孢粗多糖没有还原性,不含蛋白质成分;粗多糖中多糖的含量为35.37%。     

细脚拟青霉活性成分分析及清除自由基活性研究

以冬虫夏草生药为对照品,对细脚拟青霉RCEF0441的深层发酵菌丝体和发酵液冻干粉进行活性成分分析。结果表明：RCEF0441 菌丝体和发酵液冻干粉中粗蛋白和氨基酸总量均明显高于冬虫夏草生药;菌丝体中多糖、麦角甾醇、甘露醇及腺苷等多种物质的含量亦高于冬虫夏草生药;RCEF0441 深层发酵菌丝体和发酵液冻干粉中还含有丰富的对人体健康非常重要的Zn、Fe、Ca 等元素。用二苯代苦味肼基自由基(DPPH)-TLC 法和DPPH 酶标仪法对RCEF0441菌丝体和发酵液冻干粉的甲醇- 乙酸乙酯混合液提取物清除DPPH自由基活性进行分析,发现两种提取物均具有较强的清除自由基活性,在浓度为5.0mg/ml,于37℃下保温10min 时,两种提取物对0.4 mg/ml 的DPPH自由基的清除率分别达到61.28% 和81.12%。     

虫草液体发酵的非营养条件优化与免疫功能研究

采用中心组合设计,以菌丝体生物量为考察指标对虫草液体发酵的非营养条件进行优化,同时对菌丝体提取物的免疫功能进行了探讨。研究结果表明:当培养温度为22.64℃、pH为6.18、培养时间为7.36d时,菌丝体产量达到21.73g/L;并发现其水提取物在50～200μg/mL的剂量范围内,能够提高巨噬细胞吞噬能力和促进小鼠脾细胞的增殖,具有一定的免疫调节作用,是一种潜在的具有免疫调节功能的食品资源。     

人工虫草多糖对小鼠CCl4肝损伤的保护作用

目的：研究人工虫草不同部位多糖及固体培养残基多糖对小鼠CCl4肝损伤的保护作用。方法：取健康的雄性小鼠60只,按体质量随机分成6组：正常对照组、急性CCl4肝损伤模型组、虫草子实体多糖组、菌丝体多糖组、固体培养残基多糖组和阳性药物组,每组10只。用紫外分光光度法测定比较血清中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)含量,测定肝组织中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、总蛋白(TP)含量,并对肝细胞的组织形态学进行观察。结果：虫草多糖子实体、菌丝体和固体培养残基多糖组,能显著抑制CCl4引起的小鼠血清ALT、AST活性及肝脏MDA含量的升高,以及肝脏SOD含量的降低,并能显著减轻CCl4引起的肝小叶内的灶性坏死。结论：虫草多糖子实体、菌丝体和固体培养残基多糖组对小鼠化学性肝损伤具有保护作用,人工虫草子实体多糖效果最优,其次为菌丝体多糖,再次为固体培养残基多糖。     

细脚拟青霉深层发酵菌丝体核苷类成分分析

以已知核苷为标样,并以冬虫夏草生药作对比,利用反相高效液相色谱法对细脚拟青霉RCEF0441 深层发酵菌丝体中核苷类化学成分进行分析。结果表明,细脚拟青霉RCEF0441 菌丝体中主要含有胞苷、尿苷、鸟苷、肌苷、胸苷和腺苷6 种核苷,其中胞苷的含量为冬虫夏草生药的3 倍左右,肌苷和鸟苷的含量则分别是冬虫夏草生药的7 和9 倍左右,尿苷和腺苷的含量也显著高于对照品冬虫夏草生药(p<0.05)。     

冬虫夏草菌丝体深层发酵技术的研究

从野外采集的冬虫夏草菌种,经鉴定属巴西虫草(CordycepsbrasiliensisHenn),分离、纯化后获得GC-88-4菌株,利用该菌株进行深层发酵培养,成功地培养出巴西虫草菌丝体粉.实验结果证实:巴西虫草菌丝体粉所含有效成份D-甘露醇、麦角甾醇、虫草多糖、氨基酸、微量元素等的含量与天然冬虫夏草(CordycepssinensisSacc)相近,有提高实验动物免疫功能等药理作用.     

富硒冬虫夏草发酵工艺优化

采用冬虫夏草作为富硒的载体,啤酒糟为基质,进行富硒冬虫夏草液态深层发酵试验,研究冬虫夏草对无机硒的生物转化能力.利用正交试验设计,对富硒冬虫夏草液态深层发酵条件如摇床转速、接种量、pH等进行了优化.结果表明,冬虫夏草能在含有低质量浓度亚硒酸钠（10～25mg/L）的培养基中生长,并在菌丝体内富集硒,最佳发酵工艺为摇床频率180r/min、培养10d的条件下,装液量50mL/250mL,pH值为7.0,接种量15％,温度20℃,亚硒酸钠质量浓度25 mg/L,啤酒糟质量浓度20 mg/L.在此优化的发酵条件下,富硒冬虫夏草菌丝体总富硒量为5808.20 μg/L.     

人工冬虫夏草不同部位氨基酸含量测定

目的：检测人工冬虫夏草不同部位中氨基酸的含量。方法：使用氨基酸分析仪,以茚三酮为衍生试剂,采用柱后衍生法测定人工虫草不同部位中氨基酸含量。结果：在蛹虫草的固体培养残基、子实体、菌丝体中都至少含有17种常见氨基酸和8种必需氨基酸,总氨基酸含量分别为8.32%、21.68%和23.19%,必需氨基酸的含量分别为3.74%、8.11%和8.88%。结论：人工虫草中不但子实体含有腺嘌呤、腺苷和虫草素,菌丝体及固体培养残基也含有这3种主要核苷类物质,具有进一步开发利用价值。     

虫草与富硒虫草多糖的体外抗氧化活性

采用Fenton法和邻苯三酚自氧化法测定虫草和富硒虫草多糖对.OH、O2-.和H2O2的清除率。结果表明:虫草多糖对O-2.和H2O2的清除能力依次为富硒虫草胞外多糖>富硒虫草胞内多糖>虫草胞外多糖>虫草胞内多糖,而对.OH的清除能力依次为:富硒虫草胞外多糖>虫草胞外多糖>富硒虫草胞内多糖>虫草胞内多糖;当100mg/L多糖溶液添加量分别高于80、40、90μL时,各组多糖对.OH、O2-.和H2O2 3种自由基的抑制率均可高于50%。     

古尼拟青霉小孢变种核苷类成分分析

以已知核苷为标样,并以冬虫夏草生药作对比,利用反相高效液相色谱法对古尼拟青霉小孢变种RCEF0864菌丝体和发酵液中核苷类化学成分进行分析,结果表明古尼拟青霉小孢变种RCEF0864菌丝体中主要含有胞苷、尿苷、鸟苷、肌苷、环磷腺苷和腺苷等6种,其中腺苷和尿苷的含量均为冬虫夏草生药的3倍左右,肌苷和鸟苷的含量则分别是冬虫夏草生药的7倍和10倍左右,尿苷的含量也高于对照品冬虫夏草生药。古尼拟青霉小孢变种RCEF0864发酵液中主要含有尿苷、胞苷、胸苷、肌苷、环磷腺苷和腺苷等6种核苷类物质,其中,腺苷和胞苷的含量均高于对照品冬虫夏草生药。